第二篇植物、植物产品检验检疫 第五章植物、植物产品检疫鉴定 第一节：概述 检疫鉴定是检验检疫物是否附带、混杂、污染有害生物，并对发现有害生物 进行种类鉴定，为判定检疫物是否合格或为做检疫处理提供科学依据。检疫鉴定 力求准确、快速，这一工作的技术性、政策性强，必须认真按照有关检疫规程和 鉴定技术的标准、方法进行。 检疫鉴定主要对现场检疫取回的代表样品和病、虫、杂草籽样本，在实验室 作进一步检验鉴定。检验鉴定的方法和技术，因病不同、虫、杂草的种类和不同 的植物、植物产品而异。常采用下列一种或几种方法进行检验鉴定：过筛检验、 解剖检验、透视检验、染色检验、同功酶电泳检验、比重检验、漏斗分析检验、 洗涤检验、直接镜检、分离培养和接种检验、吸水低检验、荧光显微检验、切片 检验、萌发检验、试植检验、鉴别寄主接种检验、噬菌体检验、血清学检验、免 疫电镜检验、以及近年来分子生物学技术在植物病原体检测鉴定中的应用方法， 如单克降抗体技术、多聚酶链体反应技术(Polymerase Chain Reaction PCR)等。 对病、虫、杂草种类的检验鉴定，应结合有害生物的分布、寄主、主要鉴定特征、 生活习性、传播途经等。具体检验方法可参考《中国进出境植物检疫手册》第七 章“检疫性有害生物的检验与鉴定”，及有关检疫鉴定的标准和资料。根据现场 和室内检验，对检出的病、虫、杂草最后作出正确的种名鉴定。本章介绍植物病、 虫、杂草的常用检验方法。 第二节、昆虫检验 (一)直接检验 取样携回室内进行过筛检验，按种子粒形状和大小，选用不同孔径的规格筛。 将需用的筛层，按筛孔大小顺序套好（小筛孔放在下面），将样品放入上层 选筛内（不宜过多，约达筛层高度的23），套上筛盖，电动或手动回旋转动一定 时间后，按筛层将筛上物和筛下物分别倒入白瓷盘中检查，检出昆虫和螨类，同 时还可检出虫粒、病粒、杂草籽和其它夹杂物。若检查时室温低于10℃，最下 层筛出物须在20-30℃下处理15-20分钟，促使害虫活动，再进行检查。必要时 计算含量。计算公式：每kg含量=1000×发现数量/试样重量(g)。 (二)隐蔽害虫的检验 1染色检查。用不同的化学药品进行染色，根据颜色程度区分有无害虫，并 109
第二篇 植物、植物产品检验检疫 109 第五章 植物、植物产品检疫鉴定 第一节：概述 检疫鉴定是检验检疫物是否附带、混杂、污染有害生物，并对发现有害生物 进行种类鉴定，为判定检疫物是否合格或为做检疫处理提供科学依据。检疫鉴定 力求准确、快速，这一工作的技术性、政策性强，必须认真按照有关检疫规程和 鉴定技术的标准、方法进行。 检疫鉴定主要对现场检疫取回的代表样品和病、虫、杂草籽样本，在实验室 作进一步检验鉴定。检验鉴定的方法和技术，因病不同、虫、杂草的种类和不同 的植物、植物产品而异。常采用下列一种或几种方法进行检验鉴定：过筛检验、 解剖检验、透视检验、染色检验、同功酶电泳检验、比重检验、漏斗分析检验、 洗涤检验、直接镜检、分离培养和接种检验、吸水低检验、荧光显微检验、切片 检验、萌发检验、试植检验、鉴别寄主接种检验、噬菌体检验、血清学检验、免 疫电镜检验、以及近年来分子生物学技术在植物病原体检测鉴定中的应用方法， 如单克隆抗体技术、多聚酶链体反应技术（Polymerase Chain Reaction PCR）等。 对病、虫、杂草种类的检验鉴定，应结合有害生物的分布、寄主、主要鉴定特征、 生活习性、传播途经等。具体检验方法可参考《中国进出境植物检疫手册》第七 章“检疫性有害生物的检验与鉴定”，及有关检疫鉴定的标准和资料。根据现场 和室内检验，对检出的病、虫、杂草最后作出正确的种名鉴定。本章介绍植物病、 虫、杂草的常用检验方法。 第二节、昆虫检验 （一）直接检验 取样携回室内进行过筛检验，按种子粒形状和大小，选用不同孔径的规格筛。 将需用的筛层，按筛孔大小顺序套好（小筛孔放在下面），将样品放入上层 选筛内（不宜过多，约达筛层高度的 2/3），套上筛盖，电动或手动回旋转动一定 时间后，按筛层将筛上物和筛下物分别倒入白瓷盘中检查，检出昆虫和螨类，同 时还可检出虫粒、病粒、杂草籽和其它夹杂物。若检查时室温低于 10℃，最下 层筛出物须在 20-30℃下处理 15-20 分钟，促使害虫活动，再进行检查。必要时 计算含量。计算公式：每 kg 含量=1000×发现数量/试样重量（g）。 （二）隐蔽害虫的检验 1.染色检查。用不同的化学药品进行染色，根据颜色程度区分有无害虫，并
第二篇植物、植物产品检验检疫 鉴别害虫种类。如检查粮粒中隐蔽的谷象、米象等可将样品放在铁丝网中，先在 30℃水中浸1分钟，再移入1%高锰酸钾溶液中1分钟，然后用清水冲洗或用过 氧化氢硫酸液洗涤20-30秒。在扩大镜下挑粒面有直径约0.5毫米左右黑斑点的 籽粒，再进行剖检。豆类可用1%碘化钾或2%碘酒染色1-1.5分钟，再移入0.5% 氢氧化钠或氢氧化钾溶液中20-30秒，取出用水冲洗30秒，如粒面有1-2毫米 直径的黑圆点，则内部可能隐藏豆象 表昆虫检验的过筛规格 品种 筛径规格(mm) 层数 备注 花生、玉米、大豆、 3.52.51.5 13 圆孔筛 豌豆、蓖麻籽 小麦、大麦、高粱、 1.75×20或2 12 长孔或圆孔筛 大米 5~1.5 谷子、芝麻、苏籽 2.0~1.0 1~2 圆孔筛 小米 面粉 42目 绢筛或铜丝筛 2.比重检查。根据有害籽粒和正常籽粒比重不同，用盐溶液漂检。检查谷象 可将种子倒入2%硝酸铁溶液搅拌，静置后被害粒浮在表面。检查豆象可用18 8%的食盐水漂检。比重检查亦适用于检出线虫瘿、菌核和杂草籽等。 3.解剖检查。对有明显被害状、食痕或有可疑症状的种子、果实以及其它植 物产品进行剖开检查。 4软X光机检验。将样品摊成薄薄一层，放在软X光机工作台上或铺在胶 带纸上，通过透视和摄影，检查可疑种子内的隐蔽害虫，检出率和检查效率均较 高。 5.饲养检查。将样品定量后置温箱内，定温在25一26℃下饲养3-5天或更 长时间，测定害虫含量并鉴定虫种。 第三节、螨类检验 除可过筛检查外，还可利用螨类喜湿、怕干、畏热的习性，用螨类分离器 以电热加温的方法检出籽粒中的螨类。将样品均匀平铺在分离器的细铜丝纱盘 上，厚度5mm左右，使盘面温度保持在43一45℃，经20分钟后详细检查盘下 的玻璃板（板四周要预先薄涂甘油）上的螨类，并计算其含量。 110
第二篇 植物、植物产品检验检疫 110 鉴别害虫种类。如检查粮粒中隐蔽的谷象、米象等可将样品放在铁丝网中，先在 30℃水中浸 1 分钟，再移入 1%高锰酸钾溶液中 1 分钟，然后用清水冲洗或用过 氧化氢硫酸液洗涤 20-30 秒。在扩大镜下挑粒面有直径约 0.5 毫米左右黑斑点的 籽粒，再进行剖检。豆类可用１%碘化钾或 2%碘酒染色 1-1.5 分钟，再移入 0.5% 氢氧化钠或氢氧化钾溶液中 20-30 秒，取出用水冲洗 30 秒，如粒面有 1-2 毫米 直径的黑圆点，则内部可能隐藏豆象。 表 昆虫检验的过筛规格 品种 筛径规格（mm） 层数 备注 花生、玉米、大豆、 豌豆、蓖麻籽 ３.５～２.５～１.５ １～３ 圆孔筛 小麦、大麦、高粱、 大米 １.７５×２０或２. ５～１.５ １～２ 长孔或圆孔筛 谷子、芝麻、苏籽、 小米 ２.０～１.０ １～２ 圆孔筛 面粉 ４２目 绢筛或铜丝筛 2.比重检查。根据有害籽粒和正常籽粒比重不同，用盐溶液漂检。检查谷象 可将种子倒入２%硝酸铁溶液搅拌，静置后被害粒浮在表面。检查豆象可用１８. ８%的食盐水漂检。比重检查亦适用于检出线虫瘿、菌核和杂草籽等。 3.解剖检查。对有明显被害状、食痕或有可疑症状的种子、果实以及其它植 物产品进行剖开检查。 4.软 X 光机检验。将样品摊成薄薄一层，放在软 X 光机工作台上或铺在胶 带纸上，通过透视和摄影，检查可疑种子内的隐蔽害虫，检出率和检查效率均较 高。 5.饲养检查。将样品定量后置温箱内，定温在 25—26℃下饲养 3—5 天或更 长时间，测定害虫含量并鉴定虫种。 第三节、螨类检验 除可过筛检查外，还可利用螨类喜湿、怕干、畏热的习性，用螨类分离器， 以电热加温的方法检出籽粒中的螨类。将样品均匀平铺在分离器的细铜丝纱盘 上，厚度 5mm 左右，使盘面温度保持在 43—45℃，经 20 分钟后详细检查盘下 的玻璃板（板四周要预先薄涂甘油）上的螨类，并计算其含量
第二篇植物、植物产品检验检疫 第四节、杂草籽检验 粮谷和种子样品过筛后检取筛上物和筛下物中的杂草种子（果实），目测或 借助解剖镜观察，根据其外观形态特征，诸如形状、大小、颜色、斑纹、种脐以 及附属物特征等进行鉴定。应充分注意地理环境、植物本身的遗传变异和种子成 熟度等因素对种子外部形态的影响。必要时，将种子浸泡软化后解剖检查其内部 形态、结构、颜色、胚乳的质地和色泽以及胚的形状、尺度、位置、颜色、子叶 数目等特征。采用上述方法尚不能鉴定的，可进行幼苗鉴定，检查其萌发方式以 及胚芽鞘、上胚轴、下胚轴、子叶和初生叶的形态。幼苗期的气味和分泌物有时 也有重要鉴定价值。必要时，还应进行种植观察，观察花果特征。 第五节、植物病原真菌的检验 (一)直接检验以肉眼或借助手持扩大镜、实体显微镜仔细观察种子、苗 木、果实等被检物的症状。种子类先过筛，检出变色皱缩粒和菌核、菌瘿以及其 它夹杂物。发现明显症状后，挑取病菌制片镜检鉴定。有些带菌种子需用无菌水 浸渍软化，释放出病菌孢子后才得以镜检识别。 带病种子可能表现出霉烂、变色、皱缩、畸型等多种病变，种子表面产生病 原菌的菌丝体，微菌核和繁殖体。例如，大豆紫斑病(Ce rco spo r a k i ku© hii),病种子生紫色斑纹，种皮微裂纹：灰斑病(Cs oji na),病籽生圆 形至不规则形病斑，边缘暗褐色，中部灰色；霜霉菌(Peron0 spora man schur ica),病粒生溃疡斑，内含大量卵孢子。玉米干腐病(Dipl 0 d i a z e a e),病种子变褐色，无光泽，表面生白色菌丝和小黑点状分生 孢子器。 种子过筛后可检出夹杂的菌瘿、菌核、病株残屑和土壤，都需仔细鉴别。小 麦被印度腥黑穗菌侵染后，籽粒局部受害，生黑色冬孢子堆，而普通腥黑穗病菌 和矮腥黑穗病菌为害则使整个麦粒变成菌瘿。形成菌核的真菌很多，常见的有麦 角属(Claviceps s pp.入、核盘菌属(Scle rot in i a spp.)、小菌核 属(Scle r o t ium s pp.入、葡萄孢种(Bo try t is spp.)、丝核菌属 (Rh i z oct on i a spp.)、轮枝孢种(Ve r t icilliumspp.)、核 瑚菌属(Typh山aspp.)以及其它属真菌。菌核可据形状大小、色泽、内部 结构等特征鉴别。 直接检验在室内检验中常用作培养检验之前的预备检查。检出的病瘿，常需 111
第二篇 植物、植物产品检验检疫 111 第四节、杂草籽检验 粮谷和种子样品过筛后检取筛上物和筛下物中的杂草种子（果实），目测或 借助解剖镜观察，根据其外观形态特征，诸如形状、大小、颜色、斑纹、种脐以 及附属物特征等进行鉴定。应充分注意地理环境、植物本身的遗传变异和种子成 熟度等因素对种子外部形态的影响。必要时，将种子浸泡软化后解剖检查其内部 形态、结构、颜色、胚乳的质地和色泽以及胚的形状、尺度、位置、颜色、子叶 数目等特征。采用上述方法尚不能鉴定的，可进行幼苗鉴定，检查其萌发方式以 及胚芽鞘、上胚轴、下胚轴、子叶和初生叶的形态。幼苗期的气味和分泌物有时 也有重要鉴定价值。必要时，还应进行种植观察，观察花果特征。 第五节、植物病原真菌的检验 （一）直接检验 以肉眼或借助手持扩大镜、实体显微镜仔细观察种子、苗 木、果实等被检物的症状。种子类先过筛，检出变色皱缩粒和菌核、菌瘿以及其 它夹杂物。发现明显症状后，挑取病菌制片镜检鉴定。有些带菌种子需用无菌水 浸渍软化，释放出病菌孢子后才得以镜检识别。 带病种子可能表现出霉烂、变色、皱缩、畸型等多种病变，种子表面产生病 原菌的菌丝体，微菌核和繁殖体。例如，大豆紫斑病（Cｅｒcｏｓpｏｒａｋｉｋuc ｈｉｉ），病种子生紫色斑纹，种皮微裂纹；灰斑病（Cｓｏjｉｎａ），病籽生圆 形至不规则形病斑，边缘暗褐色，中部灰色；霜霉菌（Ｐｅｒｏｎｏｓpｏｒａ ｍａｎｓcｈuｒｉcａ），病粒生溃疡斑，内含大量卵孢子。玉米干腐病（Dｉpl ｏｄｉａｚｅａｅ），病种子变褐色，无光泽，表面生白色菌丝和小黑点状分生 孢子器。 种子过筛后可检出夹杂的菌瘿、菌核、病株残屑和土壤，都需仔细鉴别。小 麦被印度腥黑穗菌侵染后，籽粒局部受害，生黑色冬孢子堆，而普通腥黑穗病菌 和矮腥黑穗病菌为害则使整个麦粒变成菌瘿。形成菌核的真菌很多，常见的有麦 角属（Clａvｉcｅpｓｓpp.）、核盘菌属（Ｓclｅｒｏｔｉｎｉａｓpp.）、小菌核 属（Ｓclｅｒｏｔｉuｍｓpp.）、葡萄孢种（Bｏｔｒｙｔｉｓｓpp.）、丝核菌属 （Ｒｈｉｚｏcｔｏｎｉａｓpp.）、轮枝孢种（Vｅｒｔｉcｉllｉuｍｓpp.）、核 瑚菌属（Ｔｙpｈulａｓpp.）以及其它属真菌。菌核可据形状大小、色泽、内部 结构等特征鉴别。 直接检验在室内检验中常用作培养检验之前的预备检查。检出的病瘿，常需
第二篇植物、植物产品检验检疫 作形态观察检测。 (二)洗涤检验用于检测种子表面附着的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢 子、霜霉菌的卵孢子、锈菌的夏孢子以及多种半知菌的分生孢子等。 洗涤检验的操作程序如下： 洗脱孢子：将一定数量的种子样品放入容器内并加入定量无菌水或其它洗涤 液，振荡5一10分钟，使孢子脱离种子，转移到洗涤液中 离心富集：将孢子洗涤液移入离心管，低速离心(1000~1500转/分钟)3~ 5分钟，使孢子沉集在离心管底部。 镜检计数：弃去离心管内的上清液，加入一定量无菌水或其它浮载液，重新 悬浮沉集在离心管底部孢子，取悬浮液，镜检。滴加在血球计数板上，用高倍显 微检查孢子种类并计数，据此可计算出种子的带菌量。 孢子生活力测定：用常规孢子萌发测定法、分离培养法、红四氯唑染色法判 定孢子死活。 (三)荧光显微检验主要适用于检测腥黑粉菌病瘿中冬孢子自发荧光反应 等。如用荧光显微观测法判别小麦矮腥(T ille t i aCon t r ave r s a K ii h n)和小麦网腥(Tille t i acar ies(DC)Yu)冬孢子。其 程序为 日，从菌瘿上刮取少许冬孢子粉至洁净的载玻片上，加适量蒸镏水制成孢子 悬浮液，然后任其自然干燥： b.在干燥并附着于载玻片的孢子上加一滴无荧光浸渍油(Nd=1.516),加覆 盖片： c.置于激发滤光片485nm、屏障滤光片520nm的落射荧光显微镜下，检 测孢子的自发荧光： 每视野照射2-5分钟，以激发孢子产生荧光，并在此时开始计数。全过程 不得超过3分钟。此外，荧光显微观测法也适用于检查向日葵种子是否带有向日 葵霜霉病菌菌丝体（或吸器）。 (四)萌发检验主要适用于鉴别进口小麦中小麦矮腥和小麦网腥等。鉴 于小麦矮腥病瘿和小麦网腥病瘿萌发生理特点的不同，如需进一步鉴定病原，可 根据小麦矮腥病菌在15℃一17℃时不萌发，在5℃光照下需3-5周萌发的特点， 而小麦网腥在以上两种温度下经1-2周后均可萌发的情况，来区别鉴定病原。 112
第二篇 植物、植物产品检验检疫 112 作形态观察检测。 （二）洗涤检验 用于检测种子表面附着的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢 子、霜霉菌的卵孢子、锈菌的夏孢子以及多种半知菌的分生孢子等。 洗涤检验的操作程序如下： 洗脱孢子：将一定数量的种子样品放入容器内并加入定量无菌水或其它洗涤 液，振荡 5～10 分钟，使孢子脱离种子，转移到洗涤液中。 离心富集：将孢子洗涤液移入离心管，低速离心（1000～1500 转/分钟）3～ 5 分钟,使孢子沉集在离心管底部。 镜检计数：弃去离心管内的上清液，加入一定量无菌水或其它浮载液，重新 悬浮沉集在离心管底部孢子，取悬浮液，镜检。滴加在血球计数板上，用高倍显 微检查孢子种类并计数，据此可计算出种子的带菌量。 孢子生活力测定：用常规孢子萌发测定法、分离培养法、红四氯唑染色法判 定孢子死活。 （三）荧光显微检验 主要适用于检测腥黑粉菌病瘿中冬孢子自发荧光反应 等。如用荧光显微观测法判别小麦矮腥（ＴｉllｅｔｉａCｏｎｔｒａvｅｒｓａ Ｋｉｉｈｎ）和小麦网腥（Ｔｉllｅｔｉａcａｒｉｅｓ（DC）Yul）冬孢子。其 程序为： ａ.从菌瘿上刮取少许冬孢子粉至洁净的载玻片上，加适量蒸镏水制成孢子 悬浮液，然后任其自然干燥； b.在干燥并附着于载玻片的孢子上加一滴无荧光浸渍油（Nｄ=1.516），加覆 盖片； c.置于激发滤光片 485ｎｍ、屏障滤光片 520ｎｍ的落射荧光显微镜下，检 测孢子的自发荧光； ｄ.每视野照射 2-5 分钟，以激发孢子产生荧光，并在此时开始计数。全过程 不得超过 3 分钟。此外，荧光显微观测法也适用于检查向日葵种子是否带有向日 葵霜霉病菌菌丝体（或吸器）。 （ 四）萌发检验 主要适用于鉴别进口小麦中小麦矮腥和小麦网腥等。鉴 于小麦矮腥病瘿和小麦网腥病瘿萌发生理特点的不同，如需进一步鉴定病原，可 根据小麦矮腥病菌在 15℃―17℃时不萌发，在 5℃光照下需 3-5 周萌发的特点， 而小麦网腥在以上两种温度下经 1-2 周后均可萌发的情况，来区别鉴定病原
第二篇植物、植物产品检验检疫 (五)吸水纸培养检验主要用于检测在培养中能产生繁殖结构的多种种传 半知菌，包括交链孢属(Altern ar i a spp.)、离蠕孢属(Bipola r is spp.)、葡萄孢属(Bot ry t is spp.)、尾孢属(Cerc0spo r a spp.)、芽枝孢属(Cla d o spor ium spp.)、弯孢霉属(Cruvul a r ia spp.)炭疽菌属(Colle t ot richum spp.)、德氏霉属(D r ech sle ra spp.人镰刀菌属(Fus a r ium spp.)、捷氏霉属(G e r-lach ia spp.入茎点霉属(Ph oma spp.入、喙孢霉属(Rhyn o ho spo r ium spp.)、壳针孢属(S epo r i a s pp.)、匍柄霉属(S t emph ylium spp.)和轮枝孢属(Ve r t icillium spp.)等属种传 真菌 通常用底部铺有三层吸水纸的塑料培养皿或其它适用容器作培养床。先用蒸 馏水湿润吸水纸，将种子按适当距离排列在吸水纸上，再在一定条件下培养，对 多数病原真菌，适宜的培养温度为20-30℃，每天用近紫外光灯或日光灯照明12 小时。培养7-10天后检查和记载种子带菌情况，检查时，用两侧照明的实体显 微镜逐粒种子检查。本法依据种子上真菌菌落的整个形象，即“吸水纸鉴别特征 来区分真菌种类。检查时应特别注意观察种子上菌丝体的颜色、疏密程度和生长 特点、真菌繁殖结构的类型和特征。例如，分生孢子梗的形态、长度、颜色和者 生状态，分生孢子的形状、颜色、大小、分隔数，在梗上的着生特点等。在疑难 情况下，需挑取孢子制片，用高倍镜作精细的显微检查和计测。 吸水纸培养检验法简便、快速，可在较短时间内检查大量种子，是许多种传 半知菌检验的适宜方法，但不能用于检测在培养中不产生有性繁殖体的种类。另 外，植物营养器官的发病部位未产生真菌繁殖体时，常用吸水纸保湿培养诱导孢 子产生，以确切地诊断鉴定。 (六)琼脂培养基培养检验主要用于病植物中病原真菌的常规分离培养， 以获得病原菌纯化培养，进行种类鉴定，也适用于快速检验生长迅速且生成特定 培养特征的种传真菌。常用的琼脂培养基有马铃薯葡萄糖琼脂培养基、麦芽浸汁 琼脂培养基、燕麦粉琼培养基等。在检测特定种类的病原真菌时，还可选用适宜 的选择性培养基 用琼脂培养基法检验种子带菌时，种子先用1-2%次氯酸钠溶液或抗菌素表 面消毒3-5分钟，然后植床于培养基平板上，在适宜温度和光照下培养7-10天 113
第二篇 植物、植物产品检验检疫 113 （五）吸水纸培养检验 主要用于检测在培养中能产生繁殖结构的多种种传 半知菌，包括交链孢属（Ａlｔｅｒｎａｒｉａ ｓpp.）、离蠕孢属（Bｉpｏlａｒ ｉｓ ｓpp.）、葡萄孢属（ Bｏｔｒｙｔｉｓ ｓpp.）、尾孢属（Cｅｒcｏｓpｏ ｒａ ｓpp.）、芽枝孢属（Clａｄｏｓpｏｒｉuｍ ｓpp.）、弯孢霉属（Cｒuvul ａｒｉａ ｓpp.）、炭疽菌属（Cｏllｅｔｏｔｒｉcｈuｍ ｓpp.）、德氏霉属（ D ｒｅcｈｓlｅｒａ ｓpp.）、镰刀菌属（ Fuｓａｒｉuｍ ｓpp.）、捷氏霉属（ Ｇ ｅｒ-lａcｈｉａ ｓpp.）、茎点霉属（Ｐｈｏｍａ ｓpp.）、喙孢霉属（Ｒｈｙｎ ｏｈｏｓpｏｒｉuｍ ｓpp.）、壳针孢属（Ｓｅpｏｒｉａ ｓpp.）、匍柄霉属（Ｓ ｔｅｍpｈｙlｉuｍ ｓpp.）和轮枝孢属（Vｅｒｔｉcｉllｉuｍ ｓpp.）等属种传 真菌。 通常用底部铺有三层吸水纸的塑料培养皿或其它适用容器作培养床。先用蒸 馏水湿润吸水纸，将种子按适当距离排列在吸水纸上，再在一定条件下培养，对 多数病原真菌，适宜的培养温度为 20-30℃，每天用近紫外光灯或日光灯照明 12 小时。培养 7-10 天后检查和记载种子带菌情况，检查时，用两侧照明的实体显 微镜逐粒种子检查。本法依据种子上真菌菌落的整个形象，即“吸水纸鉴别特征” 来区分真菌种类。检查时应特别注意观察种子上菌丝体的颜色、疏密程度和生长 特点、真菌繁殖结构的类型和特征。例如，分生孢子梗的形态、长度、颜色和着 生状态，分生孢子的形状、颜色、大小、分隔数，在梗上的着生特点等。在疑难 情况下，需挑取孢子制片，用高倍镜作精细的显微检查和计测。 吸水纸培养检验法简便、快速，可在较短时间内检查大量种子，是许多种传 半知菌检验的适宜方法，但不能用于检测在培养中不产生有性繁殖体的种类。另 外，植物营养器官的发病部位未产生真菌繁殖体时，常用吸水纸保湿培养诱导孢 子产生，以确切地诊断鉴定。 （六）琼脂培养基培养检验 主要用于病植物中病原真菌的常规分离培养， 以获得病原菌纯化培养，进行种类鉴定，也适用于快速检验生长迅速且生成特定 培养特征的种传真菌。常用的琼脂培养基有马铃薯葡萄糖琼脂培养基、麦芽浸汁 琼脂培养基、燕麦粉琼培养基等。在检测特定种类的病原真菌时，还可选用适宜 的选择性培养基。 用琼脂培养基法检验种子带菌时，种子先用 1-2%次氯酸钠溶液或抗菌素表 面消毒 3-5 分钟，然后植床于培养基平板上，在适宜温度和光照下培养 7-10 天
第二篇植物、植物产品检验检疫 后检查。为便于检测大量种子，多用手持放大镜从培养皿两面观察，依据菌落形 态、色泽来鉴别真菌种类，必要时挑取培养物制片，用高倍显微镜检查。有些种 传真菌在培养中生成特定的营养体和繁殖体结构，可用于快速鉴定。例如，带有 蛇眼病菌(Ph omabe t a e)的甜菜种球，植床于含50mg/kg24-D 的1.6%水琼脂培养基平板上，在20℃，不加光照的条件下培养7天后移去种子， 用实体显微镜由培养皿背面观察菌落，可见由菌丝分化的膨大细胞团。带有颖枯 病菌(S ept or i a no d o rum)的小麦种子用马铃薯葡萄糖琼脂培 养基在15℃和连续光照的条件下培养7天后，种子周围形成大量分生孢子器。 (七)种子分部透明检验主要用于检测大、小麦散黑穗病菌，谷类与豆类 霜霉病菌等潜藏在种子内部的真菌。 该法先用化学方法或机械剥离方法分解种子，分别收集需要检查的胚或种皮 等部位，经脱水和组织透明处理后，镜检菌丝体和卵孢子。以检测大麦种子传带 的散黑穗病菌为例，其操作过程如下：先将种子在加有锥虫蓝的5%氢氧化钠溶 液中浸泡22小时，再将浸泡过的种子用60-65℃的热水冲击或小心搅动，使种胚 分离，并用孔径分别为3.5mm、2.0mm和1.0mm三层套筛收集种胚。种胚用 95%乙醇脱水2分钟，再转移到装有乳酸酚和水(3：1)混合的漏斗中，胚漂浮 在上部，夹杂的种子残屑沉在底部并通过连在漏斗下端的胶管排出。纯净的种胚 用乳酸酚煮沸透明2分钟，冷却后用实体显微镜检查并计数含有散黑穗菌菌丝体 的种胚，计算带菌率。再如大豆疫霉菌以卵孢子和菌丝体存在于种皮内部，种子 检验时应检查种皮里是否带有疫霉菌卵孢子，其检验方法是将大豆种子在 10%KOH或自来水中浸泡一夜，取出后剩下种皮，在解剖镜下制片，然后在显 微镜下检查是否见到大豆疫霉菌卵孢子。 (八)生长检验供试材料种植在经过高压蒸汽灭菌处理或干热灭菌的土 壤、沙砾、石英砂或各种人工基质中，在隔离场所和适宜条件下栽培，根据幼苗 和成株的症状鉴定。检测种子传带的真菌还可用试管幼苗症状检验法，即在试管 中水琼脂培养基斜面上播种种子，在适宜条件下培养，根据幼苗症状，结合病原 菌检查，确定种传真菌种类。生长检验花费时间长，使其应用受到限制。 (九)免疫技术检验用真菌的完全细胞、菌丝体或孢子、破碎的细胞、细 胞的液体过滤液或固体培养物浸提液、以及纯化的蛋白质、酶、毒素和多糖等为 抗原物质，与特异性抗体结合并通过一定的指示剂表现出这种特异反应，达到检 114
第二篇 植物、植物产品检验检疫 114 后检查。为便于检测大量种子，多用手持放大镜从培养皿两面观察，依据菌落形 态、色泽来鉴别真菌种类，必要时挑取培养物制片，用高倍显微镜检查。有些种 传真菌在培养中生成特定的营养体和繁殖体结构，可用于快速鉴定。例如，带有 蛇眼病菌（ Ｐｈｏｍａbｅｔａｅ ）的甜菜种球，植床于含 50ｍｇ/ｋｇ24-D 的 1.6%水琼脂培养基平板上，在 20℃，不加光照的条件下培养 7 天后移去种子， 用实体显微镜由培养皿背面观察菌落，可见由菌丝分化的膨大细胞团。带有颖枯 病菌（ Ｓｅpｔｏｒｉａｎｏｄｏｒuｍ ）的小麦种子用马铃薯葡萄糖琼脂培 养基在 15℃和连续光照的条件下培养 7 天后，种子周围形成大量分生孢子器。 （七）种子分部透明检验 主要用于检测大、小麦散黑穗病菌，谷类与豆类 霜霉病菌等潜藏在种子内部的真菌。 该法先用化学方法或机械剥离方法分解种子，分别收集需要检查的胚或种皮 等部位，经脱水和组织透明处理后，镜检菌丝体和卵孢子。以检测大麦种子传带 的散黑穗病菌为例，其操作过程如下：先将种子在加有锥虫蓝的 5%氢氧化钠溶 液中浸泡 22 小时，再将浸泡过的种子用 60-65℃的热水冲击或小心搅动，使种胚 分离，并用孔径分别为 3.5ｍｍ、2.0ｍｍ和 1.0ｍｍ三层套筛收集种胚。种胚用 95%乙醇脱水 2 分钟，再转移到装有乳酸酚和水（3：1）混合的漏斗中，胚漂浮 在上部，夹杂的种子残屑沉在底部并通过连在漏斗下端的胶管排出。纯净的种胚 用乳酸酚煮沸透明２分钟，冷却后用实体显微镜检查并计数含有散黑穗菌菌丝体 的种胚，计算带菌率。再如大豆疫霉菌以卵孢子和菌丝体存在于种皮内部，种子 检验时应检查种皮里是否带有疫霉菌卵孢子，其检验方法是将大豆种子在 10%KOH 或自来水中浸泡一夜，取出后剩下种皮，在解剖镜下制片，然后在显 微镜下检查是否见到大豆疫霉菌卵孢子。 （八）生长检验 供试材料种植在经过高压蒸汽灭菌处理或干热灭菌的土 壤、沙砾、石英砂或各种人工基质中，在隔离场所和适宜条件下栽培，根据幼苗 和成株的症状鉴定。检测种子传带的真菌还可用试管幼苗症状检验法，即在试管 中水琼脂培养基斜面上播种种子，在适宜条件下培养，根据幼苗症状，结合病原 菌检查，确定种传真菌种类。生长检验花费时间长，使其应用受到限制。 （九）免疫技术检验 用真菌的完全细胞、菌丝体或孢子、破碎的细胞、细 胞的液体过滤液或固体培养物浸提液、以及纯化的蛋白质、酶、毒素和多糖等为 抗原物质，与特异性抗体结合并通过一定的指示剂表现出这种特异反应，达到检
第二篇植物、植物产品检验检疫 测目标菌的目的，常用的方法主要是酶联免疫吸附法。此外还有放射免疫吸附法、 点免疫法、试纸法、免疫印渍法、免疫荧光技术等。抗原选择的是否得当，是决 定这种检测技术成功的关键。 多聚酶链反应技术(PCR)在病原真菌鉴定方面也有应用，如采用PCR技 术来鉴别小麦样品中是否带有小麦印腥黑穗病菌等。 第六节、植物病原细菌的检验 (一)直接检验 植物细菌病害有软腐、环腐、萎蔫、溃疡、疮痂、枝枯、叶斑、组织增生（瘿 瘤、须根)等多种症状。叶片上病斑常呈水渍状，上有细菌溢脓。病部切片镜检 可见细菌溢。检验甘薯盘(Pseudomonassolanacearum),可选取可疑薯块未腐 烂部位，取一小块变色维管束组织，制片镜检，若有细菌溢出现，结合症状特点， 可诊断为甘薯瘟。检验马铃薯环腐病菌(Co ry nebact er iummic h ig a n e n s e pv.s epe d on icum),尚需挑取病薯维管束的乳黄 色菌脓涂片，革兰氏染色测定呈现阳性反应。 某些病原细菌侵染的种子可能表现症状。例如，菜豆普通疫病(Xa n t h0m 0 n a scampe s t r is pv.phas eoli),病种子种脐部变黄褐色。 感染溃疡病菌(Co ry n ebacte r iummich ig a nense pv. m ich i g a n e n s e)的辣椒种子瘦小变褐色。白色种皮的菜豆种子在紫 外光照射下发出浅蓝色的荧光，表明可能受到晕蔫病菌(Ps eud omo n a ss y r i n g a e pv.ph a s eolicola)侵染。但是，并非所有带菌 种子都表现症状，直接检验有很大的局限。即使表现症状的种子，仍需用较精密 的方法进一步鉴定。 (二)细菌分离培养法 常用普通营养培养基、鉴别性培养基或选择性培养基分离纯化提取到的细 菌。在鉴别性培养基上，目标细菌菌落有明确的鉴别特征，选择性培养基则促进 目标菌生长，而抑制其它微生物生长。如：检测菜豆种子传带晕蔫病菌(Ps y r i n g a e pv.ph a s e olicola),可将提取液系列稀释后分别在 金氏B培养基平板上涂布分离，在25℃和无光条件下培养3天后，在紫外光或 近紫外光照射下有蓝色荧光的菌落，为假单胞杆菌，可能是晕蔫病菌，需选择典 115
第二篇 植物、植物产品检验检疫 115 测目标菌的目的。常用的方法主要是酶联免疫吸附法。此外还有放射免疫吸附法、 点免疫法、试纸法、免疫印渍法、免疫荧光技术等。抗原选择的是否得当，是决 定这种检测技术成功的关键。 多聚酶链反应技术（PCR）在病原真菌鉴定方面也有应用，如采用 PCR 技 术来鉴别小麦样品中是否带有小麦印腥黑穗病菌等。 第六节、植物病原细菌的检验 （一）直接检验 植物细菌病害有软腐、环腐、萎蔫、溃疡、疮痂、枝枯、叶斑、组织增生（瘿 瘤、须根）等多种症状。叶片上病斑常呈水渍状，上有细菌溢脓。病部切片镜检 可见细菌溢。检验甘薯瘟（ Pseudomonassolanacearum ）,可选取可疑薯块未腐 烂部位，取一小块变色维管束组织，制片镜检，若有细菌溢出现，结合症状特点， 可诊断为甘薯瘟。检验马铃薯环腐病菌（ Cｏｒｙｎｅbａcｔｅｒｉuｍｍｉc ｈｉｇａｎｅｎｓｅ pv. ｓｅpｅｄｏｎｉcuｍ）,尚需挑取病薯维管束的乳黄 色菌脓涂片，革兰氏染色测定呈现阳性反应。 某些病原细菌侵染的种子可能表现症状。例如，菜豆普通疫病（Xａｎｔｈｏｍ ｏｎａｓcａｍpｅｓｔｒｉｓ pv. pｈａｓｅｏlｉ）,病种子种脐部变黄褐色。 感染溃疡病菌（Cｏｒｙｎｅbａcｔｅｒｉuｍｍｉcｈｉｇａｎｅｎｓｅ pv. ｍｉcｈｉｇａｎｅｎｓｅ）的辣椒种子瘦小变褐色。白色种皮的菜豆种子在紫 外光照射下发出浅蓝色的荧光，表明可能受到晕蔫病菌（Ｐｓｅuｄｏｍｏｎａ ｓｓｙｒｉｎｇａｅ pv. pｈａｓｅｏlｉcｏlａ）侵染。但是，并非所有带菌 种子都表现症状，直接检验有很大的局限。即使表现症状的种子，仍需用较精密 的方法进一步鉴定。 （二）细菌分离培养法 常用普通营养培养基、鉴别性培养基或选择性培养基分离纯化提取到的细 菌。在鉴别性培养基上，目标细菌菌落有明确的鉴别特征，选择性培养基则促进 目标菌生长，而抑制其它微生物生长。如：检测菜豆种子传带晕蔫病菌（ Ｐｓ ｙｒｉｎｇａｅ pv. pｈａｓｅｏlｉcｏlａ ）,可将提取液系列稀释后分别在 金氏 B 培养基平板上涂布分离，在 25℃和无光条件下培养 3 天后，在紫外光或 近紫外光照射下有蓝色荧光的菌落，为假单胞杆菌，可能是晕蔫病菌，需选择典
第二篇植物、植物产品检验检疫 型菌落作进一步的鉴定。检测甘蓝黑腐病病原细菌时，提取液在蛋白胨肉汁淀粉 琼脂培养基在检出的黄色菌落上滴加鲁戈尔试液，若菌落周边培养基不被染色 则表示淀粉己被水解，该菌落可能为目标菌，再用生物学方法或血清学方法鉴定。 (三)生理生化测定 用细菌培养物接种于特定的培养物或检测管，通过产酸、产气、颜色变化等 反应，检测细菌的耐盐性、好氧或厌氧性、对碳素化合物的利用和分解能力、对 氮素化合物的利用和分解能力、对大分子化合物的分解能力等，达到鉴别目的。 如梨火疫病菌(Erwi n i aa mylovo r a(Bur r ill)w i n s l owe t al.)属兼性厌氧，在葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖和甲基葡萄糖苷、 海藻糖中产酸不产气，不能利用木糖和鼠李糖，水解明胶，不水解酪蛋白，不还 原硝酸盐，不产生吲哚和二氧化硫。 Bⅰ010g细菌自动化鉴定系统是美国研制的一种专门用于细菌鉴定的专 家系统，该系统将细菌生理、生化过程的检测与先进的计算机管理手段有机地结 合起来。应用时只需将经过纯化后的病原细菌制成菌悬液，再接种到反应板上， 在4-24小时便可得到准确的鉴定结果。为此该系统的使用，在很大程度上简化 了传统的细菌鉴定程序。目前应用3.70版数据库软件可鉴定567种G-菌和256 种G+菌 (四)致病性测定 用植物病部的细菌溢或分离纯化的细菌培养物接种寄主植物，检查典型的症 状。例如，鉴定甘蓝黑腐病黄单胞杆菌时，用针刺接种甘蓝叶片中肋的切片，切 片置于1.5%水琼脂平板上，在28℃和黑暗无光条件下培养3天。如确系该菌， 则接种部位软腐、维管束褐变。致病性测定是一种辅助鉴定方法，多用于验证分 离菌的致病性以排除培养性状与病原茵相近的腐生菌。 (五)过敏性反应测定 用接种寄主植物的方法测定细菌培养物的致病性要花费较长的时间，用过敏 反应鉴定，只需2448小时，便能区分病原菌和腐生菌。烟草是最常用的测定植 物。取待测细菌的新鲜培养，制成细菌悬浮液，用注射器接种。注射针头由烟草 叶片背面主脉附近插入表皮下，注入菌悬液。若为致病细菌，1-2天后，注射部 位变为褐色过敏性坏死斑块，叶组织变薄变褐，具黑褐色边缘。 (六)噬菌体检验
第二篇 植物、植物产品检验检疫 116 型菌落作进一步的鉴定。检测甘蓝黑腐病病原细菌时，提取液在蛋白胨肉汁淀粉 琼脂培养基在检出的黄色菌落上滴加鲁戈尔试液，若菌落周边培养基不被染色， 则表示淀粉已被水解，该菌落可能为目标菌，再用生物学方法或血清学方法鉴定。 （三）生理生化测定 用细菌培养物接种于特定的培养物或检测管，通过产酸、产气、颜色变化等 反应，检测细菌的耐盐性、好氧或厌氧性、对碳素化合物的利用和分解能力、对 氮素化合物的利用和分解能力、对大分子化合物的分解能力等，达到鉴别目的。 如梨火疫病菌（ Eｒwｉｎｉａａｍｙlｏvｏｒａ （Buｒｒｉll）Ｗｉｎｓl ｏwｅｔａl.）属兼性厌氧，在葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖和-甲基葡萄糖苷、 海藻糖中产酸不产气，不能利用木糖和鼠李糖，水解明胶，不水解酪蛋白，不还 原硝酸盐，不产生吲哚和二氧化硫。 Bｉｏlｏｇ细菌自动化鉴定系统是美国研制的一种专门用于细菌鉴定的专 家系统，该系统将细菌生理、生化过程的检测与先进的计算机管理手段有机地结 合起来。应用时只需将经过纯化后的病原细菌制成菌悬液，再接种到反应板上， 在 4-24 小时便可得到准确的鉴定结果。为此该系统的使用，在很大程度上简化 了传统的细菌鉴定程序。目前应用 3.70 版数据库软件可鉴定 567 种Ｇ-菌和 256 种Ｇ+菌。 （四）致病性测定 用植物病部的细菌溢或分离纯化的细菌培养物接种寄主植物，检查典型的症 状。例如，鉴定甘蓝黑腐病黄单胞杆菌时，用针刺接种甘蓝叶片中肋的切片，切 片置于 1.5%水琼脂平板上，在 28℃和黑暗无光条件下培养 3 天。如确系该菌， 则接种部位软腐、维管束褐变。致病性测定是一种辅助鉴定方法，多用于验证分 离菌的致病性以排除培养性状与病原菌相近的腐生菌。 （五）过敏性反应测定 用接种寄主植物的方法测定细菌培养物的致病性要花费较长的时间，用过敏 反应鉴定，只需 24-48 小时，便能区分病原菌和腐生菌。烟草是最常用的测定植 物。取待测细菌的新鲜培养，制成细菌悬浮液，用注射器接种。注射针头由烟草 叶片背面主脉附近插入表皮下，注入菌悬液。若为致病细菌，1-2 天后，注射部 位变为褐色过敏性坏死斑块，叶组织变薄变褐，具黑褐色边缘。 （六）噬菌体检验
第二篇植物、植物产品检验检疫 噬菌体是感染细菌的病毒，能在活细菌细胞中寄生繁殖，破坏和裂解寄主细 胞。在液体培养时，使混浊的细菌悬浮液变得澄清，在固体平板上培养时，则出 现许多边缘整齐、透明光亮的圆形无菌空斑，称为“噬菌斑”，肉眼即可分辨。 噬菌体法的主要优点是简便、快速，能直接用种子提取液测定。缺点是非目标菌 多量存在时敏感性较差，噬菌体的寄生专化性和细菌对噬菌体的抵抗性都可能影 响检验的准确性。 (七)血清学（鉴定） 检验最常用的血清学检验方法是玻片沉淀法和琼脂双扩散法，近年趋向于利 用荧光抗体法和酶联免疫吸附法。 荧光抗体法(fluo r e sce n t an t ibo dy t ech n ique)先将 荧光染料与抗体以化学方法结合起来形成标记抗体，抗体与荧光染料结合不影响 抗体的免疫特性，当与相应的抗原反应后，产生了有荧光标记的抗体抗原复合物， 受荧光显微镜高压汞灯光源的紫外光照射，便激发出荧光。荧光的存在就表示抗 原的存在。荧光抗体法有直接法和间接法两种。直接法是将标记的特异抗体直接 与待查抗原产生结合反应，从而测知抗原的存在。间接法是标记的抗体与抗原之 间结合有未标记的抗体。国内用间接法检测玉米种子传带的玉米枯菱菌(E「 wi n i a s t e wa r t i i),该法先将种子提取液在载玻片上涂片，火焰 固定后滴加目标菌抗血清，在38℃下培养30分钟后，用磷酸缓冲液冲洗玻片， 晾干后再滴加羊抗兔1gG荧光抗体（异硫氰酸荧光黄标记的羊抗兔-球蛋白，用 葡聚糖凝胶G-25过滤层析法除去游离荧光素制成)，培有、冲洗、晾干后用荧光 显微镜检查。 (八)生长检验 常用幼苗症状检验法，即将种子播种在湿润吸水纸上或水琼脂培养基平板 上，根据幼芽和幼苗症状作出初步诊断，然后接种证实病部细菌的致病性或作进 一步的鉴定。检验甘蓝种子传带黑腐病菌(Xa n t h omo n a sca mpe s t r i s pv.campe s t r i s)的s r i n i v a s a n方法用 200mgkg的金霉素浸种3-4小时后，播种于培养皿内的1.5%水琼脂平板上，在 20℃和黑暗条件下培养8天，用实体显微镜观察幼芽和幼苗的症状。带菌种子萌 发后芽苗变褐色，畸形矮化，迅速腐烂，表面有细菌溢脓，由子叶边缘开始形成 “V型褐色水渍状病斑。幼苗症状检验需占用较大空间，花费较长时间，难以检 117
第二篇 植物、植物产品检验检疫 117 噬菌体是感染细菌的病毒，能在活细菌细胞中寄生繁殖，破坏和裂解寄主细 胞。在液体培养时，使混浊的细菌悬浮液变得澄清，在固体平板上培养时，则出 现许多边缘整齐、透明光亮的圆形无菌空斑，称为“噬菌斑”，肉眼即可分辨。 噬菌体法的主要优点是简便、快速，能直接用种子提取液测定。缺点是非目标菌 多量存在时敏感性较差，噬菌体的寄生专化性和细菌对噬菌体的抵抗性都可能影 响检验的准确性。 （七）血清学（鉴定） 检验最常用的血清学检验方法是玻片沉淀法和琼脂双扩散法，近年趋向于利 用荧光抗体法和酶联免疫吸附法。 荧光抗体法（fluｏｒｅｓcｅｎｔａｎｔｉbｏｄｙｔｅcｈｎｉquｅ）先将 荧光染料与抗体以化学方法结合起来形成标记抗体，抗体与荧光染料结合不影响 抗体的免疫特性，当与相应的抗原反应后，产生了有荧光标记的抗体抗原复合物， 受荧光显微镜高压汞灯光源的紫外光照射，便激发出荧光。荧光的存在就表示抗 原的存在。荧光抗体法有直接法和间接法两种。直接法是将标记的特异抗体直接 与待查抗原产生结合反应，从而测知抗原的存在。间接法是标记的抗体与抗原之 间结合有未标记的抗体。国内用间接法检测玉米种子传带的玉米枯萎菌 （Eｒ wｉｎｉａｓｔｅwａｒｔｉｉ） ,该法先将种子提取液在载玻片上涂片，火焰 固定后滴加目标菌抗血清，在 38℃下培养 30 分钟后，用磷酸缓冲液冲洗玻片， 晾干后再滴加羊抗兔 1gＧ荧光抗体（异硫氰酸荧光黄标记的羊抗兔-球蛋白，用 葡聚糖凝胶Ｇ-25 过滤层析法除去游离荧光素制成），培育、冲洗、晾干后用荧光 显微镜检查。 （八）生长检验 常用幼苗症状检验法，即将种子播种在湿润吸水纸上或水琼脂培养基平板 上，根据幼芽和幼苗症状作出初步诊断，然后接种证实病部细菌的致病性或作进 一步的鉴定。检验甘蓝种子传带黑腐病菌（ Xａｎｔｈｏｍｏｎａｓcａｍpｅ ｓｔｒｉｓ pv. cａｍpｅｓｔｒｉｓ ）的Ｓｒｉｎｉvａｓａｎ方法用 200mg/kg 的金霉素浸种 3-4 小时后，播种于培养皿内的 1.5%水琼脂平板上，在 20℃和黑暗条件下培养 8 天，用实体显微镜观察幼芽和幼苗的症状。带菌种子萌 发后芽苗变褐色，畸形矮化，迅速腐烂，表面有细菌溢脓，由子叶边缘开始形成 “V”型褐色水渍状病斑。幼苗症状检验需占用较大空间，花费较长时间，难以检
第二篇植物、植物产品检验检疫 测大量种子。有时发生真菌污染，症状混淆，难以鉴定。带有细菌的种子还可能 丧失萌发能力，从而逃避了检验。在检疫中生长检验多作为初步检验或预备检验 (九)分子生物学检验 近些年来，分子生物学技术被越来越多的应用于植物病原的检验。应用聚合 酶链式反应(PC℉)可以非常简便快速地从微量生物材料中以体外扩增的方式获 取大量的遗传物质，并有极高的灵敏度和显著的专一性，从而大大地提高了对 DA分子的检测能力。由于这一技术具有快速简便、灵敏度高、特异性强的优 点，故而在各个领域包括植物检疫方面得到广泛应用和迅速发展，并成为现代分 子克隆技术的基本手段。随机扩增多态DNA(RAPD)即为以PCR为基础发展 起来的一项DNA水平上的大分子多态检测技术，由于无需专门设计的RAPD扩 增反应引物，所以其应用范围更加广泛。EJ.A Blackmo r e等人曾利用 RAPD制作DNA探针，成功地完成了对玉米枯菱菌的检测和鉴定工作。此外， 分子生物学技术还被广泛地应用于病毒鉴定、线虫鉴定、昆虫分类等方面。 第七节、植物病原病毒的检验 (一)直接检验 带毒种子或其它植物材料表现明显症状，能以肉眼和手持扩大镜直接识别的 实例甚少，大豆花叶病毒(Sowba n eMo s a icVi rus)侵染的大豆种 子有以种脐为中心的放射形黑褐色斑纹，豌豆种传花叶病毒(Pe a s e e db 0 rn e mo s a icvi rus)造成种皮变色和开裂，蚕豆色病毒(Brodb e a n s t a i nv i rus)使蚕豆种子产生坏死斑。但是，种子症状仅表示母 株受到病毒侵染，而不一定表明胚内有病毒侵染，从而不一定传毒。 (二)生长检验 种子、苗木需在实验室内或防虫温室内适于植物生长与症状表现的条件下栽 培，在生长期间根据症状检出病株。种子带毒可根据幼苗症状作初步鉴定，但仅 适用于苗期有特征性症状的少数寄主一—病毒组合。例如，检验莴苣种子传带莴 苣花叶病毒(Le t tucemos a icvi rus),大麦种子传带大麦条纹化叶 病毒(Ba rley st r ipemos a icvi rus),菜豆种子传带菜豆普通 花叶病毒(Be a ncommo nmo s a icvi rus)等。通常单凭症状难以 做出诊断，这是因为病毒症状常与其它病原微生物引起的症状，甚至缺素症相混 118
第二篇 植物、植物产品检验检疫 118 测大量种子。有时发生真菌污染，症状混淆，难以鉴定。带有细菌的种子还可能 丧失萌发能力，从而逃避了检验。在检疫中生长检验多作为初步检验或预备检验。 （九）分子生物学检验 近些年来，分子生物学技术被越来越多的应用于植物病原的检验。应用聚合 酶链式反应（PCR）可以非常简便快速地从微量生物材料中以体外扩增的方式获 取大量的遗传物质，并有极高的灵敏度和显著的专一性，从而大大地提高了对 DNＡ分子的检测能力。由于这一技术具有快速简便、灵敏度高、特异性强的优 点，故而在各个领域包括植物检疫方面得到广泛应用和迅速发展，并成为现代分 子克隆技术的基本手段。随机扩增多态 DNＡ（RAPD）即为以 PCR 为基础发展 起来的一项 DNＡ水平上的大分子多态检测技术，由于无需专门设计的 RAPD 扩 增反应引物，所以其应用范围更加广泛。E.J.Ａ Blａcｋｍｏｒｅ等人曾利用 RAPD 制作 DNＡ探针，成功地完成了对玉米枯萎菌的检测和鉴定工作。此外， 分子生物学技术还被广泛地应用于病毒鉴定、线虫鉴定、昆虫分类等方面。 第七节、植物病原病毒的检验 （一）直接检验 带毒种子或其它植物材料表现明显症状，能以肉眼和手持扩大镜直接识别的 实例甚少，大豆花叶病毒（ＳｏwbａｎｅMｏｓａｉcVｉｒuｓ）侵染的大豆种 子有以种脐为中心的放射形黑褐色斑纹，豌豆种传花叶病毒（Ｐｅａｓｅｅｄb ｏｒｎｅｍｏｓａｉcvｉｒuｓ）造成种皮变色和开裂，蚕豆色病毒（Bｒｏｄb ｅａｎＳｔａｉｎvｉｒuｓ）使蚕豆种子产生坏死斑。但是，种子症状仅表示母 株受到病毒侵染，而不一定表明胚内有病毒侵染，从而不一定传毒。 （二）生长检验 种子、苗木需在实验室内或防虫温室内适于植物生长与症状表现的条件下栽 培，在生长期间根据症状检出病株。种子带毒可根据幼苗症状作初步鉴定，但仅 适用于苗期有特征性症状的少数寄主——病毒组合。例如，检验莴苣种子传带莴 苣花叶病毒（Lｅｔｔucｅｍｏｓａｉcvｉｒuｓ），大麦种子传带大麦条纹化叶 病毒（Bａｒlｅｙｓｔｒｉpｅｍｏｓａｉcvｉｒuｓ），菜豆种子传带菜豆普通 花叶病毒（Bｅａｎcｏｍｍｏｎｍｏｓａｉcvｉｒuｓ）等。通常单凭症状难以 做出诊断，这是因为病毒症状常与其它病原微生物引起的症状，甚至缺素症相混