实验二 食品中淀粉的测定(5009.9-2003食品中淀粉的测定) 第一法酶水解法 一、目的与要求： 1、了解食品中淀粉含量的分析原理及分析方法。 2、掌握用酶水解法和酸水解法测定淀粉的方法。 二、实验原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖 再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 三，试剂： 1、0.5%淀粉酶溶液：称取淀粉酶0.5克，加100毫升水溶解， 数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。 2、碘溶液：称取3.6克碘化钾溶于20毫升水中，加入1.3克 碘，溶解后加水稀释至100毫升。 3、乙醚 4、85%乙醇 5、6N盐酸：量取50毫升盐酸加水稀释至100毫升。 6、甲基红指示液：0.1%乙醇溶液。 7、20%氢氧化钠溶液
实验二 食品中淀粉的测定（5009.9-2003 食品中淀粉的测定） 第一法 酶水解法 一、目的与要求： 1、了解食品中淀粉含量的分析原理及分析方法。 2、掌握用酶水解法和酸水解法测定淀粉的方法。 二、实验原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖， 再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 三，试剂： 1、0.5％淀粉酶溶液：称取淀粉酶 0.5 克，加 100 毫升水溶解， 数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。 2、碘溶液：称取 3.6 克碘化钾溶于 20 毫升水中，加入 1.3 克 碘，溶解后加水稀释至 100 毫升。 3、乙醚 4、85％乙醇 5、6N 盐酸：量取 50 毫升盐酸加水稀释至 100 毫升。 6、甲基红指示液：0.1％乙醇溶液。 7、20％氢氧化钠溶液
8、碱性酒石酸铜甲液：称取34.639克硫酸铜(CuS0,·5H0)。加适量水 溶解，加0.5毫升硫酸，再加水稀释至500毫升，用精制石棉过滤。 9、碱性酒石酸铜乙液：称取173克酒石酸钾钠与50克氢氧化 钠，加适量水溶解，并稀释至500毫升，用精制石棉过滤，贮存于橡胶 塞玻璃瓶内。 10、0.1000N高锰酸钾标准溶液。 11、硫酸铁溶液：称取50克硫酸铁，加入200毫升水溶解后， 人100毫升硫酸，冷后加水稀释至1000毫升。 四、操作方法： 1、样品处理： 称取2-5克样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50毫升乙 醚分5次洗除脂肪，再用约100毫升85%乙醇洗去可溶性糖类，将残留 物移入250毫升烧杯内，并用50毫升水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯 内，将烧杯置沸水浴上加热15分钟，使淀粉糊化，放冷至60℃以下， 加20毫升淀粉酶溶液，在55-60℃保温1小时，并时时搅拌。然后取1 滴此液加1滴溶液，应不显现蓝色，若显蓝色，再加热糊化并加20毫 升淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。加热至沸，冷后移 入250毫升容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。取5 0毫升滤液，置于250毫升锥形瓶中，并加水至刻度，沸水浴中回流1 小时，冷后加2滴甲基红指示液，用20%氢氧化钠溶液中和至中性，溶 液转入100毫升容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并人100毫升容量瓶中， 加水至刻度，混匀备用。 2、测定：
8、碱性酒石酸铜甲液：称取 34.639 克硫酸铜(CuS04·5H2O)。加适量水 溶解，加 0.5 毫升硫酸，再加水稀释至 500 毫升，用精制石棉过滤。 9、碱性酒石酸铜乙液：称取 173 克酒石酸钾钠与 50 克氢氧化 钠，加适量水溶解，并稀释至 500 毫升，用精制石棉过滤，贮存于橡胶 塞玻璃瓶内。 10、0.1000N 高锰酸钾标准溶液。 11、硫酸铁溶液：称取 50 克硫酸铁，加入 200 毫升水溶解后， 人 100 毫升硫酸，冷后加水稀释至 1000 毫升。 四、操作方法： 1、样品处理： 称取 2-5 克样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用 50 毫升乙 醚分 5 次洗除脂肪，再用约 100 毫升 85％乙醇洗去可溶性糖类，将残留 物移入 250 毫升烧杯内，并用 50 毫升水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯 内，将烧杯置沸水浴上加热 15 分钟，使淀粉糊化，放冷至 60℃以下， 加 20 毫升淀粉酶溶液，在 55-60℃保温 1 小时，并时时搅拌。然后取 1 滴此液加 1 滴溶液，应不显现蓝色，若显蓝色，再加热糊化并加 20 毫 升淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。加热至沸，冷后移 入 250 毫升容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。取 5 0 毫升滤液，置于 250 毫升锥形瓶中，并加水至刻度，沸水浴中回流 1 小时，冷后加 2 滴甲基红指示液，用 20％氢氧化钠溶液中和至中性，溶 液转入 100 毫升容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并人 100 毫升容量瓶中， 加水至刻度，混匀备用。 2、测定：
吸取50毫升处理后的样品溶液，于400毫升烧杯内，加入25 毫升碱性酒石酸铜甲液及25毫升乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热， 控制，在4分钟内沸腾，再准确煮沸2分钟，趁热用铺好石棉的古氏坩 埚或c4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱 性为止。将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400毫升烧杯中，加25毫升硫 酸铁溶液及25毫升水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1000N 高锰酸钾标准溶液滴定至微红色为终点。 同时量取50毫升水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液，按同 一方法做试剂空白实验。 计算：X1=((A1-A2)×0.9)/(m,×50/250×V1/100×1000)×100 X:样品中淀粉的含量，%； A:测定用样品中还原糖的含量，g: A2:试剂空白中还原糖的含量，g: 0.9:还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数： m:称取样品质量，g: V:测定用样品处理液的体积，毫升(m1)。 第二法酸水解法 一、原理： 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还 原性的单糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉
吸取 50 毫升处理后的样品溶液，于 400 毫升烧杯内，加入 25 毫升碱性酒石酸铜甲液及 25 毫升乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热， 控制，在 4 分钟内沸腾，再准确煮沸 2 分钟，趁热用铺好石棉的古氏坩 埚或 c4 垂融坩埚抽滤，并用 60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱 性为止。将古氏坩埚或垂融坩埚放回原 400 毫升烧杯中，加 25 毫升硫 酸铁溶液及 25 毫升水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以 0.1000N 高锰酸钾标准溶液滴定至微红色为终点。 同时量取 50 毫升水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液，按同 一方法做试剂空白实验。 计算：X1=((A1-A2)×0.9)/( m1×50/250×V1/100×1000)×100 X1：样品中淀粉的含量，％； A1：测定用样品中还原糖的含量，mg； A2：试剂空白中还原糖的含量，mg； 0.9：还原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数； m1：称取样品质量，g； V1：测定用样品处理液的体积，毫升(m1)。 第二法 酸水解法 一、原理： 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还 原性的单糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉
二、试剂： 1、乙醚： 2、85%乙醇溶液； 3、6N盐酸溶液： 4、40%氢氧化钠溶液： 5、10%氢氧化钠溶液： 6、甲基红指示液：0.2%乙醇溶液 7、精密PH试纸 8、20%乙酸铅溶液 9、10%硫酸钠溶液 10、乙醚 11、碱性酒石酸铜甲液。 (配制见前) 12、碱性酒石酸铜乙液：（配制见前） 13、硫酸铁： (配制见前) 14、0.1000N高锰酸钾标液 三、仪器： 1、水浴锅
二、试剂： 1、乙醚； 2、85％乙醇溶液； 3、6N 盐酸溶液； 4、40％氢氧化钠溶液； 5、10％氢氧化钠溶液； 6、甲基红指示液：0.2％乙醇溶液 7、精密 PH 试纸 8、20％乙酸铅溶液 9、10％硫酸钠溶液 10、乙醚 11、碱性酒石酸铜甲液。 (配制见前) 12、碱性酒石酸铜乙液； (配制见前) 13、硫酸铁； (配制见前) 14、0.1000N 高锰酸钾标液 三、仪器： 1、水浴锅
2、高速组织捣碎机：1200r/min 3、皂化装置并附250毫升锥形瓶。 四、操作方法： 1、样品处理 A、粮食，豆类、糕点、饼干等较干燥的样品，称取2.0-5.0克磨碎过4 0日筛的样品，置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30毫升乙醚分三次洗去 样品中的脂肪，弃去乙醚。再用150毫升85%乙醇溶液分数次洗涤残渣， 除去可溶性糖类物质。并滤干乙醇溶液，以100毫升水洗涤漏斗中残渣 并转移至250毫升锥形瓶中，加入30毫升6N盐酸，接好冷凝管，置沸 水浴中回流2小时。回流完毕后，立即置流水中冷却。待样品水解液冷 却后，加入2滴甲基红指示液，先以40%氢氧化钠溶液调至黄色，再以 6N盐酸校正至水解液刚变红色为宜。若水解液颜色较深，可用精密PH 试纸测试，使样品水解液的PH约为7。然后加20毫升20%乙酸铅溶液， 摇匀，放置10分钟。再加20毫升10%硫酸钠溶液，以除去过多的铅。 摇匀后将全部溶液及残渣转入500毫升容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，洗 液合并于容量瓶中，加水稀释至刻度。过滤，弃去初滤液20毫升，滤 液供测定用。 B、蔬菜、水果、各种粮豆含水熟食制品：按1：1加水在组织 捣碎机中捣成匀浆（蔬菜、水果需先洗净、晾干、取可食部分）称取5-1 0克匀浆（液体样品可直接量取），于250毫升锥形瓶中，加30毫升乙醚 振摇提取（除去样品中脂肪），用滤纸过滤除去乙醚，再用30毫升乙醚 淋洗两次，弃去乙醚。以下按A自“再用150毫升85%乙醇溶液”起依 法操作
2、高速组织捣碎机：1200r／min 3、皂化装置并附 250 毫升锥形瓶。 四、操作方法： 1、 样品处理 A、粮食，豆类、糕点、饼干等较干燥的样品，称取 2.0-5.0 克磨碎过 4 0 目筛的样品，置于放有慢速滤纸的漏斗中，用 30 毫升乙醚分三次洗去 样品中的脂肪，弃去乙醚。再用 150 毫升 85％乙醇溶液分数次洗涤残渣， 除去可溶性糖类物质。并滤干乙醇溶液，以 100 毫升水洗涤漏斗中残渣 并转移至 250 毫升锥形瓶中，加入 30 毫升 6N 盐酸，接好冷凝管，置沸 水浴中回流 2 小时。回流完毕后，立即置流水中冷却。待样品水解液冷 却后，加入 2 滴甲基红指示液，先以 40％氢氧化钠溶液调至黄色，再以 6N 盐酸校正至水解液刚变红色为宜。若水解液颜色较深，可用精密 PH 试纸测试，使样品水解液的 PH 约为 7。然后加 20 毫升 20％乙酸铅溶液， 摇匀，放置 10 分钟。再加 20 毫升 10％硫酸钠溶液，以除去过多的铅。 摇匀后将全部溶液及残渣转入 500 毫升容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，洗 液合并于容量瓶中，加水稀释至刻度。过滤，弃去初滤液 20 毫升，滤 液供测定用。 B、蔬菜、水果、各种粮豆含水熟食制品：按 1：1 加水在组织 捣碎机中捣成匀浆(蔬菜、水果需先洗净、晾干、取可食部分)称取 5-1 0 克匀浆(液体样品可直接量取)，于 250 毫升锥形瓶中，加 30 毫升乙醚 振摇提取(除去样品中脂肪)，用滤纸过滤除去乙醚，再用 30 毫升乙醚 淋洗两次，弃去乙醚。以下按 A 自“再用 150 毫升 85％乙醇溶液”起依 法操作
2、测定： 吸取50毫升处理后的样品溶液，于400毫升烧杯内，加25毫 升碱性酒石酸铜甲液及25毫升乙液。于烧杯上盖一表面皿加热，控制 在4分钟沸腾再准确煮沸2分钟，趁热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂 融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱性为止。将 古氏坩埚或垂融坩埚放回原400毫升烧杯中，加25毫升硫酸铁溶液及2 5毫升水，用玻棒搅拌使氧化铜完全溶解，以0.1000N高锰酸钾标液滴 定至微红色为终点。 同时吸取50毫升水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲乙 液、硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空白试验。 计算：x2=(A-A)×0.9)/(M×V,/500×1000)×100 式中： X2:样品中淀粉含量，%； A:测定用样品中水解液中还原糖含量，mg: A4:试剂空白中还原糖的含量，mg me:样品质量，mg V2:测定用样品水解液体积，ml: 500:样品液总体积，ml: 0.9:还原糖折算成淀粉的换算系数
2、测定： 吸取 50 毫升处理后的样品溶液，于 400 毫升烧杯内，加 25 毫 升碱性酒石酸铜甲液及 25 毫升乙液。于烧杯上盖一表面皿加热，控制 在 4 分钟沸腾再准确煮沸 2 分钟，趁热用铺好石棉的古氏坩埚或 G4 垂 融坩埚抽滤，并用 60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱性为止。将 古氏坩埚或垂融坩埚放回原 400 毫升烧杯中，加 25 毫升硫酸铁溶液及 2 5 毫升水，用玻棒搅拌使氧化铜完全溶解，以 0.1000N 高锰酸钾标液滴 定至微红色为终点。 同时吸取 50 毫升水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲乙 液、硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空白试验。 计算： x2=((A3-A4)×0.9)/( M2×V2/500×1000)×100 式中： X2：样品中淀粉含量，％； A3：测定用样品中水解液中还原糖含量，mg； A4：试剂空白中还原糖的含量，mg； m2：样品质量，mg； V2：测定用样品水解液体积，m1； 500：样品液总体积，ml； 0.9：还原糖折算成淀粉的换算系数