实验十四、食品中有机磷农药残留量的测定气相色谱法 (GBT5009.20-2003食品中有机殊友药残留量的定 气相色谱法测定食品中有机磷农药残留量 一、目的与要求 1。掌握气相色普仪的工作原理及使用方法 2.学习食品中有机磷农药残留的气相色谱测定方法。 二、原理 食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、浓缩后，注入气相色谱仪，气化后 在载气携带下于色谱柱中分离，由火焰光度检测器检测。当含有机磷的试样在检测器中的富 氢焰上燃烧时，以P0碎片的形式，放射出波长为526m的特性光，这种光经检测器的单色 器（滤光片）将非特征光谱滤除后，由光电倍增管接收，产生电信号而被检出。试样的峰面 积或修高与标准品的峰面积或峰高讲行出较定量。 三、仪器与试剂 (一)仪器 1.气相色谱仪：附有火焰光度检测器(FPD)。 2.电动振荡器 3.组织捣碎机 4.旋转蒸发仪 (二)试剂 1. 二氯甲烷 2.丙酮 3.无水硫酸钠：在700℃灼烧4h后备用 4.中性氧化铝：在550℃灼烧4h。 5.硫酸钠溶液 6.有机磷农药标准贮备液：分别准确称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果、马拉硫磷 对疏磷、甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷各10.0g,用苯（或三氯甲烷）溶 解并稀释至100ml 放在冰箱中保存 7.有机磷农药标准使用液：临用时用二氯甲烷稀释为使用液，使其浓度为敌敌畏、乐 果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷每毫升各相当于1.0μg,稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫 螨磷每毫升各相当于2.0μg。 四、实验步骤 (一)样品处理 1.蔬菜：取适量蔬菜擦净，去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬菜切碎混匀。称取 10.0g混匀的试样，置于250mL具塞锥形瓶中，加30g~100g无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后 如有固体硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已够。加0.2g~0.8g活性炭脱色。加70ml二氯 甲烷，在振荡器上振摇0.5h,经滤纸过滤。量取35L滤液，在通风柜中室温下自然挥发至 近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入10ml具塞刻度试管中，并定容至2L,备用 2.谷物：将样品磨粉（稻谷先脱壳），过20目筛，混匀。称取10g置于具塞锥形瓶中 加入0.5g中性氧化铝（小麦、玉米再加0.2g活性炭）及20m二氯甲烷，振摇0.5h,过滤 滤液直接进样。若农药戏留过低，则加30mL二氯甲院，振摇过滤，量取15滤没浓缩，并 定容至2mL进样。 3.植物油：称取5.0g混匀的试样，用50ml丙酮分次溶解并洗入分液漏斗中，摇匀后， 加10ml水，轻轻旋转振摇1min,静置1h以上，弃去下面析出的油层，上层溶液自分液漏
实验十四、食品中有机磷农药残留量的测定-气相色谱法 （GB/T 5009.20-2003 食品中有机磷农药残留量的测定） 气相色谱法测定食品中有机磷农药残留量 一、目的与要求 1．掌握气相色谱仪的工作原理及使用方法。 2．学习食品中有机磷农药残留的气相色谱测定方法。 二、原理 食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、浓缩后，注入气相色谱仪，气化后 在载气携带下于色谱柱中分离，由火焰光度检测器检测。当含有机磷的试样在检测器中的富 氢焰上燃烧时，以 HPO 碎片的形式，放射出波长为 526nm 的特性光，这种光经检测器的单色 器（滤光片）将非特征光谱滤除后，由光电倍增管接收，产生电信号而被检出。试样的峰面 积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。 三、仪器与试剂 （一）仪器 1．气相色谱仪：附有火焰光度检测器（FPD）。 2．电动振荡器 3．组织捣碎机 4．旋转蒸发仪 （二）试剂 1．二氯甲烷 2．丙酮 3．无水硫酸钠：在 700℃灼烧 4h 后备用。 4．中性氧化铝：在 550℃灼烧 4h。 5．硫酸钠溶液 6．有机磷农药标准贮备液：分别准确称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果、马拉硫磷、 对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷各 10.0mg，用苯（或三氯甲烷）溶 解并稀释至 100mL，放在冰箱中保存。 7．有机磷农药标准使用液：临用时用二氯甲烷稀释为使用液，使其浓度为敌敌畏、乐 果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷每毫升各相当于 1.0μg，稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫 螨磷每毫升各相当于 2.0μg。 四、实验步骤 （一）样品处理 1．蔬菜：取适量蔬菜擦净,去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬菜切碎混匀。称取 10.0g 混匀的试样，置于 250mL 具塞锥形瓶中，加 30g～100g 无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后 如有固体硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已够。加 0.2g～0.8g 活性炭脱色。加 70mL 二氯 甲烷，在振荡器上振摇 0.5h，经滤纸过滤。量取 35mL 滤液，在通风柜中室温下自然挥发至 近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入 10mL 具塞刻度试管中，并定容至 2mL，备用。 2．谷物：将样品磨粉（稻谷先脱壳），过 20 目筛，混匀。称取 10g 置于具塞锥形瓶中， 加入 0.5g 中性氧化铝（小麦、玉米再加 0.2g 活性炭）及 20mL 二氯甲烷，振摇 0.5h，过滤， 滤液直接进样。若农药残留过低，则加 30mL 二氯甲烷，振摇过滤，量取 15mL 滤液浓缩，并 定容至 2mL 进样。 3．植物油：称取 5.0g 混匀的试样，用 50mL 丙酮分次溶解并洗入分液漏斗中，摇匀后， 加 10mL 水，轻轻旋转振摇 1min，静置 1h 以上，弃去下面析出的油层，上层溶液自分液漏
斗上口倾入另一分液漏斗中，当心尽量不使剩余的油滴倒入（如乳化严重，分层不清，则放 入50mL离心管中，于2500r/min转速下离心0.5h,用滴管吸出上层清夜)。加30ml二氯甲 烷，100ml50g/L硫酸钠溶液，振摇1min。静置分层后，将二氯甲烷提取液移至蒸发皿中。 丙酮水溶液再用10mL二氯甲烷提 一次，分层后，合并至蒸发皿中。自然挥发后，如无水 可用二氯甲烷少量多次研洗蒸发皿中残液移入具塞量筒中，并定容至5mL。加2g无水硫酸 钠振摇脱水，再加1g中性氧化铝、0.2g活性炭（毛油可加0.5g)振荡脱油和脱色，过滤， 滤液直接进样。如自然挥发后尚有少量水，则需反复抽提后再如上操作. (二)色进条件 1.色谱柱：玻璃柱，内径3mm,长1.5m~2.0m (1)分离测定敌敌畏、乐果、马拉蓝磁和对硫腾的色谱住 ①内装涂以2.5%SE-30和3%QF-1混合固定液的60目~80目Chromosorb W AW DMCS ②内装涂以1.5%0V-17和2%QF-1混合固定液的60目~80目Chromosorb W AW DMCS: ③内装涂以2%0N-101和2%QF-1混合固定液的60日~80日Chromosorb W AW DMCS. (2)分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱住 ①内装涂以3%PEGA和5%QF-1混合固定液的60目~80目Chromosorb W AW DMCS: ②内装涂以2%NPGA和3%QF-1混合固定液的60目~80目Chromosorb W AW DMCS: 2.气流速度：载气为氮气80ml/mim:空气50ml/mi:氢气180ml/min(氮气、空气和 氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件)。 3.温度：进样口：220℃：检测器：240℃：柱温：180C,但测定敌敌畏为130℃。 (二)道定 将有机磷农药标准使用液2μL~5μL分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷 标准溶液的峰高，分别绘制有机磷农药质量-峰高标准曲线。同时取试样溶液2μL~5μL 注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相应的含量。 五、结果计算 按下式计算：X= A m×1000 式中 -试样中有机磷农药的含量，单位为mg/Rg: -进样体积中有机磷农药的质量，由标准曲线中查得，单位为g: 与进样体积（μL)相当的试样质量，单位为g。 计算结果保留两位有效数字。 六、注意事项 1.本法采用毒性较小且价格较为便宜的二氯甲烷作为提取试剂，闲际上多用乙氯作为 有机磷农药的提取试剂及分配净化试剂，但其毒性较大。 2。有些稳定性差的有机磷农药如敌敌畏因稳定性差且易被色谱柱中的担体吸附，故本 法采用降低操作温度来克服上述困难。另外，也可采用缩短色谱柱至1-1.3米或减 少固定液涂渍的厚度等措施来克服。 七、思考题 1.本实验的气路系统包括哪些，各有何作用？ 2.电子捕获检测器及火焰光度检测器的原理及适用范围？ 3。如何检验该实验方法的准确度？如何提高检测结果的准确度？
斗上口倾入另一分液漏斗中，当心尽量不使剩余的油滴倒入（如乳化严重，分层不清，则放 入 50mL 离心管中，于 2500r/min 转速下离心 0.5h，用滴管吸出上层清夜）。加 30mL 二氯甲 烷，100mL50g/L 硫酸钠溶液，振摇 1min。静置分层后，将二氯甲烷提取液移至蒸发皿中。 丙酮水溶液再用 10mL 二氯甲烷提取一次，分层后，合并至蒸发皿中。自然挥发后，如无水， 可用二氯甲烷少量多次研洗蒸发皿中残液移入具塞量筒中，并定容至 5mL。加 2g 无水硫酸 钠振摇脱水，再加 1g 中性氧化铝、0.2g 活性炭（毛油可加 0.5g）振荡脱油和脱色，过滤， 滤液直接进样。如自然挥发后尚有少量水,则需反复抽提后再如上操作. （二）色谱条件 1．色谱柱：玻璃柱，内径 3mm，长 1.5m～2.0m。 （1）分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱住 ①内装涂以2.5％SE－30和3％QF－1混合固定液的60目～80目Chromosorb W AW DMCS； ②内装涂以1.5％OV－17和2％QF－1混合固定液的60目～80目Chromosorb W AW DMCS； ③内装涂以 2％OV－101 和 2％QF－1 混合固定液的 60 目～80 目 Chromosorb W AW DMCS。 （2）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱住 ①内装涂以 3％PEGA 和 5％QF－1 混合固定液的 60 目～80 目 Chromosorb W AW DMCS； ②内装涂以 2％NPGA 和 3％QF－1 混合固定液的 60 目～80 目 Chromosorb W AW DMCS； 2．气流速度：载气为氮气 80mL/min；空气 50mL/min；氢气 180mL/min（氮气、空气和 氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件）。 3．温度：进样口：220℃；检测器：240℃；柱温：180℃，但测定敌敌畏为 130℃。 （三）测定 将有机磷农药标准使用液 2μL～5μL 分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷 标准溶液的峰高，分别绘制有机磷农药质量-峰高标准曲线。同时取试样溶液 2μL～5μL 注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相应的含量。 五、结果计算 按下式计算： 1000 = m A X 式中： X——试样中有机磷农药的含量，单位为 mg/Kg； A——进样体积中有机磷农药的质量，由标准曲线中查得，单位为 ng； m——与进样体积（μL）相当的试样质量，单位为 g。 计算结果保留两位有效数字。 六、注意事项 1. 本法采用毒性较小且价格较为便宜的二氯甲烷作为提取试剂,国际上多用乙氰作为 有机磷农药的提取试剂及分配净化试剂,但其毒性较大。 2. 有些稳定性差的有机磷农药如敌敌畏因稳定性差且易被色谱柱中的担体吸附，故本 法采用降低操作温度来克服上述困难。另外，也可采用缩短色谱柱至 1-1.3 米或减 少固定液涂渍的厚度等措施来克服。 七、思考题 1． 本实验的气路系统包括哪些，各有何作用？ 2． 电子捕获检测器及火焰光度检测器的原理及适用范围？ 3． 如何检验该实验方法的准确度？如何提高检测结果的准确度？