实验十一、食品中亚硫酸盐含量测定 标准依据：GB/T5009.34-2003食品中亚硫酸盐含量测定 一、目的要求 学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚硫酸盐的实验原理，掌握实验的操作要点 及测定方法。 二、实验原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应，生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫 红色络合物，此络合物于波长550加m处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫 酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。 三、仪器与试剂 (一）试剂 1、四氯汞钠吸收液：称取13.6g氯化高汞及6.0g氯化钠，溶于水中并稀释至1000ml放 置过夜，过滤后备用。 2、1.2%氨基磺酸铵溶液(12g/L)。 3、甲醛溶液(2g/L):吸取0.55L无聚合沉淀的甲醛(36%)，加水稀释至100L,混 匀。 4、淀粉指示液：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100L沸水中，搅 拌煮沸，放冷备用，此溶液临用时配制。 5、亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100L 6、乙酸锌溶液：称取22g乙酸锌溶于少量水中，加入3冰乙酸，加水稀释至100L。 7、盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取0.lg盐酸副玫瑰苯胺(C,H。N,CL.4,0:p-rosaniline hydroch1o-ride)于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至100l。取出20ml,置于100ml 容量瓶中，加盐酸(1+1)充分摇匀后使溶液由红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄 色，再加水稀释至刻度，混匀备用。 8、碘溶液[c(1/2L,)=0.100mol/] 9、硫代硫酸钠标准溶液[c(aS.0,·50)=0.100mol/L]。 10、二氧化硫标准溶液：称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200l四氯汞钠吸收液中，放置过 液，上清液用定量滤纸过滤备用。 吸取10.0L亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于250mL碘量瓶中，加100L水，准确加入 20.00ml碘溶液(0.1mol/L),5l冰乙酸，摇匀，放置于暗处，2min后迅速以0.100mol/L
实验十一、食品中亚硫酸盐含量测定 标准依据：GB/T 5009.34-2003 食品中亚硫酸盐含量测定 一、目的要求 学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚硫酸盐的实验原理，掌握实验的操作要点 及测定方法。 二、实验原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应，生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫 红色络合物，此络合物于波长 550nm 处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫 酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。 三、仪器与试剂 (一)试剂 1、四氯汞钠吸收液：称取 13.6g 氯化高汞及 6.0g 氯化钠，溶于水中并稀释至 1000mL 放 置过夜，过滤后备用。 2、1.2 % 氨基磺酸铵溶液(12g/L)。 3、甲醛溶液（2g/L）：吸取 0.55 mL 无聚合沉淀的甲醛（36%），加水稀释至 100 mL，混 匀。 4、淀粉指示液：称取 1g 可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入 100 mL 沸水中，搅 拌煮沸，放冷备用，此溶液临用时配制。 5、亚铁氰化钾溶液：称取 10.6g 亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至 100 mL 6、乙酸锌溶液：称取 22g 乙酸锌溶于少量水中，加入 3mL 冰乙酸，加水稀释至 100 mL。 7、盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取 0.1g 盐酸副玫瑰苯胺（C19 H18 N2CL.4H2O:p-rosaniline hydrochlo-ride）于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至 100 mL。取出 20mL，置于 100 mL 容量瓶中，加盐酸（1+1）充分摇匀后使溶液由红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄 色，再加水稀释至刻度，混匀备用。 8、碘溶液[c(1/2I2)=0.100 mol/L]。 9、硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3·5H2O)=0.100 mol/L]。 10、二氧化硫标准溶液：称取 0.5g 亚硫酸氢钠，溶于 200 mL 四氯汞钠吸收液中，放置过 液，上清液用定量滤纸过滤备用。 吸取 10.0 mL 亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于 250mL 碘量瓶中，加 100 mL 水，准确加入 20.00 mL 碘溶液（0.1mol/L），5 mL 冰乙酸，摇匀，放置于暗处，2min 后迅速以 0.100mol/L
硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加0.5L淀粉指示剂，继续滴定至无色。另取100l 水，准确加入0.1ol/儿碘溶液20.0mL、5ml冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。 二氧化硫标准溶液的浓度按下式下式进行计算： X=-)xcx323 10 式中X一一二氧化硫标淮溶液浓度（取/L): V,一一测定用亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液体积(L)为 V:一一试剂空白消耗代硫酸钠标准溶液体积(m1/L): C-一硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度(mol/L): 32.03一一每毫升硫代硫酸钠[c(NaS0,·50)=1.000mo1/L]标准溶液相当于二氧化硫 的质量(g)。 11、二氧化硫使用液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升相当于 2μg二氧化疏。 12、氢氧化钠溶液(20g/L)。 13、硫酸(1+71)。 (二)、仪器 分光光度计。 四、实验步骤 (一)、样品处理 1、水溶性固体试样如白砂糖等可称取约10.00g均匀试样（试样量可视含量高低而定）， 以少量水溶解，置于100L容量瓶中，加入4l氢氧化钠溶液(20g/L),5min后加入4l 硫酸(1+71)，然后加入20mL四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。 2、固体试样如饼干、粉丝等可称取5.0g一10.0g研磨均匀的试样，以少量水湿润并移 入100L容量瓶中，然后加入20ml四氯汞钠吸收液，浸泡4h以上，若上层溶液不澄清可 加入亚铁氰化钾溶液及乙酸锌溶液各2.5lL,最后用水稀释至100L刻度，过滤后备用】 3、液体试样如葡萄酒等可直接吸取5.0~10.0L试样，置于100ml容量瓶中，以少量 水稀释，加20L四氯汞钠吸收液，摇匀，最后加水至刻度，混匀，必要时过滤备用。 (二)、测定 吸取0.50ml~5.0L上述试样处理液于25L带塞比色管中 另吸取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.50、2.00l二氧化硫标准使用液（相当于0
硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加 0.5 mL 淀粉指示剂，继续滴定至无色。另取 100 mL 水，准确加入 0.1mol/L 碘溶液 20.0 mL、5mL 冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。 二氧化硫标准溶液的浓度按下式下式进行计算： 10 ( 2 − 1 ) 32.3 = V V c X 式中 X——二氧化硫标准溶液浓度（mg/mL）； V1——测定用亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液体积（mL）； V2——试剂空白消耗代硫酸钠标准溶液体积（mol/L）； C——硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度（mol/L）； 32.03——每毫升硫代硫酸钠[c(Na2S2O3·5H2O)=1.000mol/L]标准溶液相当于二氧化硫 的质量(mg)。 11、二氧化硫使用液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升相当于 2μg 二氧化硫。 12、氢氧化钠溶液（20g/L）。 13、硫酸（1+71）。 （二）、仪器 分光光度计。 四、实验步骤 （一）、样品处理 1、水溶性固体试样如白砂糖等可称取约 10.00g 均匀试样（试样量可视含量高低而定）， 以少量水溶解，置于 100 mL 容量瓶中，加入 4mL 氢氧化钠溶液（20g/L），5min 后加入 4mL 硫酸（1+71），然后加入 20mL 四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。 2、固体试样如饼干、粉丝等可称取 5.0g～10.0g 研磨均匀的试样，以少量水湿润并移 入 100 mL 容量瓶中，然后加入 20mL 四氯汞钠吸收液，浸泡 4 h 以上，若上层溶液不澄清可 加入亚铁氰化钾溶液 及乙酸锌溶液各 2.5mL，最后用水稀释至 100 mL 刻度，过滤后备用。 3、液体试样如葡萄酒等可直接吸取 5.0～10.0 mL 试样，置于 100mL 容量瓶中，以少量 水稀释，加 20 mL 四氯汞钠吸收液，摇匀，最后加水至刻度，混匀，必要时过滤备用。 （二）、测定 吸取 0.50ml～5.0 mL 上述试样处理液于 25 mL 带塞比色管中。 另吸取 0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.50、2.00 mL 二氧化硫标准使用液（相当于 0
0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、3.0、4.0μg二氧化硫)，分别置于25l带塞比色管中。 于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至10L,然后再加入1L氨基磺酸铵溶液 (12g/L)、1mL甲醛溶液(2g/L)及1l盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置20min。用1cm 比色杯，以零管调节零点，于波长550m处测吸光度，绘制标淮曲线比较。 五、结果计算 A×1000 100x100) 式中 X一一测试样中二氧化硫的含量(g/kg): A一一测定用样液中二氧化硫的质量（μg): m一—试样质量(g): V一一测定用样液的体积(L)。 计算结果表示到三位有效数字。 六、注意事项及说明 1、本实验法检出浓度为1g/kg 2、要求在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过10%。 3、亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合，以结合型的亚硫酸存在于食品中。加碱是将食 品中的二氧化硫释放出来，加硫酸是为了中和碱，这是因为总的显色反应是在微酸性条件下 进行的。 4、显色时间时显色有影响，所以在显色时要严格控制显色时间。 5、盐酸副玫瑰苯胺的精制方法如下：称取20g盐副玫瑰苯胺于400mL水中，用50mL盐 酸(1+5)酸化，徐徐搅拌，加4g~5g活性炭，加热煮沸2mm。将混合物倒入大漏斗中，过 滤（用保温漏斗趁热过滤）。滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再 悬浮于1000ml乙醚-乙醇(10：1)的混合液中，振摇3min~5min,以布氏漏斗抽滤，再用 乙醚反复洗涤至醚层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥，研细后贮于棕色瓶中保存。 6、如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替。 7、氯化高汞试剂有毒，使用时应注意。 8、氨基磺酸铵溶液不稳定，宜随配随用，隔绝空气保存，可稳定一周。 七、思考题 1、二氧化硫标准溶液使用时为何要对其浓度进行标定？
0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、3.0、4.0μg 二氧化硫），分别置于 25mL 带塞比色管中。 于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至 10 mL，然后再加入 1 mL 氨基磺酸铵溶液 （12g/L）、1mL 甲醛溶液（2g/L）及 1 mL 盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置 20 min。用 1cm 比色杯，以零管调节零点，于波长 550 nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较。 五、结果计算 1000 1000 100 1000 = V m A X 式中 X——测试样中二氧化硫的含量（g/kg）； A——测定用样液中二氧化硫的质量（μg）； m——试样质量（g）； V——测定用样液的体积（mL）。 计算结果表示到三位有效数字。 六、注意事项及说明 1、本实验法检出浓度为 1mg/kg。 2、要求在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过 10%。 3、亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合，以结合型的亚硫酸存在于食品中。加碱是将食 品中的二氧化硫释放出来，加硫酸是为了中和碱，这是因为总的显色反应是在微酸性条件下 进行的。 4、显色时间时显色有影响，所以在显色时要严格控制显色时间。 5、盐酸副玫瑰苯胺的精制方法如下：称取 20g 盐副玫瑰苯胺于 400mL 水中，用 50mL 盐 酸（1+5）酸化，徐徐搅拌，加 4g～5g 活性炭，加热煮沸 2mm。将混合物倒入大漏斗中，过 滤（用保温漏斗趁热过滤）。滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再 悬浮于 1000mL 乙醚-乙醇（10:1）的混合液中，振摇 3min～5min，以布氏漏斗抽滤，再用 乙醚反复洗涤至醚层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥，研细后贮于棕色瓶中保存。 6、如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替。 7、氯化高汞试剂有毒，使用时应注意。 8、氨基磺酸铵溶液不稳定，宜随配随用，隔绝空气保存，可稳定一周。 七、思考题 1、二氧化硫标准溶液使用时为何要对其浓度进行标定？
2、饼干、粉丝等样品处理时，加入亚铁氰化钾溶液以及乙酸锌溶液的目的是什么？ 做好本实验的操作要点是什么？
2、饼干、粉丝等样品处理时，加入亚铁氰化钾溶液以及乙酸锌溶液的目的是什么？ 做好本实验的操作要点是什么？