实验一急性毒性试验（改进意氏法） 一、目的与要求 1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。 2、观察马钱子的毒性反应。 二、实验原理 急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反 应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物 生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。致死量的测定也 较准确。在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、 耳壳苍白或充血、突眼、步履瞒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、 大小便失禁等不良反应。 致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能够引起试 验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号LD50表示。由 于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒 程度的重要常数。LD50测定的方法有多种，如B1iss法、改进寇氏法、 简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。以上 方法虽各有特点，但都有共同的要求： (1)动物：均选用体重17~22克健康小鼠（同次试验体重相差不 得超过4克)，或选用体重120~150克（同次试验体重相差不得超过1 0克)健康大鼠作实验动物。性别相同或雌雄各半
实验一 急性毒性试验（改进寇氏法） 一、目的与要求 1、学习急性毒性试验的方法，掌握 LD50 的测定方法。 2、观察马钱子的毒性反应。 二、实验原理 急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反 应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物 生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。致死量的测定也 较准确。在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、 耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、 大小便失禁等不良反应。 致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能够引起试 验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号 LD50 表示。由 于 LD50 的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒 程度的重要常数。LD50 测定的方法有多种，如 Bliss 法、改进寇氏法、 简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。以上 方法虽各有特点，但都有共同的要求： （1）动物：均选用体重 17～22 克健康小鼠（同次试验体重相差不 得超过 4 克），或选用体重 120～150 克（同次试验体重相差不得超过 1 0 克）健康大鼠作实验动物。性别相同或雌雄各半
(2)给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床 所采用的相同，溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。值得提出的是， 临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速， 颇为常用。若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性 病变等)，那么啮齿类动物腹腔注射的LD50,参数很接近于静脉给药的 LD50。口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。 (3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。观察期间应逐日 记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。 (4)正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受 试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。正式 试验组数不得少于三个剂量组，一般选用4~5个剂量组，每组动物数 为10~20只。 (5)报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、体重范围、 给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受试药物的配制方法、给药 剂量、各组剂量间的比值（一般以0.65~0.85为宜）、给药容积、观 察时间及计算方法。还须标出LD50的95%可信限。 三、实验材料和试剂 动物：小鼠 药品：马钱子水煎液 器材：注射器、灌胃针头、鼠笼 四、操作方法
（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床 所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的 LD50。值得提出的是， 临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速， 颇为常用。若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性 病变等），那么啮齿类动物腹腔注射的 LD50，参数很接近于静脉给药的 LD50。口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。 (3)试验周期和观察指标：给药后至少观察 7 天。观察期间应逐日 记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。 （4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受 试药物引起 0%和 100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。正式 试验组数不得少于三个剂量组，一般选用 4～5 个剂量组，每组动物数 为 10～20 只。 （5）报告 LD50 时需注明实验动物的种属及品系、性别、体重范围、 给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受试药物的配制方法、给药 剂量、各组剂量间的比值（一般以 0.65～0.85 为宜）、给药容积、观 察时间及计算方法。还须标出 LD50 的 95%可信限。 三、实验材料和试剂 动物：小鼠 药品：马钱子水煎液 器材：注射器、灌胃针头、鼠笼 四、操作方法
1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%(Dm)和100% (Dm)死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动物(6~ 9只小鼠)进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一般以1：0.5 或1：0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重为度。预试实验 应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。 2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4~6个剂 量组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2~3组。组数 愈少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少10只动物（分组 时应注意分层随机均匀化的原则)。本实验要求最大反应率为100%，最 小反应率为0%，或至少反应率接近100%或0%。组间剂量比值(1：K), 常用1：0.8或1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的100%和0%反 应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100%的反应率， 小剂量组也只有一个0%的反应率。 分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的受试药 物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开始，以便从最初几个 剂量组动物接受药物后的反应来判断两端剂量是否合适，便于调整剂量 和组数。为了提高实验的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释 法”配置。即使每只动物的用药体积相等(0.2ml/10g),而溶质不等。 给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。 五、实验结果记录与计算
1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物 0%（Dn）和 100% （Dm）死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动物（6～ 9 只小鼠）进行，将动物随机分为 3 组，组间剂量比值一般以 1：0.5 或 1：0.7 为宜。灌服或腹腔注射量以 0.2ml/10g 体重为度。预试实验 应进行到找出 Dn 和 Dm 后方可安排正式实验。 2、正式实验：在预试实验测得 Dn 和 Dm 的剂量范围内设 4～6 个剂 量组，最多 10 组。最理想的结果是使 LD50 的上下各有 2～3 组。组数 愈少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少 10 只动物（分组 时应注意分层随机均匀化的原则）。本实验要求最大反应率为 100%，最 小反应率为 0%， 或至少反应率接近 100%或 0%。组间剂量比值（1：K）， 常用 1：0.8 或 1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的 100%和 0%反 应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个 100%的反应率， 小剂量组也只有一个 0%的反应率。 分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的受试药 物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开始，以便从最初几个 剂量组动物接受药物后的反应来判断两端剂量是否合适，便于调整剂量 和组数。为了提高实验的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释 法”配置。即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g），而溶质不等。 给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。 五、实验结果记录与计算
马钱子水煎液对小鼠死亡率的影响 组别剂量 Logd(X)死亡数死亡率(P)p2P-p2 g/kg(d) 1 公式1： (1ogL,D50) X50=Xri(ΣP-05) 则LD50-1og1X50 公式2：Sx50=i*V∑p-∑p2)n-1) 公式3：LD50的95%可信限=1g1(X50士1.96SX50) LD50的平均可信限=LD50士(LD50高限-LD50低限)/2 Xm:最大剂量组剂量的对数值 i:相邻两组剂量(d)对数值之差，或相邻两组高剂量与低剂量之比的对数。 P:各组动物的死亡率，用小数表示。 ΣP:为各组动物死亡率的总和。 n:每组动物数。 Sx50:1ogLD50的标准误
马钱子水煎液对小鼠死亡率的影响 组别 剂量 g/kg(d) Logd(X) 死亡数 死亡率（P） P2 P-P2 1 2 3 4 公式 1: （logLD50） X50=Xm-i(ΣP-05) 则 LD50=log-1 X50 公式 2： Sx50=i* (p −p2)/(n −1) 公式 3：LD50 的 95%可信限=lg-1（X50±1.96S X50） LD50 的平均可信限= LD50±（LD50 高限- LD50 低限）/2 Xm：最大剂量组剂量的对数值 i：相邻两组剂量（d）对数值之差，或相邻两组高剂量与低剂量之比的对数。 P：各组动物的死亡率，用小数表示。 ΣP：为各组动物死亡率的总和。 n：每组动物数。 Sx50：logLD50 的标准误