安徽科技学院：《兽医临床诊断学》课程教学资源（实习实训）实验九血常规检验（二）.pdf_大学文库

实验九血常规检验（二） (白细胞分类计数方法) 目的和要求掌握血液涂片的制作方法、染色技术、白细胞分类计数方法，要求能制出合格的血片并能认识各类细胞。内容和方法鼻智购公类计数：白细胞分类计数是将被检血推片染色，在显微镜下观察、计数并求出各种白细胞与的百分学白细陶分米计教法是将血湾制成分布均匀的流涂片，用有合染料染色，相据冬白细胞着色特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对换病有辅助诊意义 (二)器材与试剂载玻片、染色盆及支架、染色缸、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数器、吸水纸等。 1.瑞氏(Wright).染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。将染色粉置子研体中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将己溶解的染液倒入洁净的棕色玻瓶，剩下未溶解的染料再加入少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室温中保存7日后即可应用。新配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性。保存时间越久染色越王。吉氏染粉0.5g,纯甘油33.0ml,纯甲醇33.0ml。先将染粉研钵中，加 ,(60℃)1一2h,经常用玻璃棒搅拌，使染色粉溶解，最后加入甲醇混合，装棕色瓶中保存1周后过滤即成原液。临用时取此原液1ml,加 PH6.8的缓冲液和新鲜蒸馏水10ml,即成应用液。 3.场甘油和在加甲醇液，如此连续数次，直至500ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振摇3min,共S 天，存放1周后可使用图9-1涂制血片的方法 2各利图9一3白细胞分类计数顺序 1.四区计数法2.三区计数法3.中央曲折计数法 (三)涂片方法取无油脂的洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（推片一端的两角应磨去，也可用血细胞计数板的盖玻片作为推片)，用左手的拇指夹持载片，右手持推片：先取被检血1小滴，放于载玻片的右端，将推片倾斜30°~40°角，使其一端与载片接触并放于血滴之前，向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散形成一条线状之后，以均等的速度轻轻向前推动推片，血孩均为拉涂我布形感，度要适当有的对光观察时成霓虹色，血膜应位于玻片中央，两端动物性别、编号和日期见图91及 1瑞氏染色法是最常用的染色法之一。将自然干燥的血片用蜡笔于血膜之两端各划一道横线，以 n后滴加等数木，轻轻动使混并计滴数将水冲洗吸油倍 2姬姆萨染色法涂片用甲醇固定1一2mn。将血片直立于装有姬姆萨氏应用液的染色缸中，染色30一 60min 取出用蒸干燥后镜检。 3.瑞氏与姬姆萨氏复合染色法将血片置于染色架上，滴加染液3~5滴，使其迅速布满血膜，约 1min后，滴加缓冲液5~10滴，轻轻摇动玻片使之充分混合，5~10min后用流水冲去染液，待干镜检。 (五)分类计数先用低倍镜检视血片上白细胞的分布情况，一般是粒细胞单核细胞及体积核大的细胞分布在血片的上、下缘及尾端，淋巴细胞多在血片的起始端。滴加显微镜油，转过镜头进行分类计数。计数时，为避免重复和遗漏，可用四区、三区、或中央曲折计数法见图93，推移血片，记录每区的各种白细胞数。每张血片最少计数100个白细胞，连续观察2~3张血片，求出各种白细胞的百

实验九血常规检验（二）（白细胞分类计数方法）目的和要求掌握血液涂片的制作方法、染色技术、白细胞分类计数方法，要求能制出合格的血片并能认识各类细胞。内容和方法白细胞分类计数：白细胞分类计数是将被检血推片染色，在显微镜下观察、计数并求出各种白细胞所占的百分率。（一）原理白细胞分类计数法是将血液制成分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞着色特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。（二）器材与试剂载玻片、染色盆及支架、染色缸、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数器、吸水纸等。 1.瑞氏（Wright）染液瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml。将染色粉置于研钵中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将已溶解的染液倒入洁净的棕色玻瓶，剩下未溶解的染料再加入少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室温中保存7日后即可应用。新配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性。保存时间越久，染色力越佳。 2.吉（Giemsa）氏染液吉氏染粉0.5g，纯甘油33.0ml，纯甲醇33.0ml。先将染粉置于研钵中，加入少量甘油，充分研磨，然后加入其余量的甘油，水浴加温（60℃）1～2h，经常用玻璃棒搅拌，使染色粉溶解，最后加入甲醇混合，装棕色瓶中保存1周后过滤即成原液。临用时取此原液1ml，加 PH6.8的缓冲液和新鲜蒸馏水10ml，即成应用液。 3.瑞—吉氏复合染色液瑞氏染粉1.0g，吉氏染粉0.3g，中性甘油10ml，甲醇500ml。先将瑞氏染粉与吉氏染粉置于研钵中，加入少量甘油和甲醇，充分研磨，吸出上层染液置棕色瓶中，在加甲醇继续研磨，再吸出上液，如此连续数次，直至500ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振摇3min，共5 天，存放1周后可使用。图9－1涂制血片的方法图9—2 各种血膜的比较 4.缓冲液（PH6.4～6.8）磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g。图9—3 白细胞分类计数顺序 1.四区计数法 2.三区计数法 3.中央曲折计数法（三）涂片方法取无油脂的洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（推片一端的两角应磨去，也可用血细胞计数板的盖玻片作为推片），用左手的拇指夹持载片，右手持推片；先取被检血1小滴，放于载玻片的右端，将推片倾斜30°～40°角，使其一端与载片接触并放于血滴之前，向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散形成一条线状之后，以均等的速度轻轻向前推动推片，则血液均匀地被涂于载片上而形成一薄膜。良好的血片，血液应分布均匀，厚度要适当。对光观察时成霓虹色，血膜应位于玻片中央，两端留有空隙，以便注明动物性别、编号和日期，见图9-1及图9-2。（四）染色方法 1.瑞氏染色法是最常用的染色法之一。将自然干燥的血片用蜡笔于血膜之两端各划一道横线，以防染色液外溢。置血片于水平支架上，滴瑞士染液于血片上，并计其滴数，直至将血膜浸盖为止，待染1～2min后，滴加等量缓冲液或蒸馏水，轻轻吹动使之混匀，再染4～10min，用蒸馏水冲洗，吸干，油镜观察。 2.姬姆萨染色法涂片用甲醇固定1～2min。将血片直立于装有姬姆萨氏应用液的染色缸中，染色 30～60min，取出用蒸馏水冲洗，干燥后镜检。 3.瑞氏与姬姆萨氏复合染色法将血片置于染色架上，滴加染液3～5滴，使其迅速布满血膜，约 1min后，滴加缓冲液5～10滴，轻轻摇动玻片使之充分混合，5～10min后用流水冲去染液，待干镜检。（五）分类计数先用低倍镜检视血片上白细胞的分布情况，一般是粒细胞、单核细胞及体积较大的细胞分布在血片的上、下缘及尾端，淋巴细胞多在血片的起始端。滴加显微镜油，转过镜头进行分类计数。计数时，为避免重复和遗漏，可用四区、三区、或中央曲折计数法见图9-3，推移血片，记录每一区的各种白细胞数。每张血片最少计数100个白细胞，连续观察2～3张血片，求出各种白细胞的百

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