实验九血常规检验（二） (白细胞分类计数方法) 目的和要求 掌握血液涂片的制作方法、染色技术、白细胞分类计数方法，要求能制出合格的血片并能认识各 类细胞。 内容和方法 鼻智购公类计数：白细胞分类计数是将被检血推片染色，在显微镜下观察、计数并求出各种白细胞 与的百分学白细陶分米计教法是将血湾制成分布均匀的流涂片，用有合染料染色，相据冬 白细胞着色特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对换 病有辅助诊意义 (二)器材与试剂载玻片、染色盆及支架、染色缸、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数 器、吸水纸等。 1.瑞氏(Wright).染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。 将染色粉置子研体中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将己溶解的染液倒入洁净的棕色玻瓶， 剩下未溶解的染料再加入少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室 温中保存7日后即可应用。新配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性。保存时间越久 染色 越王。 吉氏染 粉0.5g,纯甘油33.0ml,纯甲醇33.0ml。先将染粉 研钵中，加 ,(60℃)1一2h,经常用玻璃棒搅拌，使 染色粉溶解，最后加入甲醇混合，装棕色瓶中保存1周后过滤即成原液。临用时取此原液1ml,加 PH6.8的缓冲液和新鲜蒸馏水10ml,即成应用液。 3.场 甘油和 在加甲醇 液，如此连续数次，直至500ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振摇3min,共S 天，存放1周后可使用 图9-1涂制血片的方法 2各利 图9一3白细胞分类计数顺序 1.四区计数法2.三区计数法3.中央曲折计数法 (三)涂片方法取无油脂的洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（推片一端的两角 应磨去，也可用血细胞计数板的盖玻片作为推片)，用左手的拇指夹持载片，右手持推片：先取被 检血1小滴，放于载玻片的右端，将推片倾斜30°~40°角，使其一端与载片接触并放于血滴之前， 向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散形成一条线状之后，以均等的速度轻轻向前推动推片， 血孩均为拉涂我布形感，度要适当 有 的 对光观 察时成霓虹色，血膜应位于玻片中央，两端 动物性别、编号和日期见图91及 1瑞氏染色法是最常用的染色法之一。将自然干燥的血片用蜡笔于血膜之两端各划一道横线，以 n后 滴加等数 木，轻轻动使混并计滴数 将水冲洗吸 油倍 2姬姆萨染色法涂片用甲醇固定1一2mn。将血片直立于装有姬姆萨氏应用液的染色缸中，染 色30一 60min 取出用蒸 干燥后镜检。 3.瑞氏与姬姆萨氏复合染色法将血片置于染色架上，滴加染液3~5滴，使其迅速布满血膜，约 1min后，滴加缓冲液5~10滴，轻轻摇动玻片使之充分混合，5~10min后用流水冲去染液，待干镜 检。 (五)分类计数先用低倍镜检视血片上白细胞的分布情况， 一般是粒细胞 单核细胞及体积核 大的细胞分布在血片的上、下缘及尾端，淋巴细胞多在血片的起始端。滴加显微镜油，转过镜头进 行分类计数。 计数时，为避免重复和遗漏，可用四区、三区、或中央曲折计数法见图93，推移血片，记录每 区的各种白细胞数。每张血片最少计数100个白细胞，连续观察2~3张血片，求出各种白细胞的百
实验九 血常规检验（二） （白细胞分类计数方法） 目 的 和 要 求 掌握血液涂片的制作方法、染色技术、白细胞分类计数方法，要求能制出合格的血片并能认识各 类细胞。 内 容 和 方 法 白细胞分类计数：白细胞分类计数是将被检血推片染色，在显微镜下观察、计数并求出各种白细胞 所占的百分率。 （一）原理 白细胞分类计数法是将血液制成分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类 白细胞着色特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾 病有辅助诊断意义。 （二）器材与试剂 载玻片、染色盆及支架、染色缸、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数 器、吸水纸等。 1.瑞氏（Wright）染液 瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml。 将染色粉置于研钵中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将已溶解的染液倒入洁净的棕色玻瓶， 剩下未溶解的染料再加入少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室 温中保存7日后即可应用。新配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性。保存时间越久，染色力越佳。 2.吉（Giemsa）氏染液 吉氏染粉0.5g，纯甘油33.0ml，纯甲醇33.0ml。先将染粉置于研钵中，加 入少量甘油，充分研磨，然后加入其余量的甘油，水浴加温（60℃）1～2h，经常用玻璃棒搅拌，使 染色粉溶解，最后加入甲醇混合，装棕色瓶中保存1周后过滤即成原液。临用时取此原液1ml，加 PH6.8的缓冲液和新鲜蒸馏水10ml，即成应用液。 3.瑞—吉氏复合染色液 瑞氏染粉1.0g，吉氏染粉0.3g，中性甘油10ml，甲醇500ml。先将瑞氏染 粉与吉氏染粉置于研钵中，加入少量甘油和甲醇，充分研磨，吸出上层染液置棕色瓶中，在加甲醇 继续研磨，再吸出上液，如此连续数次，直至500ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振摇3min，共5 天，存放1周后可使用。 图9－1涂制血片的方法 图9—2 各种血膜的比较 4.缓冲液（PH6.4～6.8）磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g。 图9—3 白细胞分类计数顺序 1.四区计数法 2.三区计数法 3.中央曲折计数法 （三）涂片方法 取无油脂的洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（推片一端的两角 应磨去，也可用血细胞计数板的盖玻片作为推片），用左手的拇指夹持载片，右手持推片；先取被 检血1小滴，放于载玻片的右端，将推片倾斜30°～40°角，使其一端与载片接触并放于血滴之前， 向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散形成一条线状之后，以均等的速度轻轻向前推动推片， 则血液均匀地被涂于载片上而形成一薄膜。 良好的血片，血液应分布均匀，厚度要适当。对光观察时成霓虹色，血膜应位于玻片中央，两端 留有空隙，以便注明动物性别、编号和日期，见图9-1及图9-2。 （四）染色方法 1.瑞氏染色法 是最常用的染色法之一。将自然干燥的血片用蜡笔于血膜之两端各划一道横线，以 防染色液外溢。置血片于水平支架上，滴瑞士染液于血片上，并计其滴数，直至将血膜浸盖为止， 待染1～2min后，滴加等量缓冲液或蒸馏水，轻轻吹动使之混匀，再染4～10min，用蒸馏水冲洗，吸 干，油镜观察。 2.姬姆萨染色法 涂片用甲醇固定1～2min。将血片直立于装有姬姆萨氏应用液的染色缸中，染 色 30～60min，取出用蒸馏水冲洗，干燥后镜检。 3.瑞氏与姬姆萨氏复合染色法 将血片置于染色架上，滴加染液3～5滴，使其迅速布满血膜，约 1min后，滴加缓冲液5～10滴，轻轻摇动玻片使之充分混合，5～10min后用流水冲去染液，待干镜 检。 （五）分类计数 先用低倍镜检视血片上白细胞的分布情况，一般是粒细胞、单核细胞及体积较 大的细胞分布在血片的上、下缘及尾端，淋巴细胞多在血片的起始端。滴加显微镜油，转过镜头进 行分类计数。 计数时，为避免重复和遗漏，可用四区、三区、或中央曲折计数法见图9-3，推移血片，记录每 一区的各种白细胞数。每张血片最少计数100个白细胞，连续观察2～3张血片，求出各种白细胞的百
分比。记录时，可用“白细胞分类计数器”，也可事先设计一个表格，用画“正”字的方法记录， 以便于统计百分数。白细胞分类计数表见表91。 (六)各种白细胞的形态特征各种白细胞的形态特征主要表现在细胞核及细胞浆的特有形状 上，并应注意细胞的大小。各种白细胞的形态特征详见表92。 表9一1白细胞分类计数统计表 动物种类 门诊号 诊新 日期 计数区 ⅡⅢV合计（个）百分比(%) 嗜碱性 1 1 嗜酸性 2 8 4 晚幼细胞 嗜中性杆状核 1 分叶核 37 31 22 30 林巴细胞 15 17 19 15 66 33 1 50 4 46 200 100 表9一2各种白细胞的形态特征（瑞氏染色法） 白细胞分类 细胞核 细胞 颜色 透明带 颗粒 嗜中性幼稚型 无 红或 粉红 嗜中性杆状核 中心或偏心性 形蛙 浅紫蓝色 多 杨 中 肠形 色 多 粉无 粉红 中性分叶核 深蓝紫色 红 色或 紫红 偏心性 色 嗜酸性白细胞
分比。记录时，可用“白细胞分类计数器”，也可事先设计一个表格，用画“正”字的方法记录， 以便于统计百分数。白细胞分类计数表见表9-1。 （六）各种白细胞的形态特征 各种白细胞的形态特征主要表现在细胞核及细胞浆的特有形状 上，并应注意细胞的大小。各种白细胞的形态特征详见表9-2。 表9—1白细胞分类计数统计表 动物种类 门诊号 诊断 日期 计数区 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 合计(个) 百分比(%) 嗜碱性 1 1 2 1 嗜酸性 晚幼细胞 2 3 2 1 8 4 嗜中性杆状核 3 2 1 2 8 4 分叶核 37 31 22 30 110 55 淋巴细胞 15 17 19 15 66 33 单核细胞 2 1 2 1 6 3 合计 50 54 46 50 200 100 表9—2 各种白细胞的形态特征（瑞氏染色法） 白细胞分类 细胞核 细胞 浆 位 置 形状 颜 色 核染 色质 细 胞 核 膜 多 少 颜色 透 明 带 颗粒 嗜中性幼稚型 偏 心 性 椭圆 红 紫 色 细 致 不 清 楚 中 等 蓝、 粉红 色 无 红或 蓝、 细致 或粗 糙 嗜中性杆状核 中 心 或 偏 心 性 马蹄 形蜡 肠形 浅 紫 蓝 色 细 致 存 在 多 粉 红 色 无 嗜 中、 嗜酸 或嗜 碱 嗜 中性分叶核 中 心 或 偏 心 性 3～5 叶者 居多 深 蓝 紫 色 粗糙 存 在 多 淡粉 红色 无 粉红 色或 紫红 色 嗜酸性白细胞 中 心 2～3 叶者 较 淡 粗糙 存 在 多 蓝、 粉红 无 深 红
或偏心性 居刻紫 色 分布 蓝色 其它 动物 次 嗜碱性白细胞 中心性 叶状 粗糙 存 多 浅粉 无 蓝黑 较淡紫蓝色 红色 色 分布 不均 大多 在细 胞的 边缘 淋巴细胞 少 深紫蓝色 大块特 鎏 天 无或 深蓝 幼少 或淡 红色 密 胞浆深染时存在 颗粒 大单核细胞 豆 淡 细致 很 灰蓝 无 很 偏心或中心性 紫蓝色 在 细 圆形 不齐 淡紫 (七)正常值见表9-3 表9一3 各种动物白细胞分类正常平均值(%) 动物种 嗜碱性 嗜酸性 嗜中性白细胞 淋巴细 单核细 类 白细胞 白细胞 中幼细 晚幼细 杆状核 分叶核 胞 胞 胞 胞 牛 0.5 4.0 0.5 3.0 33.0 57.0 2.0 马 0.5 4.5 0.5 4.0 54.0 34.0 2.5 0.5 4.5 1.0 3.0 33.0 55.5 3.5 0.5 2.5 1.0 5.5 32.0 55.0 3.5 骆驼 0.5 8.0 1.0 6.5 47.0 35.0 2.0
或 偏 心 性 居多 紫 蓝 色 色 分布 均 匀， 马的 最 大， 其它 动物 次之 嗜碱性白细胞 中 心 性 叶状 核不 太清 楚 较 淡 紫 蓝 色 粗糙 存 在 多 浅粉 红色 无 蓝黑 色， 分布 不均 匀， 大多 在细 胞的 边缘 淋巴细胞 偏 心 性 圆形 或微 凹入 深 紫 蓝 色 大 块、 中等 块致 密 浓 密 少 天蓝 深蓝 或淡 红色 胞 浆 深 染 时 存 在 无或 幼少 数嗜 天青 蓝色 颗粒 大单核细胞 偏 心 或 中 心 性 豆 形、 山字 形椭 圆形 淡 紫 蓝 色 细致 网 状、 边缘 不齐 存 在 很 多 灰蓝 或云 蓝色 无 很 多， 非常 细 小， 淡紫 色 （七）正常值 见表9-3 表9—3 各种动物白细胞分类正常平均值（％） 动物种 类 嗜碱性 白细胞 嗜酸性 白细胞 嗜中性白细胞 淋巴细 胞 单核细 中幼细 胞 胞 晚幼细 胞 杆状核 分叶核 牛 马 羊 猪 骆驼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 4.0 4.5 4.5 2.5 8.0 0.5 0.5 1.0 1.0 1.0 3.0 4.0 3.0 5.5 6.5 33.0 54.0 33.0 32.0 47.0 57.0 34.0 55.5 55.0 35.0 2.0 2.5 3.5 3.5 2.0
