4 固相析出分离技术
4 固相析出分离技术
4.1概念 口使溶质以固体形式从溶液中沉降析出的分 离纯化技术称为固相析出分离技术。 口固体形式有无定形态固体和晶体
4.1 概念 使溶质以固体形式从溶液中沉降析出的分 离纯化技术称为固相析出分离技术。 固体形式有无定形态固体和晶体
概念 口结晶法：在固相析出过程中，析出物为晶 体时称为结晶法。 口沉淀法：在固相析出过程中，析出物为无 定形固体时则称为沉淀法
概念 结晶法：在固相析出过程中，析出物为晶 体时称为结晶法。 沉淀法：在固相析出过程中，析出物为无 定形固体时则称为沉淀法
固相析出分离技术主要方法 口等电点沉淀法 口变性沉淀法 口盐析法 口有机溶剂沉淀法 口反应沉淀法 口结晶法等
固相析出分离技术主要方法 等电点沉淀法 变性沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀法 反应沉淀法 结晶法等
4.2沉淀方法 4.2.1等电点沉淀法 1概念：利用两性生化物质在等电点时溶解度最 低，以及不同的两性生化物质具有不同的等电点这 一特性，对蛋白质、氨基酸等两性生化物质进行分 离纯化的方法称为等电点沉淀法。 COOH +H +H' NH. 蛋白质分子 C() C0) COOH H H OH H NH,' NH, 阴离子 兼性离子 阳离子
4.2 沉淀方法 4.2.1 等电点沉淀法 1 概念：利用两性生化物质在等电点时溶解度最 低，以及不同的两性生化物质具有不同的等电点这 一特性，对蛋白质、氨基酸等两性生化物质进行分 离纯化的方法称为等电点沉淀法
R-CH-COOH NH2 R-CH-COOH +OH- R-CH-COO +OH- R-CH-COO NH3" +H+ NH3" +H+ NH2 pHpI 阳离子 氨基酸的兼性离子 阴离子
氨基酸 分子量 pKa a-COOH R基团 蛋白质中 a-阻3+ pI 出现的几率()率 甘氨酸 75 2.34 9.60 5.97 7.5 丙氨酸 89 2.34 9.69 6.01 9.0 缬氨酸 117 2.32 9.62 5.97 6.9 亮氨酸 131 2.36 9.60 5.98 7.5 异亮氨酸 131 2.36 9.68 6.02 4.6 脯氨酸 115 1.99 10.96 6.48 4.6 苯丙氨酸 165 1.83 9.13 5.48 3.5 酩氨酸 181 2.02 9.11 10.07 5.66 3.5 色氨酸 204 2.38 9.39 5.89 1.1 丝氨酸 105 2.21 9.15 5.68 7.1 苏氨酸 119 2.11 9.62 5.87 6.0 半胱氨酸 121 1.96 8.18 10.28 5.05 2.8 蛋氨酸 149 2.28 9.21 5.74 1.7 天冬酰胺 132 2.02 8.08 5.41 4.4 谷氨酰胺 146 2.17 9.13 5.65 3.9 天冬氨酸 133 1.88 9.06 3.65 2.77 5.5 谷氨酸 147 2.19 9.67 4.25 3.22 6.2 赖氨酸 146 2.18 8.95 10.53 9.74 7.0 精氨酸 174 2.17 9.04 12.48 10.76 4.7 组氨酸 155 1.82 9.17 6.00 7.59 2.1
2特点 优点： 口操作简单 如：工业上生产胰岛素 时，在粗提液中先调 口试剂消耗量少 Ph=8.0,去除碱性蛋白 引入杂质少 质，再调pH=3.0,去 除酸性蛋白质 缺点： 口分辨率差，并且许多生物分子的等电点又比较 接近，是一种常用的分离纯化方法
2 特点 优点： 操作简单 试剂消耗量少 引入杂质少 缺点： 分辨率差，并且许多生物分子的等电点又比较 接近，是一种常用的分离纯化方法。 如：工业上生产胰岛素 时，在粗提液中先调 Ph=8.0，去除碱性蛋白 质，再调pH＝3.0，去 除酸性蛋白质
3操作及影响因素 盐离子的影响 ▣目的生物分子的稳定性 如：胰蛋白酶（Pⅰ10.1)，它在中性或偏碱的环境 中部分降解失活，所以在实际操作中避免ρH超过 5.0以上。 口生物分子在等电点附近的盐溶现象相当明显，所 以必须控制离子强度
3 操作及影响因素 盐离子的影响 目的生物分子的稳定性 如：胰蛋白酶（Pi 10.1），它在中性或偏碱的环境 中部分降解失活，所以在实际操作中避免pH超过 5.0以上。 生物分子在等电点附近的盐溶现象相当明显，所 以必须控制离子强度
4.2.2变性沉淀法 口 加热 口加入化学试剂 a调节pH
4.2.2 变性沉淀法 加热 加入化学试剂 调节pH