第四章 食用菌菌种生产 俗话说：“母壮儿肥”，好种是保证丰产、丰收的基础。 第一节食用菌菌种概述 一、菌种的概念 指人工培养进行扩大繁殖和用于生产的纯菌丝体。 二、菌种重要性 菌种：食用菌生产中的“种子”，菌种质量的好坏直接影响栽培的成败和 产量的高低，只有优良的菌种才能获得高产和优质的产品，因此生产优良的菌种 是食用菌栽培的一个极其重要的环节。 二、菌种的类型 根据菌种的来源、繁殖代数及生产目的，把菌种分为母钟、原种和栽培种 1、母种：从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。生产上用的母种 实际上是再生母种，又称一级菌种。 母种既可繁殖原种，又适于菌种保藏。 2、原种：将线种在无菌的条件下移接到粪草、木屑、棉籽壳或谷粒等固体培 养基一培养的菌种。又称二级菌种或瓶装菌种。 原种主要用于菌种的扩大培养，有时也可以直接出菇 3、栽培种：将二级种转接到相同或相似的培养基上进行扩大培育，用于生产 上的菌种。又称三级菌种或袋装菌种。 栽培种一般不用于再扩大繁殖菌种。 5 ※ 第二节 食用菌制种的条件 一、食用菌制种程序 食用菌生产就是指在严格的无菌条件下大量培养繁殖菌种的过程，一般食用 菌制种都需要经过母种、原种和栽培种三个培养步骤。 菌种生产流程 菌种 母种 原种 栽培种 又称 一级种、试管种、 斜面种 二级种、瓶装 种 三级种、袋装 种、生产种 培养容 器 试管 菌种瓶 塑料袋、菌种瓶 培养基 斜面 固体 固体 数量 少 不多 多 转接 1 支30 支（再生 母种） 1 支再生母 种8 瓶 1 瓶20 袋（瓶） 二、制种设备和条件 （一）机械设备
第四章 食用菌菌种生产 俗话说：“母壮儿肥”，好种是保证丰产、丰收的基础。 第一节食用菌菌种概述 一、菌种的概念 指人工培养进行扩大繁殖和用于生产的纯菌丝体。 二、菌种重要性 菌种：食用菌生产中的“种子”，菌种质量的好坏直接影响栽培的成败和 产量的高低，只有优良的菌种才能获得高产和优质的产品，因此生产优良的菌种 是食用菌栽培的一个极其重要的环节。 二、菌种的类型 根据菌种的来源、繁殖代数及生产目的，把菌种分为母钟、原种和栽培种 1、母种：从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。生产上用的母种 实际上是再生母种，又称一级菌种。 母种既可繁殖原种，又适于菌种保藏。 2、原种：将线种在无菌的条件下移接到粪草、木屑、棉籽壳或谷粒等固体培 养基一培养的菌种。又称二级菌种或瓶装菌种。 原种主要用于菌种的扩大培养，有时也可以直接出菇 3、栽培种：将二级种转接到相同或相似的培养基上进行扩大培育，用于生产 上的菌种。又称三级菌种或袋装菌种。 栽培种一般不用于再扩大繁殖菌种。 5 ※ 第二节 食用菌制种的条件 一、食用菌制种程序 食用菌生产就是指在严格的无菌条件下大量培养繁殖菌种的过程，一般食用 菌制种都需要经过母种、原种和栽培种三个培养步骤。 菌种生产流程 菌种 母种 原种 栽培种 又称 一级种、试管种、 斜面种 二级种、瓶装 种 三级种、袋装 种、生产种 培养容 器 试管 菌种瓶 塑料袋、菌种瓶 培养基 斜面 固体 固体 数量 少 不多 多 转接 1 支30 支（再生 母种） 1 支再生母 种8 瓶 1 瓶20 袋（瓶） 二、制种设备和条件 （一）机械设备
1、原料加工设备 枝材切片机、木片粉碎机 2、拌料分装设备 搅拌机、装瓶机 or 装袋机 （二）灭菌设备 1、灭菌设备 高压灭菌锅、常压灭菌灶 2、消毒条件 药剂、紫外灯、电子灭菌器等 （三）接种设备 1、接种条件 接种室——无菌室，4-8m2，缓冲间，紫外灯 2、接种设备 超净工作台 or 接种箱、接种工具、酒精灯 （四）培养设备 1、培养条件 菌种培养室 2、培养设备 恒温培养箱 （五）保藏设备 1、冰箱冷藏室 2、冷藏恒温库 5 ※ 第三节 食用菌菌种培养基 一、培养基 就是采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质以供给食用菌生长繁 殖的基质。 培养基必须具备三个条件： 第一：含有该菌生长发育所需的营养物质。 第二：具有一定的生长环境。 第三：必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。 （一）物理状态 1、液体培养基：是指把食用菌生长发育所需的营养物质按一定比例加水配 制而成的液体培养基。营养成分分布均匀，有利于食用菌充分接触和吸收养料， 因而菌丝体生长迅速而粗壮，同时这种液体菌种便于接种工作的机械化、自动化， 有利于提高生产效率。 缺点：是要发酵设备，成本较高，也较复杂。液体培养基常用来观察菌种的
1、原料加工设备 枝材切片机、木片粉碎机 2、拌料分装设备 搅拌机、装瓶机 or 装袋机 （二）灭菌设备 1、灭菌设备 高压灭菌锅、常压灭菌灶 2、消毒条件 药剂、紫外灯、电子灭菌器等 （三）接种设备 1、接种条件 接种室——无菌室，4-8m2，缓冲间，紫外灯 2、接种设备 超净工作台 or 接种箱、接种工具、酒精灯 （四）培养设备 1、培养条件 菌种培养室 2、培养设备 恒温培养箱 （五）保藏设备 1、冰箱冷藏室 2、冷藏恒温库 5 ※ 第三节 食用菌菌种培养基 一、培养基 就是采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质以供给食用菌生长繁 殖的基质。 培养基必须具备三个条件： 第一：含有该菌生长发育所需的营养物质。 第二：具有一定的生长环境。 第三：必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。 （一）物理状态 1、液体培养基：是指把食用菌生长发育所需的营养物质按一定比例加水配 制而成的液体培养基。营养成分分布均匀，有利于食用菌充分接触和吸收养料， 因而菌丝体生长迅速而粗壮，同时这种液体菌种便于接种工作的机械化、自动化， 有利于提高生产效率。 缺点：是要发酵设备，成本较高，也较复杂。液体培养基常用来观察菌种的
培养特征以及检查菌种的污染情况。 用途：实验室，用于生理生化方面的研究；生产上，用于培养液体菌种或生 产菌丝体及其代谢产物。 2、固体培养基：是以含有纤维素、木质素、淀粉等各种碳源物质为主， 添加适量有机氮源、无机盐等，含有一定水分呈现固体状态的培养基。 优点：原料来源广泛，价格低廉，配制容易，营养丰富。 缺点：菌丝体生长较慢。 用途：是食用菌原种和栽培种的主要培养基。 3、固化培养基：是指将各种营养物质按比例配制成营养液后，再加入适量的 凝固剂，如 2%左右的琼脂，加热至 60℃以上是液体，冷却到 40℃以下时则为固 体。 用途：主要用于母种的分离和保藏。 （二）营养来源 （1）天然培养基（利用天然来源的有机物配制而成。） （2）合成培养基（由各种纯化学物质按一定比例配制而成。） （3）半合成培养基（由部分纯化学物质和部分天然物质配制而成。） （三）表面形式 （1）斜面培养基 （2）平面培养基 （3）高层培养基 （四）用途 （1）母种培养基 （2）原种培养基 （3）栽培种培养基 二、母种常用培养基 （一）母种培养基常用物质 马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、维生素 B1等。 马铃薯 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁 琼脂 （二）常见的母种培养基 1、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂 18-20g、 水 1000ml。 2、马铃薯综合培养基：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、磷酸二氢钾 3g、硫酸镁 1.5g、琼脂 18-20g、维生素 B110mg、水 1000ml。 3、木屑浸出汁培养基 4、棉籽壳煮汁培养基 5、豆芽汁培养基等等 （三）母种斜面培养基的制作
培养特征以及检查菌种的污染情况。 用途：实验室，用于生理生化方面的研究；生产上，用于培养液体菌种或生 产菌丝体及其代谢产物。 2、固体培养基：是以含有纤维素、木质素、淀粉等各种碳源物质为主， 添加适量有机氮源、无机盐等，含有一定水分呈现固体状态的培养基。 优点：原料来源广泛，价格低廉，配制容易，营养丰富。 缺点：菌丝体生长较慢。 用途：是食用菌原种和栽培种的主要培养基。 3、固化培养基：是指将各种营养物质按比例配制成营养液后，再加入适量的 凝固剂，如 2%左右的琼脂，加热至 60℃以上是液体，冷却到 40℃以下时则为固 体。 用途：主要用于母种的分离和保藏。 （二）营养来源 （1）天然培养基（利用天然来源的有机物配制而成。） （2）合成培养基（由各种纯化学物质按一定比例配制而成。） （3）半合成培养基（由部分纯化学物质和部分天然物质配制而成。） （三）表面形式 （1）斜面培养基 （2）平面培养基 （3）高层培养基 （四）用途 （1）母种培养基 （2）原种培养基 （3）栽培种培养基 二、母种常用培养基 （一）母种培养基常用物质 马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、维生素 B1等。 马铃薯 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁 琼脂 （二）常见的母种培养基 1、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂 18-20g、 水 1000ml。 2、马铃薯综合培养基：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、磷酸二氢钾 3g、硫酸镁 1.5g、琼脂 18-20g、维生素 B110mg、水 1000ml。 3、木屑浸出汁培养基 4、棉籽壳煮汁培养基 5、豆芽汁培养基等等 （三）母种斜面培养基的制作
1、称取 用天平称取培养基各种成分的用量。2、配制溶液 为避免发生沉淀，加入的顺序一般是先加缓冲化合物，溶解后加入主要元素， 然后是微量元素，再加入维生素等。最好是每种成分溶解后，再加入第二种营养 成分。若各种成分均不发生沉淀，也可以一起加入。 若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料时，应先制取这些原料的煮 汁，然后再把煮汁与其它成分混合。 例如：PDA 培养基的配制 把选好的马铃薯洗净，去皮挖去芽眼，切成薄片或 1 厘米大小的方块，称取 200 克放在容器中，加水 1000 毫升，加热煮沸 20～30 分钟，至软而不烂的程度， 用四层纱布过滤；取其滤液。在滤液中加入琼脂，小火加热，用玻璃棒不断搅拌， 以防溢出或焦底，至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖使其溶化，最后加水至 1000 毫升即成。3、调 pH 一般用 10％HCl 或 10％NaOH 调 pH，用 pH 试纸（或 pH 计）进行测试。 4、分装 培养基配制好后，趁热倒入大的玻璃漏斗中，打开弹簧夹，按需要分装于试管或三角瓶 内。 注意事项： （1）将漏斗导管插入试管中下部，以防培养基沾在管口或瓶口。 （2）分装体积：以试管总长的 1/4～1/5 为宜，三角瓶容量 1/3 为宜。 5、塞棉塞 这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。制棉塞的方法多种， 形状各异，总原则如下： （1）用普通棉花制作。 （2）松紧适合。 （3）塞头不要太大，一般为球状。 （1）制作斜面培养基。一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面 培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基。 8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 6、灭菌 将包扎好的试管直立放人手提高压灭菌锅内，盖上牛皮纸，在 1.05kg/cm2 压力下，灭菌 30 分钟。 7、摆斜面 灭菌后冷却到 60℃左右，从锅内取出，趁热摆成斜面。（1）制作斜面培养基。 一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基
1、称取 用天平称取培养基各种成分的用量。2、配制溶液 为避免发生沉淀，加入的顺序一般是先加缓冲化合物，溶解后加入主要元素， 然后是微量元素，再加入维生素等。最好是每种成分溶解后，再加入第二种营养 成分。若各种成分均不发生沉淀，也可以一起加入。 若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料时，应先制取这些原料的煮 汁，然后再把煮汁与其它成分混合。 例如：PDA 培养基的配制 把选好的马铃薯洗净，去皮挖去芽眼，切成薄片或 1 厘米大小的方块，称取 200 克放在容器中，加水 1000 毫升，加热煮沸 20～30 分钟，至软而不烂的程度， 用四层纱布过滤；取其滤液。在滤液中加入琼脂，小火加热，用玻璃棒不断搅拌， 以防溢出或焦底，至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖使其溶化，最后加水至 1000 毫升即成。3、调 pH 一般用 10％HCl 或 10％NaOH 调 pH，用 pH 试纸（或 pH 计）进行测试。 4、分装 培养基配制好后，趁热倒入大的玻璃漏斗中，打开弹簧夹，按需要分装于试管或三角瓶 内。 注意事项： （1）将漏斗导管插入试管中下部，以防培养基沾在管口或瓶口。 （2）分装体积：以试管总长的 1/4～1/5 为宜，三角瓶容量 1/3 为宜。 5、塞棉塞 这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。制棉塞的方法多种， 形状各异，总原则如下： （1）用普通棉花制作。 （2）松紧适合。 （3）塞头不要太大，一般为球状。 （1）制作斜面培养基。一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面 培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基。 8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 6、灭菌 将包扎好的试管直立放人手提高压灭菌锅内，盖上牛皮纸，在 1.05kg/cm2 压力下，灭菌 30 分钟。 7、摆斜面 灭菌后冷却到 60℃左右，从锅内取出，趁热摆成斜面。（1）制作斜面培养基。 一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基
8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 三、原种和栽培种常用的培养基 （一）常用的培养基 P42 1、棉籽壳培养基 棉籽壳 98%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 65%左右。 2、木屑培养基 木屑 78%、米糠或麸皮 20%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 50%～60%左右。 3、棉籽壳麦麸培养基 4、棉籽壳木屑培养基 （二）培养基的制作 1、称料 先称主料，再称辅料 2、拌料 3、调 pH 4、分装培养料 5、清洁瓶、袋外壁。 6、封口 7、灭菌 5 ※ 第四节 食用菌菌种分离 一、菌种分离方法 组织分离法（最常用的方法） 孢子分离法（不常用的方法） 基质分离法（没办法的办法） （一）组织分离法 1、概念 将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。 部分组织：子实体或菌核、菌索的任何一部分组织 2、特点： 属于无性繁殖，能保持原有菌株的优良种性。 方法简单易行，适用于所有伞菌及猴头菌。 若种菇感染病毒，不易脱毒。 （1）子实体组织分离法：他是采用子实体的任何一部分如菌盖、菌柄、菌褶、 菌肉进行组织培养，而形成菌丝体的方法。尽管子实体的任何一部分都能分离培 养出菌种，但是多年的实践经验表明，选用菌柄和菌褶交接处的菌肉最好。 子实体组织分离的方法和步骤：种菇的选择-→种菇的消毒-→切块接种-→ 培养纯化-→出菇试验→母种
8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 三、原种和栽培种常用的培养基 （一）常用的培养基 P42 1、棉籽壳培养基 棉籽壳 98%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 65%左右。 2、木屑培养基 木屑 78%、米糠或麸皮 20%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 50%～60%左右。 3、棉籽壳麦麸培养基 4、棉籽壳木屑培养基 （二）培养基的制作 1、称料 先称主料，再称辅料 2、拌料 3、调 pH 4、分装培养料 5、清洁瓶、袋外壁。 6、封口 7、灭菌 5 ※ 第四节 食用菌菌种分离 一、菌种分离方法 组织分离法（最常用的方法） 孢子分离法（不常用的方法） 基质分离法（没办法的办法） （一）组织分离法 1、概念 将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。 部分组织：子实体或菌核、菌索的任何一部分组织 2、特点： 属于无性繁殖，能保持原有菌株的优良种性。 方法简单易行，适用于所有伞菌及猴头菌。 若种菇感染病毒，不易脱毒。 （1）子实体组织分离法：他是采用子实体的任何一部分如菌盖、菌柄、菌褶、 菌肉进行组织培养，而形成菌丝体的方法。尽管子实体的任何一部分都能分离培 养出菌种，但是多年的实践经验表明，选用菌柄和菌褶交接处的菌肉最好。 子实体组织分离的方法和步骤：种菇的选择-→种菇的消毒-→切块接种-→ 培养纯化-→出菇试验→母种
操作过程（以伞菌类为例）： 种菇选择：选择头潮菇、外观典型、大小适中、菌肉肥厚、颜色正常、尚 未散孢、无病虫害、长至七八分成熟的优质单朵菇作种菇。 种菇消毒：0.1%升汞溶液或 75%酒精，浸泡或擦拭，无菌水冲洗，吸干表 面的水分。 切块接种：将分离种菇沿柄中心纵向掰成两半，用解剖刀在菇盖柄交接处 划成田字形，取黄豆大一小块菌肉组织，接在斜面培养基上。 培养纯化：在 25℃下，培养 2～4d 长出白色绒毛状菌丝体，当菌丝延伸 到基质上后，用接种针挑取菌丝顶端部分，接种到新的斜面培养基上，长满管后 即为母种。 （2）菌核组织分离法：它是从食用菌菌核分离培养获得纯菌丝的一种方法。如 猪苓、茯苓、雷丸等食用兼药用菌。 （3）菌索组织分离法：它是从食用菌菌索种分离培养得到纯菌丝的方法。如蜜 环菌、假蜜环菌等食用菌。 （二）孢子分离法 1、概念 利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。 2、特点 （1）属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种。 （2）分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌。 3、操作过程 种菇选择→种菇消毒→采集孢子→接种→培养→挑菌落→纯化菌种→母种 4、几种方法 （1）单孢子分离法 用于杂交，选育新的优质菌种。 ①平板稀释法 ②连续稀释法 （2）孢子印分离法 取成热子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌褶向下放置于灭过菌的有色纸 上，在 20～24℃静置一天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在试管 培养基上培养。 （3）孢子弹射分离法 ①悬钩法 剪取一小块新鲜的耳片组织，悬挂在盛有培养基的三角瓶的棉花塞下方或培 养皿的上盖内面，放在 25℃温箱中或室温下，2～3 天后，耳片上的担孢子会弹 射到下面的培养基表面，萌发后形成胶质菌落。 2、孢子分离法：是用食用菌成熟的有形孢子萌发培养成菌丝体而得到菌种 的方法。 （三）基质分离法（菇木分离法） 1、概念
操作过程（以伞菌类为例）： 种菇选择：选择头潮菇、外观典型、大小适中、菌肉肥厚、颜色正常、尚 未散孢、无病虫害、长至七八分成熟的优质单朵菇作种菇。 种菇消毒：0.1%升汞溶液或 75%酒精，浸泡或擦拭，无菌水冲洗，吸干表 面的水分。 切块接种：将分离种菇沿柄中心纵向掰成两半，用解剖刀在菇盖柄交接处 划成田字形，取黄豆大一小块菌肉组织，接在斜面培养基上。 培养纯化：在 25℃下，培养 2～4d 长出白色绒毛状菌丝体，当菌丝延伸 到基质上后，用接种针挑取菌丝顶端部分，接种到新的斜面培养基上，长满管后 即为母种。 （2）菌核组织分离法：它是从食用菌菌核分离培养获得纯菌丝的一种方法。如 猪苓、茯苓、雷丸等食用兼药用菌。 （3）菌索组织分离法：它是从食用菌菌索种分离培养得到纯菌丝的方法。如蜜 环菌、假蜜环菌等食用菌。 （二）孢子分离法 1、概念 利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。 2、特点 （1）属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种。 （2）分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌。 3、操作过程 种菇选择→种菇消毒→采集孢子→接种→培养→挑菌落→纯化菌种→母种 4、几种方法 （1）单孢子分离法 用于杂交，选育新的优质菌种。 ①平板稀释法 ②连续稀释法 （2）孢子印分离法 取成热子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌褶向下放置于灭过菌的有色纸 上，在 20～24℃静置一天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在试管 培养基上培养。 （3）孢子弹射分离法 ①悬钩法 剪取一小块新鲜的耳片组织，悬挂在盛有培养基的三角瓶的棉花塞下方或培 养皿的上盖内面，放在 25℃温箱中或室温下，2～3 天后，耳片上的担孢子会弹 射到下面的培养基表面，萌发后形成胶质菌落。 2、孢子分离法：是用食用菌成熟的有形孢子萌发培养成菌丝体而得到菌种 的方法。 （三）基质分离法（菇木分离法） 1、概念
从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法。 2、特点 （1）污染率高。 （2）子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种。 （3）有些子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难。 （4）还有一些菌类如银耳菌丝，只有与香灰菌丝生长在一起才能产生子实体， 如果要同时得到这两种菌丝的混合种，也只能采用基内菌丝分离法进行分离。 3、操作过程 菇木选择→菇木消毒→切块接种→培养纯化→母种 二、菌种分离提纯 1、选择性培养基 抗霉培养基：涕必灵（TBZ）或多菌灵（MBC）培养基 抗菌素：四环素、氯霉素、链霉素、金霉素等。 2、排除细菌性污染 利用某些大型真菌在温度较低（20～25℃）时，菌丝生长比细菌要快的特点， 用接种针切割菌丝的前端，接种到斜面培养基上（无冷凝水、硬度高），连续 2～ 3 次就能获得纯菌丝。 3、排除霉菌污染 切割法、基内菌丝挑取法 4、菌丝再提纯 三、出菇试验 包括菌丝生长速度、吃料能力、菌丝形态特征、生理生态特性、出菇速度、 菇体形态特征、产量、质量等。 5 ※ 第五节 食用菌菌种的扩繁与培养 引言：从外地购进或分离获得的母种数量有限，不能满足生产的需要时，要 对初次获得的母种进行扩大繁殖，以增加母种数量。 一、菌种扩大 把接种物移至培养基上，在菌种生产工艺上称接种。 在栽培工艺即生产中称播种。 条件：无菌操作（接种箱或超净工作台、酒精灯火焰周围 10cm） 1、母种扩接方法（超净工作台内接种，由试管到试管） 将试管菌种接到新的试管斜面上扩大繁殖，称为继代培养，转管。 程序：P43 （1）消毒手和菌种试管外壁。 （2）点燃酒精灯
从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法。 2、特点 （1）污染率高。 （2）子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种。 （3）有些子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难。 （4）还有一些菌类如银耳菌丝，只有与香灰菌丝生长在一起才能产生子实体， 如果要同时得到这两种菌丝的混合种，也只能采用基内菌丝分离法进行分离。 3、操作过程 菇木选择→菇木消毒→切块接种→培养纯化→母种 二、菌种分离提纯 1、选择性培养基 抗霉培养基：涕必灵（TBZ）或多菌灵（MBC）培养基 抗菌素：四环素、氯霉素、链霉素、金霉素等。 2、排除细菌性污染 利用某些大型真菌在温度较低（20～25℃）时，菌丝生长比细菌要快的特点， 用接种针切割菌丝的前端，接种到斜面培养基上（无冷凝水、硬度高），连续 2～ 3 次就能获得纯菌丝。 3、排除霉菌污染 切割法、基内菌丝挑取法 4、菌丝再提纯 三、出菇试验 包括菌丝生长速度、吃料能力、菌丝形态特征、生理生态特性、出菇速度、 菇体形态特征、产量、质量等。 5 ※ 第五节 食用菌菌种的扩繁与培养 引言：从外地购进或分离获得的母种数量有限，不能满足生产的需要时，要 对初次获得的母种进行扩大繁殖，以增加母种数量。 一、菌种扩大 把接种物移至培养基上，在菌种生产工艺上称接种。 在栽培工艺即生产中称播种。 条件：无菌操作（接种箱或超净工作台、酒精灯火焰周围 10cm） 1、母种扩接方法（超净工作台内接种，由试管到试管） 将试管菌种接到新的试管斜面上扩大繁殖，称为继代培养，转管。 程序：P43 （1）消毒手和菌种试管外壁。 （2）点燃酒精灯
（3）用左手的大拇指和其他四指并握要转接的菌种和斜面培养基，在酒精 灯附近拔掉棉塞。 （4）在酒精灯灼烧接种锄和试管口。 （5）冷却接种锄，取少量菌种（绿豆大小），至斜面培养基上。 （6）塞上棉塞，贴好标签。 整个过程要快速、准确、熟练。 1 支→30 支 2、原种扩接方法（超净工作台内接种，由试管到瓶或塑料袋） （1）消毒手和母种试管外壁。 （2）点燃酒精灯。 （3）拔掉母种棉塞，在酒精灯火焰上灼烧试管口和接种锄，将母种固定。 （4）拔掉菌种瓶棉塞，取 2 块 1cm2菌种，至菌种瓶内。 （5）塞上棉塞，贴好标签 1 支母种→10 瓶原种 3、栽培种扩接方法 （1）原种瓶棉塞进行消毒处理。 （2）消毒手和原种瓶外壁。 （3）点燃酒精灯。 （4）拔掉原种棉塞，在酒精灯火焰上灼烧原种瓶口和接种匙，将原种瓶固 定。 （5）拔掉菌种瓶棉塞，将表面的老菌种块和菌皮挖掉，用接种匙捣碎菌种， 取满勺菌种至栽培袋内。 （6）塞上棉塞，贴好标签。 1 瓶原种→20 瓶栽培种 二、菌种的培养 1、母种培养 （1）适温培养 在恒温箱（室）培养 种块有萌发，并向培养基上蔓延后，将培养温度降低 2～3℃，促使菌丝健 壮生长。 （2）注意通风 通风不足，菌丝生长缓慢，棉塞上易滋生霉菌。 （3）定期检查 前几天，要逐管检查，以防掩盖杂菌。发现污染，及时淘汰。 （4）详实记录 记录菌株来源、转接时间、培养基种类、发菌的温湿度、菌丝生长情况，以 及污染现象、数目
（3）用左手的大拇指和其他四指并握要转接的菌种和斜面培养基，在酒精 灯附近拔掉棉塞。 （4）在酒精灯灼烧接种锄和试管口。 （5）冷却接种锄，取少量菌种（绿豆大小），至斜面培养基上。 （6）塞上棉塞，贴好标签。 整个过程要快速、准确、熟练。 1 支→30 支 2、原种扩接方法（超净工作台内接种，由试管到瓶或塑料袋） （1）消毒手和母种试管外壁。 （2）点燃酒精灯。 （3）拔掉母种棉塞，在酒精灯火焰上灼烧试管口和接种锄，将母种固定。 （4）拔掉菌种瓶棉塞，取 2 块 1cm2菌种，至菌种瓶内。 （5）塞上棉塞，贴好标签 1 支母种→10 瓶原种 3、栽培种扩接方法 （1）原种瓶棉塞进行消毒处理。 （2）消毒手和原种瓶外壁。 （3）点燃酒精灯。 （4）拔掉原种棉塞，在酒精灯火焰上灼烧原种瓶口和接种匙，将原种瓶固 定。 （5）拔掉菌种瓶棉塞，将表面的老菌种块和菌皮挖掉，用接种匙捣碎菌种， 取满勺菌种至栽培袋内。 （6）塞上棉塞，贴好标签。 1 瓶原种→20 瓶栽培种 二、菌种的培养 1、母种培养 （1）适温培养 在恒温箱（室）培养 种块有萌发，并向培养基上蔓延后，将培养温度降低 2～3℃，促使菌丝健 壮生长。 （2）注意通风 通风不足，菌丝生长缓慢，棉塞上易滋生霉菌。 （3）定期检查 前几天，要逐管检查，以防掩盖杂菌。发现污染，及时淘汰。 （4）详实记录 记录菌株来源、转接时间、培养基种类、发菌的温湿度、菌丝生长情况，以 及污染现象、数目
2、原种和栽培种的发菌培养 （1）适温培养 在菌种培养室培养：在培养过程中，菌丝生长代谢释放出呼吸热，料温上升， 较室温高 2～5℃，温差视菌种量多少和通风保温情况而定，及时调整室温。 在冬季，可利用此热量增加培养温度，但在夏季或气温较高时，则要防止烧菌。 （2）注意通风、避光培养 （3）定期检查 萌发是否正常、有无污染、生活力和生长势。 （4）及时使用 原种满瓶 7～8d，栽培种满袋 10～15d，菌丝处于最佳生长期。 暂时不用，应低温、干燥、避光保存。 三、菌种培养中常见的异常情况及原因 1、母种常见的异常情况及原因 （1）培养基凝固不良 （2）接种物不萌发 （3）菌种生长过慢或长势不旺 （4）菌种生长不整齐 （5）细菌污染 （6）真菌污染 2、原种和栽培种常见异常情况及原因 （1）接种物不萌发，菌种被烫死或接种时培养料的温度太高。 〈1〉瓶壁出现不规则的杂菌群落，主要是灭菌不彻底所制。 〈2〉在培养料面出现杂菌，是由于接种过程中未达到无菌操作要求而造成污染。 〈3〉接种块上发生杂菌，是由于菌种不纯带入杂菌而引起的。 〈4〉瓶内菌丝长到半瓶而不再向下延伸，由于培养基料中水量过高或装瓶时培 养料压得太坚实而致。 5 ※ 第六节 菌种质量鉴定 菌种鉴定（6 方面）：纯度、长势、菌龄、均匀度、出菇快慢。 出菇试验是最可靠、最实际的方法。 产量高、品质好→优良菌种 一、母种质量鉴定 控制转管次数，转管 2～3 次为宜，最多不超过 4 次。（菌种培养的时间越 长，菌龄越大，生活力下降，菌种易老化） 1、出菇试验 菌丝生长健壮，出菇快、朵形好、产量高，为优良菌种。 2、外观肉眼鉴定 外表菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强；
2、原种和栽培种的发菌培养 （1）适温培养 在菌种培养室培养：在培养过程中，菌丝生长代谢释放出呼吸热，料温上升， 较室温高 2～5℃，温差视菌种量多少和通风保温情况而定，及时调整室温。 在冬季，可利用此热量增加培养温度，但在夏季或气温较高时，则要防止烧菌。 （2）注意通风、避光培养 （3）定期检查 萌发是否正常、有无污染、生活力和生长势。 （4）及时使用 原种满瓶 7～8d，栽培种满袋 10～15d，菌丝处于最佳生长期。 暂时不用，应低温、干燥、避光保存。 三、菌种培养中常见的异常情况及原因 1、母种常见的异常情况及原因 （1）培养基凝固不良 （2）接种物不萌发 （3）菌种生长过慢或长势不旺 （4）菌种生长不整齐 （5）细菌污染 （6）真菌污染 2、原种和栽培种常见异常情况及原因 （1）接种物不萌发，菌种被烫死或接种时培养料的温度太高。 〈1〉瓶壁出现不规则的杂菌群落，主要是灭菌不彻底所制。 〈2〉在培养料面出现杂菌，是由于接种过程中未达到无菌操作要求而造成污染。 〈3〉接种块上发生杂菌，是由于菌种不纯带入杂菌而引起的。 〈4〉瓶内菌丝长到半瓶而不再向下延伸，由于培养基料中水量过高或装瓶时培 养料压得太坚实而致。 5 ※ 第六节 菌种质量鉴定 菌种鉴定（6 方面）：纯度、长势、菌龄、均匀度、出菇快慢。 出菇试验是最可靠、最实际的方法。 产量高、品质好→优良菌种 一、母种质量鉴定 控制转管次数，转管 2～3 次为宜，最多不超过 4 次。（菌种培养的时间越 长，菌龄越大，生活力下降，菌种易老化） 1、出菇试验 菌丝生长健壮，出菇快、朵形好、产量高，为优良菌种。 2、外观肉眼鉴定 外表菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强；
菌丝已干燥、收缩或菌丝自溶产生大量红褐色液体，则生活力降低。 3、长势鉴定 菌丝生长快、整齐，浓而健壮，是优良品种。 4、温度适应性鉴定 一般菌类在 30℃，高温型菌在 35℃，培养 4h， 在高温下，仍能健壮生长，为优良菌种； 在高温下，菌丝萎缩，为不良菌种。 5、干湿度鉴定 能在偏干或偏湿培养基上生长良好的菌种，为优良菌种。 二、原种和栽培种的质量鉴定 1、菌种传代和菌龄应在规定范围内 （1）用转管在 4～5 次以内的母种生产的原种和栽培种。 （2）一般食用菌的原种和栽培种，在常温下可保存 3 个月内有效；草菇、灵芝、 凤尾菇等高温型菌则保存 1 个月内有效。超过上述期限的菌种，即使外观健壮， 生产上也不使用。 2、原种及栽培种外观要求 （1）菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。 （2）菌丝已长满培养基，银耳的菌种还要求在培养基上分化出子实体原基。 （3）菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特有的色泽。 （4）菌种瓶内无杂色出现和无杂菌污染，。 （5）菌种瓶内无黄色汁液渗出，反之，表明菌种老化。 （6）菌种培养基不能干缩与瓶壁分开。 还应区分开原种和栽培种。 3、常见优质原种和栽培种的性状 （1）平菇：菌丝粗壮，浓白，密集，爬壁力强，菌柱断面菌丝浓白，清香， 无异味，发菌快。 （2）金针菇：菌丝洁白，较粗壮，密集，长绒毛，外观似细粉状，培养后 期菌种表面易产生菇蕾。 （3）香菇：菌丝洁白，绵毛状，后期见光易分泌出酱油色液体，呈褐色， 有时表面产生小菇蕾。 （4）双孢蘑菇：菌丝灰白带微蓝，密集，细绒状，气生菌丝少，贴生菌丝在培 养基内呈细绒状分布，有特有的蘑菇香味。 5 ※ 第七节 菌种保藏和复壮 引言：菌种是重要的生物资源，也是教学、科研和生产的基本材料，因此菌 种研究和菌种保藏具有重要的意义。 一、菌种保藏的目的和原理 保藏目的：使菌种不死亡、不衰退、不被杂菌污染，能长期在生产上应用。 保藏原理：是使菌丝的生理代谢活动尽量降低
菌丝已干燥、收缩或菌丝自溶产生大量红褐色液体，则生活力降低。 3、长势鉴定 菌丝生长快、整齐，浓而健壮，是优良品种。 4、温度适应性鉴定 一般菌类在 30℃，高温型菌在 35℃，培养 4h， 在高温下，仍能健壮生长，为优良菌种； 在高温下，菌丝萎缩，为不良菌种。 5、干湿度鉴定 能在偏干或偏湿培养基上生长良好的菌种，为优良菌种。 二、原种和栽培种的质量鉴定 1、菌种传代和菌龄应在规定范围内 （1）用转管在 4～5 次以内的母种生产的原种和栽培种。 （2）一般食用菌的原种和栽培种，在常温下可保存 3 个月内有效；草菇、灵芝、 凤尾菇等高温型菌则保存 1 个月内有效。超过上述期限的菌种，即使外观健壮， 生产上也不使用。 2、原种及栽培种外观要求 （1）菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。 （2）菌丝已长满培养基，银耳的菌种还要求在培养基上分化出子实体原基。 （3）菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特有的色泽。 （4）菌种瓶内无杂色出现和无杂菌污染，。 （5）菌种瓶内无黄色汁液渗出，反之，表明菌种老化。 （6）菌种培养基不能干缩与瓶壁分开。 还应区分开原种和栽培种。 3、常见优质原种和栽培种的性状 （1）平菇：菌丝粗壮，浓白，密集，爬壁力强，菌柱断面菌丝浓白，清香， 无异味，发菌快。 （2）金针菇：菌丝洁白，较粗壮，密集，长绒毛，外观似细粉状，培养后 期菌种表面易产生菇蕾。 （3）香菇：菌丝洁白，绵毛状，后期见光易分泌出酱油色液体，呈褐色， 有时表面产生小菇蕾。 （4）双孢蘑菇：菌丝灰白带微蓝，密集，细绒状，气生菌丝少，贴生菌丝在培 养基内呈细绒状分布，有特有的蘑菇香味。 5 ※ 第七节 菌种保藏和复壮 引言：菌种是重要的生物资源，也是教学、科研和生产的基本材料，因此菌 种研究和菌种保藏具有重要的意义。 一、菌种保藏的目的和原理 保藏目的：使菌种不死亡、不衰退、不被杂菌污染，能长期在生产上应用。 保藏原理：是使菌丝的生理代谢活动尽量降低