Sg57.04o 中华人民共和国国家标准 9059093062098 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与 2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)的测定 Determination of butylated hydroxyanisole and butylated hydroxytoluene in foods 2003-08-11发布 2004-01-01实施 串暴恭秘责要发布
GB/T5009.30-2003 前言 本标准代替CB/T5009.30-1996《食品中叔丁基羟基茴香(BHA)与2,6-二叔丁基对甲酚 (BHT)的测定方法》. 本标准与GB/T5009.30-1996相比主要修改如下： 修改了标准的中文名称，标推中文名称改为《食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2,6二叔丁 基对甲酚(BHT)的测定》 按照GB/T20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法)对原标准的结构进行了 修改。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准第一法由江苏省卫生防疫站负责起草。 本标准第二法由卫生部食品卫生监督检验所，武汉市卫生防疫站、邯郸市卫生防疫站负责起草。 本标准第三法由上海市卫生防狡站负责起草。 本标准于1985年首次发布，1996年第一次修订，本次为第二次修订。 242
GB/T5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与 2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)的测定 1范围 本标准规定了糕点和植物油等食品中BHA,BHT的测定方法。 本标准适用于糕点和植物油等食品中BHA,BHT的测定， 一本方抗枕出限：气相色诺法检出盘为208，淌肤取棉量为060时检出洗度法推线性比一 色法检出量为10.0g,油脂取样盘为0.25g时检出 浓度为4.0mg/kg。 0.0g100.04g 第一法气相色谱法 2原理 试祥中的叔丁基羟基茴香醚(BHA)和2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)用石油醚提取，通过层析柱使 BHA与BHT净化，浓缩后，经气相色谱分离后用氢火焰离子化检测器检测，根据试样峰高与标准蜂高 比较定量 3试剂 3.1石油醚：沸程30℃一60℃。 3.2二氮甲烷，分析纯。 3,3一直化碳，分析纯 3.4无水硫酸钠，分析纯 3.5陆胶G.60目80目于120℃活化4h放于燥器各用 36罗用动+(F1。isi1).60目80月干120℃活化4h放干器中各用 37 T混合标准储 液：准确称取BHA,BHT( 施度为99.0%)各0.1g混合后用二硫化碳 溶解，定容至100mL容量瓶中 此溶液分别为每毫升含1.0 mgBHA,BHT,置冰箱保存 3.8BHA,BHT混合标准使用液：吸取标准储备液4,0mL于100mL容量瓶中，用二硫化碳定容至 100mL容量瓶中，此溶液分别为每意升含0.040 mgBHA,BHT,爱冰箱中保存。 4位器 4.1气相色谱仪：附FD检测器 4.2蒸发器，容积200mL 43落 4.4层析柱1 cm×30cm玻璃柱，带活寨 气相色谱柱：柱长1.5m,内径3mm的玻璃柱内装涂质分数为10%的QF-1 Gas Chrom Q (80目~100目). 5试样处理 5.1试样的制备 称取500g含油脂较多的试样，含油脂少的试样取1000g,然后用对角线取四分之二或六分之二， 或根据试样情况取有代表性试样，在玻璃乳体中研碎，混合均匀后放置广口瓶内保存于冰箱中， 243
GB/T5009.30-2003 5.2脂肪的提取 5.2.1含油脂高的试样（如桃酥等）：称取50g,混合均匀，置于250mL具鉴锥形瓶中，加50mL石油 醚（沸程为30℃~60℃），放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用， 5.2.2含油脂中等的试样（如蛋糕、江米条等）：称取100g左右，混合均匀，置于500mL具塞维形瓶 中，加100mL一200mL石油醚（沸程为30℃~60℃），放置过夜，用快速滤纸过速后，诚压回收溶剂，残 留脂肪备用。 5.2.3含油脂少的试样（如面包、饼干等）：称取250g一300g,混合均匀后，于500mL具塞锥形瓶中， 加人适量石油醚浸泡试样，放置过夜，用快速滤纸过滤后，诚压回收溶剂残留脂肪备用。 6分析步婴 6.1试样的制备 6.1.1层析柱的制备：于层析柱底部加入少量玻璃棉，少量无水硫酸钠，将胶弗罗里的土(6十4)共 10g,用石油醚湿法混合装柱，柱预部再知人少登无水硫酸钠 6.1.2试样制备：称取5.2制备的脂肪0.50g1.00g,用25mL石油醚溶解移人6.1.1的层析柱上 再以100mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干时，用二硫化碳定容至2.0mL,该溶液 为待测溶液 6.13 植物油试样的制备：称取混合均匀试样2.00g,放入50mL烧杯中，加30mL石袖酰溶解，转移 到6.1.1层折柱上，再用10mL石袖醚分数次洗涤烧杯中，并转移到层析柱，用100mL二氯甲烷分五 次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干，用二硫化碳定容至2.0mL,该溶液为待测溶液。 6.2测定 注人气相色谱3.0L标准使用液，绘制色谱图，分别量取各组分高或面积，进3.0L试样待测 溶液（应视试样含量而定），绘制色谱图，分别量取峰高或面积，与标准蜂高或面积比较计算含量 6.3结果计算 待测溶液BHA(或BHT)的质量按式(I)进行计算。 m=2×光x×G ,0n444(1 式中： m 一待测溶液BHA(或BHT)的质量，单位为老克(mg): h,一-注入色谱试样中BHA(或BHT)的峰高或面积： 标准使用液中BHA(或BHT)的峰高或面积 V,- -注人色谱试样溶液的体积；单位为毫升(mL) 待利试样定容的体积，单位为毫升(mL): V.- 一注人色谱中标准使用液的体积，单位为毫升(mL) G,一标准使用液的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL) 食品中以脂肪计BHA(或BHT)的含量按式(2)进行计算 X=m1000 .(2) 式中： X,一食品中以脂防计BHA(或BHT)的含量，单位为克每千克(g/kg)； m!一待测溶液中BHA(或BHT)的质量，单位为毫克(mg), 一油脂（或食品中脂肪）的质盘，单位为克(g) 计算结果保留三位有效数字， 244
GB/T5009.30-2003 7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15% 8其他 8.1BHA、BHT气相色谱图见图1. 图1 8.2气相色谐参考条件： 色谱柱：长1.5m,内径3mm玻璃柱，质量分数为10%QF-1的Gas Chrom Q(80目~100日)， 检测器，FID。 温度：检测室200℃，进样口200℃，柱温140℃. 我气流：氮气70mL/min氢气50mL/min空气500mL/min 第二法薄层色谱法 9原理 用甲醇提取油脂或食品中的抗氧化剂，用薄层色谱定性，根据其在薄层板上是色后的最低检出量与 标准品最低检出量比较而概略定量，对高脂肪食品中的BHT、BHA,PG能定性检出。 10试剂 10.1甲醉。 10.2石油壁(30℃~60℃)， 245
GB/T5009.30-2003 10.3异辛烷。 10.4丙酶。 10.5冰乙酸。 10.6正己烷。 二氧六环 10.8硅胶G:薄层用 10.9聚酰胺粉200目。 10.10可溶性淀粉。 1O.11BHT,BHA.PG混合标准溶液的配制：分别准确称取BHT、BHA、PG(纯度为99.9%以上)各 10mg,分别用丙酮溶解，转人三个10mL容：瓶中，用丙丽稀释至刻度。每毫升含1.0 mgBHT、. BHA.PG,吸取BHT(1,0mg/mL)1.0mL,BHA(1.0mg/mL)、PG(1.0mg/mL)各0.3mL置同 5mL容量瓶中，用丙酯稀释至刻度。此溶液每毫升含0.20 mgBHT,0.060 mgBHA,0.060mgPG. 10.12显色剂：2,6-二氯很氯亚胺的乙醇谘液(2g/L). 11仪器 11.1减压蒸馏装置。 11.2具刻度尾管的浓缩瓶。 11.3层析楷： )24 cmX6 emX 20cm×13cmX8cm 11.4玻璃板：5cm×20cm、10cm×20cm。 11.5微量注射器：10.0L。 12分析步骤 12.1提取 12.1.1植物油（花生油、豆油、菜籽油、芝麻油）：称取5.00g油置10mL具塞离心管中，加人5.0ml 甲，密塞振摇5min,放铿2min,离心(3000r/min~3500r/min)5min,吸取上层清液置25mL容盘 瓶中，如此重复提取共五次，合并每次甲醇提取液，用甲醇稀释至刻度。吸取5.0L甲醉提取液 被输中，续药登0L县日的维形中，人50L甲，装冷传子 自至0.5mL,留作薄层色谱用 水浴上放受5mi,待猪油完金溶化后将锥形瓶连同冷凝管一起自水裕中取出，振据308，再放入水浴 30s:如此振摇三次后放入75℃水浴，使甲醇层与油层分清后，将维形瓶连同冷凝管一起置冰水浴中冷 却，猪油凝团，甲醇提取液通过滤纸滤人50mL容量瓶中，再自冷凝管顶端加入25mL甲醇，重复振指 一次，合并二次甲醇提取液，将该容量瓶登暗处放登，待升至室温后，用甲醇稀释至刻废。吸取 10mL甲醇提取液登一浓缩瓶中，于40℃水浴上减压浓缩至0.5mL,留作薄层色谱用。 121.3食品（油炸花生米、酥糖、巧克力、饼干）：按5.2测定脂肪的含量，并称取约2.00g的脂肪，视 提取出的油脂是植物油还是动物性脂肪而决定提取方法。可按2.1.1或12.1,2操作。 12.2测定 12,2.1薄层板的制备 12.2.1.1硅胶G薄层板：称取4g硅胶G置玻璃乳钵中，加10mL水。研磨至粘稠状，铺成5cm× 20cm的游层板三块，置空气中千燥后于80℃烘1h,存放于干燥器中。 12,2.1,2聚酰胺板：称取2.40g聚酰胺粉，0.60g可溶性淀粉置于玻璃乳体巾，加约15mL水，研路 至浆状，铺成10cm×20cm的薄层板 三块，竖空气中干燥后于80℃烘1h,置干燥器中保存
GB/T5009.30-2003 12.2.2点样 12.2.2.1用10L微量注射器在5cmX20cm的硅胶G薄层板上距下端2.5cm处点三点：标准溶液 5.0L、试样提取液6.0L~30.0L、加标准溶液5.0rL。 12.2.2.2另取一块硅胶G薄层板点三点：标准溶液5.0L、试样提取液1.5L~3.6L、试样提取液 15L-3. L加标准溶液5.0L 12.2.2.3用10L微昼注射器在10cm×20cm的聚酰胺薄层板上距下增2.5cm处点：标准溶液 5.0以L,试样提取液10.0L,试样提取液10.0L加标准溶液5.0L,边点样边用吹风机吹干，点上 滴欧干后再猴续滴如， 12.2.3显色 12.2.3.1溶剂系统 硅胶G薄层板：正己烷-二氧六环-乙酸(42+6+3)，异辛烷-丙酮-乙酸(70+5十12) 聚酰胺板： )甲醇-丙程-水(30+10+10)； b)甲醇丙酮水(30+10十12.5) c)甲醇-丙醒水(30+10+15) 对甲醇-丙酮-水系统，芝麻油只能用a>菜籽油用b),食品用c). 展开系统中水的比例对花生油、豆油、猪油中PG的分离无影响。 将点好样的薄层板置预先经溶剂饱和的展开楷内展开16cm。 12.2.3.2展开 12.2.3.2.1硅胶G板自层析中取出，樽层板置通风中挥干至G标准点显示灰器色斑点，即可认 为溶剂已基本挥干，喷显色剂，置110℃烘箱中加热10mi,比较色斑颜色及深浅，趁热将板置氨蒸气神 中放置308，观察各色斑额色变化。 12.2.3.2.2聚酰胺板自层析档中取出，薄层板置通风橱中吹干，喷显色剂，再通风挥干，直至PG在点 清跻。 12.2.4评定 12.2.4.1定性 根据试样中显示出的BHT,BHA.PG点与标准BHT,BHA,PG点比较R,值和显色后班点的颜色 反应定性。如果样液点显示检出某种抗氧化剂，则试样中抗氧化剂的班点应与加人内标的抗氧化剂斑 点重叠。 当点大量样液时由于杂质多，使试样中抗氧化剂点的R,值略低于标准点。这时应在试样点上滴加 标准溶液作内标，比较R,值，见表1。 表1BT,BHA、PG在薄层板上的最低检出盘R值及斑点颜色 硅胶G板结果 聚酰胺板结果 抗氧化剂 R,值 最低检出量/ 色斑顿色 值 最低检出量/ 色斑颜色 g BHT 0.73 1.00 桔红→紫红 BHA 0.37 0.30 紫红一蓝紫 0.52 0.31 灰棕 PG 0.04 0.30 +黄 0.56 0.30 注：PG在硅胶G板上定性及半定量不可靠，有于扰，且R值太小，应进一步用聚酰胺板限开： 12.2.4.2概略定贤及限度试验 根据薄层板上样液点抗氧化剂所显示的色斑深浅与标准抗氧化剂色斑比较而估计含量，如果有 12.2.2.1的硅胶G薄层板上，试样中各抗氧化剂所显色斑视于标准抗氧化剂色斑，则试样中各抗氧化 247
GB/T5009.30-2003 剂含量在本方法的定性检出限量以下(BHA、PG点样量为6.0L,BHT点样景为30.0uL)。如果 12.2.2,2的硅胶G薄层板上，试样中各抗氧化剂所显色斑的颜色浅于标准抗氧化剂色斑，则试样中名 抗氧化剂的含量没有超过使用卫生标准(BHA,PG点样量为1.5L,BHT点样量为3,6L)。如果试 样点色斑颜色较标准点深，可稀释后重新点样，估计含量。 12.3结果计算 12.3.1试样中抗氧化剂（以脂肪计）的含量按式(3)进行计算 X =mX DX 1 000 .(3 m:×号×1000×1000 式中： -试样中抗氧化剂BHA,BHT,PG(以脂肪计)的含量，单位为克每千克(g/kg): 薄层板上测得试样点抗氧化剂的质量，单位为微克(g): 供薄层层折用点样液定容后的体积，单位为毫升(m): V:- -滴加样液的体积，单位为衰升(mL): D 一一样液的稀释倍数： 一定容后的薄层层析用样液相当于试样的脂肪质昼，单位为克(g) 12.3.2 所示试样中各抗氧化剂定性检出限皮，见表2。 表2所示试样中各抗氧化剂定性检出限度 BHT BHA 检出浓度/(mg/kg) 袖炸花生米 25 a 10 酥特 10 10 10 10 10 巧克力 25 25 油脂 25 25 25 第三法比色法 。13原理 试样通过水蒸气蒸馏，使HT分离，用甲醇吸收，邻联二齿香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色，用 三氯甲烷提取，与标准比较定量 14试剂 14.1无水氯化钙。 14.2甲. 14.3 三氯甲烷 14.4甲醇(50%) 14.5亚硝酸钠溶液(3g/L):避光保存. 14.6邻联二齿香胺溶液：称取125mg邻联二简香胺于50mL棕色容登瓶中，加25mL甲醇，振摇使 全部溶解，加50mg活性炭，振摇5min过滤，取20.0mL滤液，于另一50mL棕色容量瓶中，加盐酸 (1+11D至 临用时现配并港光保存 14.7BHT标准溶液：准确称取0.0500gBHT,用少量甲醇溶解，移人100mL棕色容盘瓶中，并稀释 248
GB/T5009.30-2003 至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于0.50 mg BHT。 14.8BHT标准使用液：临用时吸取1,0 mLBHT标准溶液，置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻 度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于100gHT。 15仪器 15.1水蒸气热馏装置。 15.2甘油浴。 15.3分光光度计。 16分析步骤 16.1试样处理 称取2g一5g试样（约含0.40 mg BHT)于100mL蒸馏瓶中，加16.0g无水氟化钙粉末及 10,0mL水，当甘油浴温度达到165℃恒温时，将蒸馏瓶浸人甘油浴中.连接好水羞气发生装置及冷凝 管，冷凝管下端浸人盛有50ml.甲醇的200mL容量瓶中，进行森馏，蒸榴速度每分钟1.5mL一2mL, 在50min~60min内收集约100mL馏出液（连同原盛有的甲醇共约150mL,蒸气压不可太高，以免油 滴带出)，以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗波并人容量瓶中并稀释至刻度。 16.2测定 准确吸取25.0mL上述处理后的试样溶液，移入用黑纸（布）包扎的100mL分液漏斗中，另准确吸 取0、1.0、2.0、3.0,4.0,5.0mL.BHT标准使用液（相当于0.0、10.0,20.0,30.0、40.0、50.0 "gBHT), 分别置于黑纸（布）包扎的c0ml分液漏斗，加人甲醇(50%)至25mL。分别加人5ml邻联 茴香胺 溶液，混匀，再各加2mL亚硝酸钠溶液(3g/L),振摇1min,放登10min,再各加10mL.三氯甲烷，剧烈 振摇1min,静置3min后，将三氧甲烷层分入黑纸（布）包扎的10mL比色管中，管中预先放入2mL甲 醇，混匀，用1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于被长520nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。 17结果计算 试样中BHT的含量按式(4)进行计算。 mX1000 .(4) m×号×100×10 试样中BHT的含量，单位为克每千克(g/kg): 测定用样液中BHT的质盘，单位为微克(g) m,—一试样质量，单位为克(g): V,一蒸馏后样液总体积，单位为毫升(mL)； y,一一测定用吸取样液的体积，单位为幸升(mL). 计算结果保留三位有效数字。 18精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 249