Cg5.040 中华人民共和国国家标准 Ge4T50329a2099 食品中山梨酸、苯甲酸的测定 Determination of sorbic acid and benzioc acid in foods 2003-08-11发布 2004-01-01实施 中华人民共和国品告资发布 中国国家标准化管理委员会 231
GB/T5009.29-2003 前言 本标准代替GB/T5009.29一1996《食品中山梨酸、苯甲酸的测定方祛》. 本标准与GB/T5009.29-1996相比主要修改如下： 一修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食品中山梨酸、苯甲酸的测定》 -按照GB/T20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了 修改。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准第一法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草 木标准第二法由天排食品卫生监督检验所，辽宁省食品卫生监督检验所，武汉市卫生防疫站断江 省卫生防疫站、四川省卫生防疫站负贵起草。 本标准第三法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草， 本标准于1985年首次发布，1996年第一次悠订，本次为第二次修订 232
GB/T5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的测定 1范固 本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定方法 本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定。 最低检出浓度：气相色谱法最低检出量为1g,用于色谱分析的试样为1g时，最低检出浓度 为1mg/kg. 第一法气相色谱法 2原理 试样酸化后，用乙醚提取山梨骸、苯甲骸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与 标准系列比较定量， 3试剂 3.1乙醚：不含过氧化物。 3.2石油醚：沸程30℃~60℃ 3.3盐酸. 3.4无水硫酸钠 3.5盐酸(1+1)：取100mL盐酸，加水稀释至200mL. 3.6氢化钠酸性溶液(40gL):于氢化钠溶液(40g/L)中加少量盐酸(1+1)酸化 3.7山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g,登于100mL容量瓶中，用石油 髓-乙醚(3十1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶腋每毫升相当于2.0mg山梨酸或萃甲酸。 3.8山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油酷-乙酰(3十1)混合溶剂 稀释至每意升相当于50,100,150,200、250*g山梨酸或苯甲酸。 4位器 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。 5分析步骤 5.1试样提取 称取2.50g事先泥合均匀的试样，登于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸(1+1)酸化，用15、 l0mL乙醚提取两次，每次振摇1mi,将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量简中，合并乙醚提 取液。用3mL氯化钠酸性溶液(40g/L)洗涤两次，静止15mi,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤人 25mL容量瓶中加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙酰提取液于5mL带塞刻度试管中，置40℃ 水浴上挥干，加人2mL石油酵-乙醚(3+1)混合溶剂溶解残渣，备用。 233
GB/T5009.29-2003 5.2色谱参考条件 5.2.1色谱柱：玻璃柱，内径3mm,长2m,内装涂以5%DEGS+1%裤酸固定液的60目~80目 Chromosorb W AW. 5.2.2气流速度：载气为氨气，50mL/min(氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳 比例条件)。 5.2.3温度：进样口230℃；检测器230℃：柱逛170℃。 5.3测定 进样2：L标准系列中各浓度标准使用被于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的蜂商， 以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线 同时进样2L试样溶液，测得峰高与标准曲线比较定量 5.4结果计算 试样中山梨酸或苯甲酸的含量按式(1)进行计算。 X=- .(1) X一试样中山梨酸或苯甲酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) A—一测定用试样液中山梨酸或苯甲酸的质量，单位为微克(g): 加人石油酵-乙醚(3+1)混合溶剂的体积，单位为毫升(mL) 测定时进样的体积，单位为微升(L): 试样的质量，单位为克(g): 5 蔺定时吸取乙避提取液的体积，单位为毫升(mL) 25—试样乙酰提取液的总体积，单位为毫升(mL)。 由测得苯甲酸的量桑以1.18，即为试样中苯甲酸钠的含量。 计算结果保阳两位有效数字】 5.5精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%. 5.6其他 山梨酸和苯甲酸的气相色谱图见图1。 山梨酸保留时间2min53s苯甲酸保留时间6min8s. 234
GB/T5009.29-2003 图1 第二法高效液相色谱法 6原理 试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根 据保留时间和峰面积进行定性和定量。 7试剂 方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。 7.1甲醇：经滤膜(0.5m)过滤. 7.2稀氨水(1+1)，氨水加水等体积混合 7.3乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL,溶解，经0.45m滤膜过， 7.4费酸氢钠溶液(20g/L):称取2g碳酸氢钠（优级纯），如水至100mL,振摇溶解， 7.5孝甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL,加热溶解，移 入100mL容量瓶中，加水定容至100mL,苯甲酸含量为1mg/ml,作为储备溶液。 7.6山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山樂酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL,如热溶解，移 人100mL容量瓶中，加水定容至100mL,山梨酸含量为1mg/mL,作为储备溶液 乙7苯甲酸，山梨酸标准混合使用溶液：苯甲破、山梨酸标准储备溶液各10.0mL,放人100mL容 量瓶中，加水至刻度。此溶液合苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL,经0.45μm滤映过滤（同时测定糖精钠 时可加GB/T5009.28-2003中3.4糖精钠标准储备溶液)
GB/T5009.29-2003 8位器 高效液相色谱仪（带紫外检测器）。 9分析步骤 9.1试样处理 9.1.1汽水：称取5.00g~10.0g试样，放人小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH 约7.加水定容至10mL~20mL,经滤膜(HA0.45um)过滤。 9.1.2果计类：称取5.00g一10.0g试样，用氨水(1+1)调pH约7，如水定容至适当体积，离心沉淀. 上清液经0.45m滤膜过滤 9.1,3配制丽类：称取10.0g试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调H约7，加水 定容至适当体积，经0.45μm滤膜过滤。 9.2高效液相色谱参考条件 9.2.1柱：YWG-C,4.6mm×250mm,10μm不锈钢柱. 9.2.2流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5：95). 9.2.3 流速1 mL/min. 9.2.4进样量：10L 9.2.5检测器：紫外检测器，230nm波长，0.2AUFS, 根据保留时间定性，外标蜂面积法定量。 9.3结果计算 试样中苯甲酸或山梨酸的含量按式(2)进行计算 X=A×1000 .(2) m×花×1000 式中 -试中装甲酸或山型酸的含量，单位为克每千克《g/k》 进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，单位为毫克(mg): V:- 进样体积，单位为毫升(m) V,- 试样稀释液总体积，单位为毫升(mL): 试样质量，单位为克(g)。 计算结果保留两位有效数字】 9.4精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 9.5其他 同GB/T5009.28-2003的5.6. 注：本方法可同时测定籍精钠。 第三法薄层色谱法 10原理 试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色 后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值。与标准比较定性，并可进行概略定盘。 236
GB/T5009.29-2003 11试剂 11.1异丙醇 112正丁醇 1.3 石油 ,沸程30℃一60℃ 11.4 乙醚：不含过氧化物 11.5氨水 11.6无水乙醇 1.7聚酰胺粉：20目 11.8 盐酸(1+1)：取100mL盐酸，加水稀释至200mL 11.9氧化钠酸性溶液(40g/1):于氯化钠溶液(40g/1)中加少量盐酸(1+1)酸化. 11.10展开剂如下： 11.10.1正丁醇+氢水+无水乙醇(7+1+2) 11.10.2异丙醇+氨水十无水乙醇(7+1+2) 11.11山梨酸标准溶液：准确称取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移人100mL容量瓶中，并稀 释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸。 11.12苯甲酸标准溶液：准确称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀 强至刻度，此溶液每卒升相当于2.0mg差甲酸。 11.13显色剂 澳甲酚-乙醇(50%)溶液(0.4g/L),用氢氧化钠溶液(4g/L)调至pH=8 12仪器 12.1吹风机。 12.2层析 12.3玻璃板：10cmX18cm 12.4微量注射器：10L,100L 12.5喷等器. 13分桥步骤 13.1试样提取 称取2.50g事先混合均匀的试样，置于25mL带塞筒中，如0.5mL盐酸(1+1)酸化，用15 10mL乙醚提取两次，每次振摇1in,将上层鞋提取液吸入另一个25mL带塞鼠筒中，合并乙醚提取 液。用3mL氯化钠酸性溶液(40g/L)洗涤两次，静止15mi,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入 25mL容盘瓶中。加乙醚至刻度，混匀。吸取10.0mL乙醚提取液分两次置于10mL带塞离心管中， 在约40℃的水浴上挥干，加人0.10mL乙醇溶解残渣，备用 13.2测定 13.2.1聚酰胺粉板的制备：称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3min~ 5min,立即倒入涂布器内制成10cm×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块，室温干燥后，于80℃干燥 1h,取出，置于干燥器中保存 13.2.2点样：在薄层板下端2em的基线上，用微量注射器点1L2L试样液，同时各点1L、2l 山梨酸、苯甲酸标准溶液。 13.2.3展开与显色：将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂(11,10.1或11,10.2)的展开槽内，展开 楷周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。试样中所 含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量（山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82、0.73）。 237
GBN5009.29-2003 13.3结果计算 试样中苯甲酸或山梨酸的含量按式(3)进行计算 AX1000 .(3) m××号×1000 式中 X 一试样中苯甲酸或山梨酸的含量，单位为克每千克(g/kg): A一测定用试样液中苯甲酸或山梨酸的质量，单位为毫克(mg): v. 加入乙醇的体积，单位为蒸升(mL): 测定时点样的体积，单位为毫升(mL): 一试样质盘，单位为克(g): 10一测定时吸取乙醚提取液的体积，单位为意升(mL), 25—试样乙醚提取液总体积，单位为毫升(mL). 注，本方法还可以同时测定果酱、果汁中的籍精。 禁用防腐剂定性试验 14疆酸、翅砂 14.1试剂 14.1.1盐酸(1+1)，量取盐酸100mL,加水稀释至200mL 14.1.2碳酸钠溶液(40g/L). 14.1.3氢氧化钠溶被(4g/L》:称取2度氢氧化钠，溶于水并稀释至500mL 14.1.4 黄试纸：称取20g姜黄粉末，用冷水浸渍4次，每次各100mL,除去水溶性物质后，残流在 100℃干燥，加100mL乙醇，浸遗数日，过滤。取1cm×8cm滤纸条，浸人溶液中，收出，于空气中干 燥，贮于玻璃瓶中。 14.2分析步骤 14.2.1试样处理 称取3 g一5g固体试样，加碳酸钠溶液(40g/L)充分湿润后，于小火上烘干、炭化后再置高温炉中 灰化。量取10mL一20mL液体试样，如碳酸钠溶液(40g/L)至呈减性后，置水浴上蒸干，炭化后再登 高温炉中灰化。 14.2.2定性试验 14.2.2.1姜黄试纸法：取一部分灰分，滴加少盘水与盐酸(1十1)至微酸性，边滴边搅拌，使残渣溶解 微温后过滤，将姜黄试纸浸人滤液中，取出试纸表面血上，于60℃~70℃干燥，如有翻酸、硼砂存在 时，试纸显红色或橙红色，在其变色部分照以氨即转为绿黑色。 14.2.2.2焰色反应：取灰分置于坩蜗中，加硫酸数滴及乙醇数滴，直接点火，硼酸或硼砂存在时，火焰 呈绿色。 15水杨酸 15.1试剂 15.1.1三氯化铁溶液(10g/1)】 15.12亚硝酸钾 溶液(100g/L) 15.1.3乙酸(50%)。 15.1.4硫酸铜溶液(100g/L):称取10g硫酸铜(CuS0.·5H,0),加水溶解至100mL。 238
GB/T5009.29-2003 15.2分析步隳 15.2.1试样提取 按GB/T5009.28一2003中9.1操作，将乙提取液蒸干后，残渣备用。 15.2.2定性试验 15.2.2.1三氯化铁法：残渣加1滴~2滴三氯化铁溶液(10g/L),水杨酸存在时昴紫蓝色 15,2.2.2确证试验：溶解残渣于少量热水中，冷后加4滴~5滴亚硝酸钾溶液(100g/L),4滴~5滴 乙酸(50%)及1滴硫酸铜溶液(100g/L),混匀，煮沸0.5h,放量片刻，水杨酸存在时呈血红色（苯甲酸 不显色)， 239