实验七 维生素 B1、B 2 的定性实验 一、目的要求 进一步了解维生素 B1、B2的性质，掌握其定性检验方法。 二、实验原理 1．维生素 B1 属水溶性维生素，因含有硫及氨基，又名硫胺素，在植物性食 物中分布极广，谷类种子表皮中含量更为丰富，麦麸、米糠和酵母均是维生素 B1的良好来源。维生素 B1的定性鉴定反应主要有 2 个： 重氮苯磺酸反应 在碳酸氢钠存在的碱性条件下，硫胺素可与重氮苯磺酸作 用产生红色，加入少量的甲醛，可使红色稳定。本反应不灵敏，特异性低，但操 作简单迅速。反应可表示如下： 荧光反应 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化生成有蓝色荧光的物质— 硫色素，溶于异丁醇中的硫色素显示深蓝色的荧光，在紫外光下更为显著。此反 应灵敏，特异性高，也可用于定量测定。反应如下： 2．维生素 B2也属水溶性维生素，又名核黄素，其乙醇中性溶液和水溶液呈 黄色，在中性或酸性溶液中经光照射自身可产生黄绿色荧光，在稀溶液中荧光的 强度与核黄素的浓度成正比。核黄素能被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，失去 荧光。但此氢化物在空气中易被重新氧化，恢复荧光。反应如下： 三、实验器材 试管和试管架、吸量管（1mL、2 mL）、漏斗、滤纸。 米糠 四、实验试剂 1．0.2%硫胺素溶液 2．30 μg / mL 核黄素溶液 3．1% 铁氰化钾溶液 4．30%氢氧化钠溶液 5．2.5%亚硫酸氢钠溶液（用 2%碳酸钠作溶剂） 6．异丁醇 7．0.2 mol/L 硫酸溶液 8．碳酸氢钠碱性溶液：取氢氧化钠 20 g 溶于 600 mL 蒸馏水中，加碳酸氢 钠 28.8 g，混匀后，用水稀释至 1 000 mL。 9．重氮试剂： 溶液 A：将对－氨基苯磺酸 1 g 溶解于 15 mL 浓盐酸中，然后加水稀释至 100 mL。 溶液 B：将亚硝酸钠 0.5 g 溶解于水中，稀释到 100 mL。现用现配。 需用时，将 3 mL 溶液 B 加到 100 mL 溶液 A 中，混匀即得重氮试剂，在冰浴 中保存，至少 15 min 后方可使用。此溶液配好后，存放时间不能超过 24 h
实验七 维生素 B1、B 2 的定性实验 一、目的要求 进一步了解维生素 B1、B2的性质，掌握其定性检验方法。 二、实验原理 1．维生素 B1 属水溶性维生素，因含有硫及氨基，又名硫胺素，在植物性食 物中分布极广，谷类种子表皮中含量更为丰富，麦麸、米糠和酵母均是维生素 B1的良好来源。维生素 B1的定性鉴定反应主要有 2 个： 重氮苯磺酸反应 在碳酸氢钠存在的碱性条件下，硫胺素可与重氮苯磺酸作 用产生红色，加入少量的甲醛，可使红色稳定。本反应不灵敏，特异性低，但操 作简单迅速。反应可表示如下： 荧光反应 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化生成有蓝色荧光的物质— 硫色素，溶于异丁醇中的硫色素显示深蓝色的荧光，在紫外光下更为显著。此反 应灵敏，特异性高，也可用于定量测定。反应如下： 2．维生素 B2也属水溶性维生素，又名核黄素，其乙醇中性溶液和水溶液呈 黄色，在中性或酸性溶液中经光照射自身可产生黄绿色荧光，在稀溶液中荧光的 强度与核黄素的浓度成正比。核黄素能被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，失去 荧光。但此氢化物在空气中易被重新氧化，恢复荧光。反应如下： 三、实验器材 试管和试管架、吸量管（1mL、2 mL）、漏斗、滤纸。 米糠 四、实验试剂 1．0.2%硫胺素溶液 2．30 μg / mL 核黄素溶液 3．1% 铁氰化钾溶液 4．30%氢氧化钠溶液 5．2.5%亚硫酸氢钠溶液（用 2%碳酸钠作溶剂） 6．异丁醇 7．0.2 mol/L 硫酸溶液 8．碳酸氢钠碱性溶液：取氢氧化钠 20 g 溶于 600 mL 蒸馏水中，加碳酸氢 钠 28.8 g，混匀后，用水稀释至 1 000 mL。 9．重氮试剂： 溶液 A：将对－氨基苯磺酸 1 g 溶解于 15 mL 浓盐酸中，然后加水稀释至 100 mL。 溶液 B：将亚硝酸钠 0.5 g 溶解于水中，稀释到 100 mL。现用现配。 需用时，将 3 mL 溶液 B 加到 100 mL 溶液 A 中，混匀即得重氮试剂，在冰浴 中保存，至少 15 min 后方可使用。此溶液配好后，存放时间不能超过 24 h
五、操作步骤 (一)维生素 B1的定性 1．重氮化反应 取米糠 1 g 置试管中，加 0.2 mol/L 硫酸溶液 5 mL，用力 振荡，提取硫胺素。放置 10 min 后，用滤纸过滤。取滤液 1 mL，加入碳酸氢钠 碱性溶液 1.5 mL，摇匀后，在 10 min 内观察深红色的出现。 2．荧光反应 取 1 支试管加入硫胺素溶液 2 mL、铁氰化钾溶液 2 mL、30% 氢氧化钠溶液 1 mL 充分混匀后，再加入 2 mL 异丁醇，充分振荡，待两相分开后， 仔细观察上层异丁醇溶液中的蓝色荧光。 (二)维生素 B2的定性 取 2 支试管，各加入核黄素溶液 1 mL，观察其黄绿色荧光。在一管中加入 5～ 10 滴亚硫酸氢钠溶液，比较两管的荧光。充分摇动后，再观察两管的荧光变化。 紫外灯下观察，现象更加明显。 六、问题与思考 1．硫胺素的荧光反应为什么要在碱性条件下进行？ 2．在实验中将核黄素还原成无色的二氢化物，还可以使用什么试剂？
五、操作步骤 (一)维生素 B1的定性 1．重氮化反应 取米糠 1 g 置试管中，加 0.2 mol/L 硫酸溶液 5 mL，用力 振荡，提取硫胺素。放置 10 min 后，用滤纸过滤。取滤液 1 mL，加入碳酸氢钠 碱性溶液 1.5 mL，摇匀后，在 10 min 内观察深红色的出现。 2．荧光反应 取 1 支试管加入硫胺素溶液 2 mL、铁氰化钾溶液 2 mL、30% 氢氧化钠溶液 1 mL 充分混匀后，再加入 2 mL 异丁醇，充分振荡，待两相分开后， 仔细观察上层异丁醇溶液中的蓝色荧光。 (二)维生素 B2的定性 取 2 支试管，各加入核黄素溶液 1 mL，观察其黄绿色荧光。在一管中加入 5～ 10 滴亚硫酸氢钠溶液，比较两管的荧光。充分摇动后，再观察两管的荧光变化。 紫外灯下观察，现象更加明显。 六、问题与思考 1．硫胺素的荧光反应为什么要在碱性条件下进行？ 2．在实验中将核黄素还原成无色的二氢化物，还可以使用什么试剂？