实验五 粗 脂肪的定量测定 第一法 抽 提法 一 、 目的与要求： 1、熟悉掌握粗脂肪的测定方法。 2、熟悉与掌握重量分析的基本操作，包括样品处理，烘干，恒重等。 二 、 原理： 本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量，该法适用于固体 和液体样品。通常将样品浸于脂肪溶剂，为乙醚或沸点 30℃至 60℃的石 油醚，借助于索氏提取器进行循环抽提。用本法提取的脂肪性物质为脂肪 类物质的混合物，其中含有脂肪游离脂肪酸、磷脂\酯、固醇、芳香油某 些色素及有机酸等。因此，称为粗脂肪。 三 、 试剂及仪器： (1)无水乙醚 (2)海砂 (3)索氏提取器 (4)恒温水浴锅 (5)烘箱 (6)脱脂棉花 (7)脱脂滤纸 四 、 操作步骤 (一)样品的准备 称取样品的重量根据材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在 10％以 下的，称取样品 10-12 克;脂肪含量为 50-60％的，则称取样品 2-4 克，(可 以用测定水分后的样品)。 将样品在 80-100℃烘箱去水分。一般烘 4 小时，烘干时要避免过热。 冷却后，准确地称取一定量样品，必要时，拌以精制海砂，无损地移入滤 纸筒内，用脱脂棉塞严，将滤纸筒放人索氏提取器的提取管内，注意勿使 滤纸筒高于提取管的虹吸部分
实验五 粗 脂肪的定量测定 第一法 抽 提法 一 、 目的与要求： 1、熟悉掌握粗脂肪的测定方法。 2、熟悉与掌握重量分析的基本操作，包括样品处理，烘干，恒重等。 二 、 原理： 本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量，该法适用于固体 和液体样品。通常将样品浸于脂肪溶剂，为乙醚或沸点 30℃至 60℃的石 油醚，借助于索氏提取器进行循环抽提。用本法提取的脂肪性物质为脂肪 类物质的混合物，其中含有脂肪游离脂肪酸、磷脂\酯、固醇、芳香油某 些色素及有机酸等。因此，称为粗脂肪。 三 、 试剂及仪器： (1)无水乙醚 (2)海砂 (3)索氏提取器 (4)恒温水浴锅 (5)烘箱 (6)脱脂棉花 (7)脱脂滤纸 四 、 操作步骤 (一)样品的准备 称取样品的重量根据材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在 10％以 下的，称取样品 10-12 克;脂肪含量为 50-60％的，则称取样品 2-4 克，(可 以用测定水分后的样品)。 将样品在 80-100℃烘箱去水分。一般烘 4 小时，烘干时要避免过热。 冷却后，准确地称取一定量样品，必要时，拌以精制海砂，无损地移入滤 纸筒内，用脱脂棉塞严，将滤纸筒放人索氏提取器的提取管内，注意勿使 滤纸筒高于提取管的虹吸部分
(二)抽取 将洗净的提取瓶在 1.5℃烘箱内烘干至恒重,加乙醚约达到提取瓶容积 的 1／2-2／3，然后将提取器各部分按图连接，注意不能漏气。 加热提取时，应在电热恒温水浴中进行(水浴温度约为 40-50℃)也可以 使用灯泡或电炉加热的水浴锅，严禁用火焰直接加热索氏提取器。 在加热时乙醚蒸发，乙醚 蒸汽由连接管上 升至冷凝器，凝结成 液体 滴入提取管中，此时样品内的 脂肪为乙醚液面 超过虹吸管高度 后溶有脂 肪的乙醚虹吸管流入提 取瓶，为此循 环抽提，调 解水域温度，使乙醚每 小时循环 3－5 次，提出时间视样 品的性质而定， 一般需 6－12 小时， 样品含有脂肪是否提取 完全，可以用滤纸来 粗略判断，从提取 管内吸取 少量的乙醚并滴在净的 滤纸上，待乙醚干后，滤纸上不留有油 脂的半点 则表示已经提取完全。 提取完全后，再将乙醚蒸 到提取管内，待乙醚 液面达到虹吸管 的最 高处以前，取下提取管。 五 、 称 重 和计算 将提取瓶中的乙醚全部蒸干，洗净外壁，置于 105℃烘箱干燥 至恒 重，按下式计算样品的促脂肪百分含量。 W1 -W0 脂肪（﹪）-×100 W W1：接受瓶和脂肪重量（克）。 W：样品重量（克）。 W0：接受瓶重量（克）。 六 、 注 意 事项 (1)样品应干 燥后研细，装样 品的滤纸筒一定 要紧密，不能往外 漏样 品，否则重做。 （2）放入 滤纸筒 的高度 不能超 过回流弯 管，否 则乙醚 不易穿 透样 品，脂肪不能全部提出，造成误差。 （3）碰到 含多量 糖及糊 精的样 品，要先 以冷水 处理， 等其干 燥后
(二)抽取 将洗净的提取瓶在 1.5℃烘箱内烘干至恒重,加乙醚约达到提取瓶容积 的 1／2-2／3，然后将提取器各部分按图连接，注意不能漏气。 加热提取时，应在电热恒温水浴中进行(水浴温度约为 40-50℃)也可以 使用灯泡或电炉加热的水浴锅，严禁用火焰直接加热索氏提取器。 在加热时乙醚蒸发，乙醚 蒸汽由连接管上 升至冷凝器，凝结成 液体 滴入提取管中，此时样品内的 脂肪为乙醚液面 超过虹吸管高度 后溶有脂 肪的乙醚虹吸管流入提 取瓶，为此循 环抽提，调 解水域温度，使乙醚每 小时循环 3－5 次，提出时间视样 品的性质而定， 一般需 6－12 小时， 样品含有脂肪是否提取 完全，可以用滤纸来 粗略判断，从提取 管内吸取 少量的乙醚并滴在净的 滤纸上，待乙醚干后，滤纸上不留有油 脂的半点 则表示已经提取完全。 提取完全后，再将乙醚蒸 到提取管内，待乙醚 液面达到虹吸管 的最 高处以前，取下提取管。 五 、 称 重 和计算 将提取瓶中的乙醚全部蒸干，洗净外壁，置于 105℃烘箱干燥 至恒 重，按下式计算样品的促脂肪百分含量。 W1 -W0 脂肪（﹪）-×100 W W1：接受瓶和脂肪重量（克）。 W：样品重量（克）。 W0：接受瓶重量（克）。 六 、 注 意 事项 (1)样品应干 燥后研细，装样 品的滤纸筒一定 要紧密，不能往外 漏样 品，否则重做。 （2）放入 滤纸筒 的高度 不能超 过回流弯 管，否 则乙醚 不易穿 透样 品，脂肪不能全部提出，造成误差。 （3）碰到 含多量 糖及糊 精的样 品，要先 以冷水 处理， 等其干 燥后
联通滤纸一起放入提取器内。 （4）提取 时水浴 温度不 能过高 ，一般使 乙醚刚 开始沸 腾即可 （约 45℃左右）。回流速度以每 8-12 次／时为宜。 (5)所用乙醚必须是无水乙醚，如含有水分则可能将样品中的糖以及无机物抽 出，造成误差。 (6)用于样品测定脂肪，可按下式计算原来样品脂肪的含量． W1-W0 脂肪（﹪）-(100-A) W 脂肪(％)= 物的耐盐性得到不同程度提高。其中Ｚｈａｎｇ和Ｂｌｕｍｗａｌｄ (2001)、Ｚｈａｎｇ等(2001)报告的转ＡｔＮＨＸ1 基因番茄可耐 200ｍｍｏｌ/ Ｌ的氯化钠,并把吸收的钠盐积累在叶片中,而果实的品质不受影响。这些研究预 示着在提高植物耐盐性方面,离子的选择吸收和跨膜运输的基因工程是植物耐盐 性种质改良的有效途径。 A-100 克样品水分的含量(克)． (7)冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管，这样不仅可以防止空气中水分进 入，而且还可以避免乙醚挥发在空气中，这样可防止实验室微小环境空气的污染。 如无此装置，塞一团干脱脂棉球亦可。 (8)如果没有无水乙醚可以自己制备，制备方法如下：在 1000 毫升乙醚中，加 入无水石膏 50 克，振摇数次，静置 1 0 小时以上蒸馏，收集 35℃以下的馏液， 即可应用。 (9)将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜 45℃放置使挥发物乙醚易与 空气形成对流，这样干燥迅速。 (10)样品及醚提出物在烘箱内烘干时间不要过长，因为一些很不饱和的脂肪 酸，容易在加热过程中被氧化成不溶于乙醚的物质；中等不饱和脂肪酸，受热容 易被氧化而增加重量．在没有真空干燥箱的条件下，可以在 100-105℃干燥 1.5-3 小时。 (u)如果没有乙醚或无水乙醚时，可以用石油醚提取，石油醚沸点 30-60℃为好。 (12)使用挥发乙醚或石油醚时，切忌用直接火加热。应用电热套电水浴，电灯 泡等．
联通滤纸一起放入提取器内。 （4）提取 时水浴 温度不 能过高 ，一般使 乙醚刚 开始沸 腾即可 （约 45℃左右）。回流速度以每 8-12 次／时为宜。 (5)所用乙醚必须是无水乙醚，如含有水分则可能将样品中的糖以及无机物抽 出，造成误差。 (6)用于样品测定脂肪，可按下式计算原来样品脂肪的含量． W1-W0 脂肪（﹪）-(100-A) W 脂肪(％)= 物的耐盐性得到不同程度提高。其中Ｚｈａｎｇ和Ｂｌｕｍｗａｌｄ (2001)、Ｚｈａｎｇ等(2001)报告的转ＡｔＮＨＸ1 基因番茄可耐 200ｍｍｏｌ/ Ｌ的氯化钠,并把吸收的钠盐积累在叶片中,而果实的品质不受影响。这些研究预 示着在提高植物耐盐性方面,离子的选择吸收和跨膜运输的基因工程是植物耐盐 性种质改良的有效途径。 A-100 克样品水分的含量(克)． (7)冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管，这样不仅可以防止空气中水分进 入，而且还可以避免乙醚挥发在空气中，这样可防止实验室微小环境空气的污染。 如无此装置，塞一团干脱脂棉球亦可。 (8)如果没有无水乙醚可以自己制备，制备方法如下：在 1000 毫升乙醚中，加 入无水石膏 50 克，振摇数次，静置 1 0 小时以上蒸馏，收集 35℃以下的馏液， 即可应用。 (9)将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜 45℃放置使挥发物乙醚易与 空气形成对流，这样干燥迅速。 (10)样品及醚提出物在烘箱内烘干时间不要过长，因为一些很不饱和的脂肪 酸，容易在加热过程中被氧化成不溶于乙醚的物质；中等不饱和脂肪酸，受热容 易被氧化而增加重量．在没有真空干燥箱的条件下，可以在 100-105℃干燥 1.5-3 小时。 (u)如果没有乙醚或无水乙醚时，可以用石油醚提取，石油醚沸点 30-60℃为好。 (12)使用挥发乙醚或石油醚时，切忌用直接火加热。应用电热套电水浴，电灯 泡等．
实验法(二) 酸水解法 一、原理： 样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。 二、试剂与仪器： 1、盐酸 2、95％乙醇 3、乙醚 4、石油醚 5、100 毫升具塞刻度量筒 三、操作方法： 1、样品处理 (1)固体样品：精密称取约 2 克水，混匀后再加重。毫升盐酸。置于 50 毫升大 试管内，加 8 毫升 (2)液体样品：称取 10.0 克，置于 50 毫升大试管内，加工 0 毫升盐酸， 2、将试管放 70-80℃水浴中，每隔 5-10 分钟以玻璃棒搅拌一次，至样品消化 完全为止，约 40-50 分钟。 3、取出试管，加人 10 毫升乙醇，混合。冷却后将混合物移于 100 毫升具塞 量筒中，以 25 毫升乙醚分次洗试管，一并倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒后， 加塞振摇 1 分钟，小心开塞，放出气体，再塞好。静置 12 分钟，小心开塞，并 用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置 10-20 分钟，待上部 液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥形瓶内，再加 5 毫升乙醚于具塞量筒内，振 摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置 95-105℃烘箱中干燥 2 小时，取出放入干燥器内冷却 0.5 小时后称重。 计算： m1-m0 X=- m2 X：样品中脂肪的含量％；
实验法(二) 酸水解法 一、原理： 样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。 二、试剂与仪器： 1、盐酸 2、95％乙醇 3、乙醚 4、石油醚 5、100 毫升具塞刻度量筒 三、操作方法： 1、样品处理 (1)固体样品：精密称取约 2 克水，混匀后再加重。毫升盐酸。置于 50 毫升大 试管内，加 8 毫升 (2)液体样品：称取 10.0 克，置于 50 毫升大试管内，加工 0 毫升盐酸， 2、将试管放 70-80℃水浴中，每隔 5-10 分钟以玻璃棒搅拌一次，至样品消化 完全为止，约 40-50 分钟。 3、取出试管，加人 10 毫升乙醇，混合。冷却后将混合物移于 100 毫升具塞 量筒中，以 25 毫升乙醚分次洗试管，一并倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒后， 加塞振摇 1 分钟，小心开塞，放出气体，再塞好。静置 12 分钟，小心开塞，并 用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置 10-20 分钟，待上部 液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥形瓶内，再加 5 毫升乙醚于具塞量筒内，振 摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置 95-105℃烘箱中干燥 2 小时，取出放入干燥器内冷却 0.5 小时后称重。 计算： m1-m0 X=- m2 X：样品中脂肪的含量％；
m1：接受瓶与脂肪的质量，g； m2：接受瓶的质量，g
m1：接受瓶与脂肪的质量，g； m2：接受瓶的质量，g