实验十三 食品中铅的测定 一、目的与要求： 1.掌握双硫腙比色法测定铅含量的原理与方法。 2.熟悉 72 工型分光光度计的工作原理和使用方法。 二、原理： 样品经消化后，在 PH8.5-9.0 时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯 甲烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标 准系列比较定量。 三、试剂： l、1：1 氨水； 、 2、6N 盐酸：量取 100 毫升盐酸，加水稀释至 200ml。 3、酚红指示液：0.1％乙醇溶液。 4、20％盐酸羟胺溶液：称取 20 克盐酸羟胺，加水溶解至约 50ml，加 2 滴酚 红指示液，加 1：1 氨水，调 PH 至 8.5-9.0(由黄变红，再多加 2 滴)用双硫腙-三 氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去再用三氯甲烷洗二次，弃去三 氯甲烷层，水层加 6N 盐酸呈酸隆，加水至 100 毫升。 5、20％柠檬酸铵溶液：称取 50 克柠檬酸铵，溶于 100 毫升水中，加 2 滴酚 红指示液，加 l：1 氨水，调 PH 至 8.5-9.0，用双硫腙-三氯甲烷溶液提取数次， 每次 10-20ml，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗 二次，每次 5ml，弃去三氯甲烷层，加水稀释至 250 毫升。 6、10％氰化钾溶液； 7、三氯甲烷；不应含氧化物。 (1)检查方法：量取 10ml 三氯甲烷，加 25ml 新煮沸过的水，振摇 3 分钟，静 置分层后，取 10ml 水液，加数滴 15％碘化钾溶液及淀粉指示液，振摇后应不显 蓝色。 (2)处理方法：于三氯甲烷中加人工 1／10-1／20 体积的 20％硫酸钠溶液洗涤， 再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的 l／10 馏出 液，收集中间馏出液备用。 8、淀粉指示液：称取 0.5 克可溶性淀粉，加 5ml 水搅匀后，慢慢倒入 lOOml
实验十三 食品中铅的测定 一、目的与要求： 1.掌握双硫腙比色法测定铅含量的原理与方法。 2.熟悉 72 工型分光光度计的工作原理和使用方法。 二、原理： 样品经消化后，在 PH8.5-9.0 时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯 甲烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标 准系列比较定量。 三、试剂： l、1：1 氨水； 、 2、6N 盐酸：量取 100 毫升盐酸，加水稀释至 200ml。 3、酚红指示液：0.1％乙醇溶液。 4、20％盐酸羟胺溶液：称取 20 克盐酸羟胺，加水溶解至约 50ml，加 2 滴酚 红指示液，加 1：1 氨水，调 PH 至 8.5-9.0(由黄变红，再多加 2 滴)用双硫腙-三 氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去再用三氯甲烷洗二次，弃去三 氯甲烷层，水层加 6N 盐酸呈酸隆，加水至 100 毫升。 5、20％柠檬酸铵溶液：称取 50 克柠檬酸铵，溶于 100 毫升水中，加 2 滴酚 红指示液，加 l：1 氨水，调 PH 至 8.5-9.0，用双硫腙-三氯甲烷溶液提取数次， 每次 10-20ml，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗 二次，每次 5ml，弃去三氯甲烷层，加水稀释至 250 毫升。 6、10％氰化钾溶液； 7、三氯甲烷；不应含氧化物。 (1)检查方法：量取 10ml 三氯甲烷，加 25ml 新煮沸过的水，振摇 3 分钟，静 置分层后，取 10ml 水液，加数滴 15％碘化钾溶液及淀粉指示液，振摇后应不显 蓝色。 (2)处理方法：于三氯甲烷中加人工 1／10-1／20 体积的 20％硫酸钠溶液洗涤， 再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的 l／10 馏出 液，收集中间馏出液备用。 8、淀粉指示液：称取 0.5 克可溶性淀粉，加 5ml 水搅匀后，慢慢倒入 lOOml
沸水中，随到搅拌，煮沸，放冷备用。用时配制。 9、1％硝酸：量取 1ml 硝酸，加水稀释至 100ml。 10、双硫腙溶液：0.5％三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。 称取 0.5 克研细的双硫腙，溶于 50ml 三氯甲烷中，如不全溶；可用滤纸过滤 于 250m1 分液漏斗中，用 1：99 氨水提取三次，每次 100ml，将提取液用棉花过 滤至 500m1 分液漏斗中，用 6N 盐酸调至酸性，将沉淀出的双硫腙用三氯甲烷提 取 2-3 次，每次 20ml，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤二次，弃去洗涤液，在 50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的双硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用。或将沉淀 出的双硫腙用 200，200，100ml 三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷层为双硫腙溶 液。 11、双硫腙使用液：吸取 1.Oml 双硫腙溶液，加三氯甲烷至 10ml，混匀。用： 1cm 比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长 510nm 处测吸光度(A)下式用算出配 制 100m1 双硫腙使用液(70％透光率)所需双硫腙溶液的毫升数(N)。 10(2-lg70) 1.55 V =- = - A A 12、铅标准溶液：精密称取 0.1598 克硝酸铅，加 10ml1％硝酸，全部溶解 后，移入 100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 lml 铅。 13、铅标准使用液：吸取 1.0ml 铅标准溶液，置于 100 毫升容量瓶中，加水 稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 10mg 铅。 四、仪器： 1、所用玻璃仪器均用 l0-20％硝酸浸泡 24 小时以上，用自来水反复冲洗，最 后用水冲洗干净。 2、分光光度计。 五、操作方法： 1、样品消化 (1)硝酸-硫酸法 a、酱、酱油、醋、豆腐乳、酱腌菜等：称取 10.0 克样品(或吸取 10.Oml 液 体样品)，置于 250ml 定氮瓶中，加数粒玻璃珠，lOml 硝酸，放置片刻，小火加 热、待作用缓和，放冷，沿瓶壁加入 1％硝酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕
沸水中，随到搅拌，煮沸，放冷备用。用时配制。 9、1％硝酸：量取 1ml 硝酸，加水稀释至 100ml。 10、双硫腙溶液：0.5％三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。 称取 0.5 克研细的双硫腙，溶于 50ml 三氯甲烷中，如不全溶；可用滤纸过滤 于 250m1 分液漏斗中，用 1：99 氨水提取三次，每次 100ml，将提取液用棉花过 滤至 500m1 分液漏斗中，用 6N 盐酸调至酸性，将沉淀出的双硫腙用三氯甲烷提 取 2-3 次，每次 20ml，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤二次，弃去洗涤液，在 50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的双硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用。或将沉淀 出的双硫腙用 200，200，100ml 三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷层为双硫腙溶 液。 11、双硫腙使用液：吸取 1.Oml 双硫腙溶液，加三氯甲烷至 10ml，混匀。用： 1cm 比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长 510nm 处测吸光度(A)下式用算出配 制 100m1 双硫腙使用液(70％透光率)所需双硫腙溶液的毫升数(N)。 10(2-lg70) 1.55 V =- = - A A 12、铅标准溶液：精密称取 0.1598 克硝酸铅，加 10ml1％硝酸，全部溶解 后，移入 100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 lml 铅。 13、铅标准使用液：吸取 1.0ml 铅标准溶液，置于 100 毫升容量瓶中，加水 稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 10mg 铅。 四、仪器： 1、所用玻璃仪器均用 l0-20％硝酸浸泡 24 小时以上，用自来水反复冲洗，最 后用水冲洗干净。 2、分光光度计。 五、操作方法： 1、样品消化 (1)硝酸-硫酸法 a、酱、酱油、醋、豆腐乳、酱腌菜等：称取 10.0 克样品(或吸取 10.Oml 液 体样品)，置于 250ml 定氮瓶中，加数粒玻璃珠，lOml 硝酸，放置片刻，小火加 热、待作用缓和，放冷，沿瓶壁加入 1％硝酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕
色时，不断沿瓶壁滴加硝酸有机质分解完全。加热火力，至产生白烟，溶液应澄 清无色或微带黄色，放冷。在操作过程中应注意防止爆炸。 加 20ml 水煮沸，除去残余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将 冷后的溶液移入 50ml 或 lOOml 容量瓶中用水洗涤定氮瓶，洗液并容量瓶中再放 冷，加水至刻度，混匀。定容后的溶液每 lml 相当于 2g 样品或 2ml 样品． b、含酒精性饮料或二氧化碳饮料：吸取 10.Oml 样，置于 250ml 定氮瓶中， 加数粒玻璃珠，先用小火加热除去乙醇或二氧化碳，再加 lOml 硝酸，混匀后， 以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每 10ml 相当于 2m1 样品。 c、含糖量高的食品：称取 1.0 克样品，置于 250ml 定氮瓶中，先加少许水使 湿润，加数粒玻璃珠，10ml 硝酸，摇匀，缓缓加入 10ml 硫酸，待作用缓和停止 起泡沫后，先用小火缓缓加热(糖分易炭化)，不断沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部 消失后，再加大火力，至有机质分解完全发生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色， 放冷。以下按 a 自“加 20ml 水煮沸”起依法操作。 以上湿法消化要同时作空白试验。 (2)灰化法 a、糕点及其他含水分少的食品：称取 5.0 克样品，置于坩埚中，加：至炭化， 然后移入高温炉中，500℃灰化 3 小时、放冷，取出坩埚，加 l ml 硝酸、湿润灰 分，用小火蒸干，在 500℃灼烧 1 小时，放冷，取出坩埚。加 lml 硝酸，加热， 使灰分溶解，移入 50ml 容量瓶中，用水沸涤坩埚,洗液并入容量瓶中，加水至刻 度，混匀备用。 b、含水分多的食品或液体样品：称取 5.0 克或 5.0ml 样品，置于蒸发皿中， 先在水浴上蒸于，再按 a 自“加热至炭化”起依法操作。 2、测定 吸取 10.Oml 消化后的定容溶液和同量的试剂空白液，分别置于 125ml 分液漏 斗中，各加水至 20ml。 吸取 0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml 铅标准使用液(相当于 0、 1、2、 3、4、5mg 铅)分别置于 125m1 分液漏斗中，各加 1％硝酸溶液至 20ml。 于样品消化液，试剂空白液和铅标准液中各加 2m120％柠檬酸铵溶液， lml20％盐酸羟胺溶液和 2 滴酚红指示液，用 1：1 氨水调至红色，再各加 2ml10％ 氰化钾溶液，混匀。各加 5.Oml 硫腙使用液，剧烈振摇 1 分钟，静置分层后
色时，不断沿瓶壁滴加硝酸有机质分解完全。加热火力，至产生白烟，溶液应澄 清无色或微带黄色，放冷。在操作过程中应注意防止爆炸。 加 20ml 水煮沸，除去残余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将 冷后的溶液移入 50ml 或 lOOml 容量瓶中用水洗涤定氮瓶，洗液并容量瓶中再放 冷，加水至刻度，混匀。定容后的溶液每 lml 相当于 2g 样品或 2ml 样品． b、含酒精性饮料或二氧化碳饮料：吸取 10.Oml 样，置于 250ml 定氮瓶中， 加数粒玻璃珠，先用小火加热除去乙醇或二氧化碳，再加 lOml 硝酸，混匀后， 以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每 10ml 相当于 2m1 样品。 c、含糖量高的食品：称取 1.0 克样品，置于 250ml 定氮瓶中，先加少许水使 湿润，加数粒玻璃珠，10ml 硝酸，摇匀，缓缓加入 10ml 硫酸，待作用缓和停止 起泡沫后，先用小火缓缓加热(糖分易炭化)，不断沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部 消失后，再加大火力，至有机质分解完全发生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色， 放冷。以下按 a 自“加 20ml 水煮沸”起依法操作。 以上湿法消化要同时作空白试验。 (2)灰化法 a、糕点及其他含水分少的食品：称取 5.0 克样品，置于坩埚中，加：至炭化， 然后移入高温炉中，500℃灰化 3 小时、放冷，取出坩埚，加 l ml 硝酸、湿润灰 分，用小火蒸干，在 500℃灼烧 1 小时，放冷，取出坩埚。加 lml 硝酸，加热， 使灰分溶解，移入 50ml 容量瓶中，用水沸涤坩埚,洗液并入容量瓶中，加水至刻 度，混匀备用。 b、含水分多的食品或液体样品：称取 5.0 克或 5.0ml 样品，置于蒸发皿中， 先在水浴上蒸于，再按 a 自“加热至炭化”起依法操作。 2、测定 吸取 10.Oml 消化后的定容溶液和同量的试剂空白液，分别置于 125ml 分液漏 斗中，各加水至 20ml。 吸取 0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml 铅标准使用液(相当于 0、 1、2、 3、4、5mg 铅)分别置于 125m1 分液漏斗中，各加 1％硝酸溶液至 20ml。 于样品消化液，试剂空白液和铅标准液中各加 2m120％柠檬酸铵溶液， lml20％盐酸羟胺溶液和 2 滴酚红指示液，用 1：1 氨水调至红色，再各加 2ml10％ 氰化钾溶液，混匀。各加 5.Oml 硫腙使用液，剧烈振摇 1 分钟，静置分层后
三氯甲烷层经脱脂棉滤人 1cm 比色杯中，以零点于波长 5lOnm 处测吸光度，绘 制标准曲线比较。 计算： (A1—A2)×1000 X=- V2 m×-×1000 V1 X：样品中铅的含量，mg／kg 或 mg／L； A1：测定用样品消化液中铅的含量，mg； A2：试剂空白液中铅的含量，mg； M：样品质量(体积)，克(m1)； V1：样品消化液的总体积(m1)； V2：测定用样品消化液体积，m1
三氯甲烷层经脱脂棉滤人 1cm 比色杯中，以零点于波长 5lOnm 处测吸光度，绘 制标准曲线比较。 计算： (A1—A2)×1000 X=- V2 m×-×1000 V1 X：样品中铅的含量，mg／kg 或 mg／L； A1：测定用样品消化液中铅的含量，mg； A2：试剂空白液中铅的含量，mg； M：样品质量(体积)，克(m1)； V1：样品消化液的总体积(m1)； V2：测定用样品消化液体积，m1