实验十四 食品中总汞的测定 第一法冷原子吸收法 一、目的与要求： 1、 掌握用分光分度计测定总汞的方法 2、 初步掌握用冷原子吸收法测总汞的方法 二、原理： 汞蒸气对波长 253.7nm 的共振线具有强烈的吸收作用，样品经过硝酸—硫酸 或硝酸－硫酸—五氧化二钒消化使汞转为离子状态，在强酸性中以氯化亚锡还原 成元素汞，以氮气干燥清洁空气作为载体，将汞吸出，进行冷原子吸收测定，与 标准系列比较定量。 三、试剂与仪器： 1、硝酸 2、硫酸 3、30％氯化亚锡溶液：称取 30 克氯化亚锡(Sncl2·2H20)加少量水，再加 2ml 硫酸使溶解后，加水稀释至 100ml，放置冰箱保存。 4、无水氯化钙，干燥用。 5、5N 混合酸液：量取 10ml 硫酸，再加人 lOml 硝酸，慢慢倒人 50ml 水中， 冷后加水稀释至 100ml。 6、五氧化二钒。 7、5％高锰酸钾溶液：配好后煮沸 10 分钟，静置过夜，过滤，棕色瓶中。 8、20％盐酸羟胺溶液。 9、汞标准溶液：精密称取 0.1354 克于干燥器干燥过的二氯化汞，加 5N 混合 酸溶解后移入 100ml 容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于 1mg 汞。 10、汞标准使用液：吸取 1.0ml 汞标准溶液，置于 100 毫升容量瓶中，加 5N 混合酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 1ug 汞，再吸取此液 1.0，置于 lOOml 容量瓶中，加 5N 混合酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 0.lug 汞，用时现配。 11、消化装置一套
实验十四 食品中总汞的测定 第一法冷原子吸收法 一、目的与要求： 1、 掌握用分光分度计测定总汞的方法 2、 初步掌握用冷原子吸收法测总汞的方法 二、原理： 汞蒸气对波长 253.7nm 的共振线具有强烈的吸收作用，样品经过硝酸—硫酸 或硝酸－硫酸—五氧化二钒消化使汞转为离子状态，在强酸性中以氯化亚锡还原 成元素汞，以氮气干燥清洁空气作为载体，将汞吸出，进行冷原子吸收测定，与 标准系列比较定量。 三、试剂与仪器： 1、硝酸 2、硫酸 3、30％氯化亚锡溶液：称取 30 克氯化亚锡(Sncl2·2H20)加少量水，再加 2ml 硫酸使溶解后，加水稀释至 100ml，放置冰箱保存。 4、无水氯化钙，干燥用。 5、5N 混合酸液：量取 10ml 硫酸，再加人 lOml 硝酸，慢慢倒人 50ml 水中， 冷后加水稀释至 100ml。 6、五氧化二钒。 7、5％高锰酸钾溶液：配好后煮沸 10 分钟，静置过夜，过滤，棕色瓶中。 8、20％盐酸羟胺溶液。 9、汞标准溶液：精密称取 0.1354 克于干燥器干燥过的二氯化汞，加 5N 混合 酸溶解后移入 100ml 容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于 1mg 汞。 10、汞标准使用液：吸取 1.0ml 汞标准溶液，置于 100 毫升容量瓶中，加 5N 混合酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 1ug 汞，再吸取此液 1.0，置于 lOOml 容量瓶中，加 5N 混合酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 0.lug 汞，用时现配。 11、消化装置一套
12、测汞仪。 13、汞蒸气发生器。 14、抽气装置。 四、操作方法： (一)样品消化 1、回流消化法。 (1)、粮食或水分少的食品：，称取 10 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻 璃珠数粒，加 45ml 硝酸，lOml 硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化，装上冷凝管后， 小心火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后，加热回流 2 小时。如加热过 程中溶液变棕色，再加 5ml 硝酸，继续回流 2 小时，放冷后从冷凝管上端小心加 20ml 水，继续加热回流 10 分钟，放冷，用适量水冲洗冷凝管，洗液并入消化液 中，将消化液经玻璃棉过滤于 lOOml 容量瓶内，用少量水洗锥形瓶，滤器，洗 液并入容量瓶内，加水至刻度混匀，取与消化样品相同量的硝酸、硫酸，按同一 方法做试剂空白试验。 (2)植物油及动物油脂：称取 5.0 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠 数粒，加入 7m1 硫酸，小心混匀至溶液颜色变为棕色，然后加 40ml 硝酸，装上 冷凝管后，以下按(1)自“小火加热”起依法操作。 (3)薯类、豆制品：称取 20 克捣碎混匀的样品(薯类须预先洗净晾干)，置于消 化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 30ml 硝酸、5ml 硫酸，转动锥形瓶防止局部 炭化，装上冷凝管后，以下按(1)自“小火加热”起依法操作。 (4)肉、蛋类：称取 10 克捣碎混匀的样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃数 粒及 30ml 硝酸，5m1 硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化，装上冷凝管以下按自(1) “小火加热”起依法操作。 (5)牛乳及乳制品：称取 20 克牛乳或酸牛乳，或相当于 20 克牛乳的乳制品(2.4 克全脂乳粉，8 克甜炼乳)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 30ml 硝酸， 牛乳或酸牛乳加 10ml 硫酸，乳制品加 5m1 硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。装 上冷凝管后，以下按(1)“小火加热”起依法操作。 2、五氧化二钒消化法 本法适用于水产品、蔬菜、水果。 (1)取可食部分、洗净，晾干、切碎、混匀，取 2.50 克水产品或 l0 克蔬菜，水
12、测汞仪。 13、汞蒸气发生器。 14、抽气装置。 四、操作方法： (一)样品消化 1、回流消化法。 (1)、粮食或水分少的食品：，称取 10 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻 璃珠数粒，加 45ml 硝酸，lOml 硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化，装上冷凝管后， 小心火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后，加热回流 2 小时。如加热过 程中溶液变棕色，再加 5ml 硝酸，继续回流 2 小时，放冷后从冷凝管上端小心加 20ml 水，继续加热回流 10 分钟，放冷，用适量水冲洗冷凝管，洗液并入消化液 中，将消化液经玻璃棉过滤于 lOOml 容量瓶内，用少量水洗锥形瓶，滤器，洗 液并入容量瓶内，加水至刻度混匀，取与消化样品相同量的硝酸、硫酸，按同一 方法做试剂空白试验。 (2)植物油及动物油脂：称取 5.0 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠 数粒，加入 7m1 硫酸，小心混匀至溶液颜色变为棕色，然后加 40ml 硝酸，装上 冷凝管后，以下按(1)自“小火加热”起依法操作。 (3)薯类、豆制品：称取 20 克捣碎混匀的样品(薯类须预先洗净晾干)，置于消 化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 30ml 硝酸、5ml 硫酸，转动锥形瓶防止局部 炭化，装上冷凝管后，以下按(1)自“小火加热”起依法操作。 (4)肉、蛋类：称取 10 克捣碎混匀的样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃数 粒及 30ml 硝酸，5m1 硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化，装上冷凝管以下按自(1) “小火加热”起依法操作。 (5)牛乳及乳制品：称取 20 克牛乳或酸牛乳，或相当于 20 克牛乳的乳制品(2.4 克全脂乳粉，8 克甜炼乳)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 30ml 硝酸， 牛乳或酸牛乳加 10ml 硫酸，乳制品加 5m1 硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。装 上冷凝管后，以下按(1)“小火加热”起依法操作。 2、五氧化二钒消化法 本法适用于水产品、蔬菜、水果。 (1)取可食部分、洗净，晾干、切碎、混匀，取 2.50 克水产品或 l0 克蔬菜，水
果，置于 50-lO0ml 锥形瓶中，加 50mg 五氧化二钒粉末，再加 8m1 硝酸，振摇， 放置 4 小时，加 5m1 硫酸，混匀，然后移至 140℃砂浴上加热，开始作用较猛烈， 以后渐渐缓慢，待瓶口基本上无棕色气体逸出时，用少量水冲洗瓶口，再加热 5 分钟，放冷。加 5ml 5％高锰酸钾溶液，放置 4 小时(或过夜)，滴加 20％盐酸羟 胺溶液使紫色褪去，振摇，放置数分钟，移入容量瓶中，并稀释至刻度，蔬菜、 水果为 25ml，水产品为 100ml。 取与消化样品相同量的五氧化二钒，硝酸，硫酸按同一方法进行试剂空白试 验。 (二)测定 1、用回流消化法制备的样品消化液 (1)、吸取 10.Oml 样品消化液，置于汞蒸气发生器内，连接抽气装置，沿壁迅 速加入 2m130％氯化亚锡溶液，立即通人流速为 1.5 升／分的氮气或经活性炭处 理的空气，使汞蒸气经过氯化钙干燥管进入测汞仪中，读取测汞仪上最大读数， 同时做试剂空白实验。 (2)吸取 0.00，0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ML 汞标准使用液(相当 0、 0.01、 0.02、0.03、0.04、0.05ug 汞)置于试管中，各加 10ml l5N 混合酸，以下按测定 (1)自“置于汞蒸气发生器内”起依法操作，绘制标准曲线。 (3)计算： (A1-A2)×1000 X=- V2 m×-×1000 V1 X：样品中汞的含量，mg／kg； Al：测定用样品消化液中汞的含量，ug； A2：试剂空白液中汞的含量，ug； M；样品质量，g； Vl：样品消化液总体积，ml; V2：测定用样品消化液体积，ml。 2、用五氧化二钒消化法制备的样品消化液 (1) 吸取 10.Oml 样品消化液，以下按回流消化法的测定(1)的方法操做
果，置于 50-lO0ml 锥形瓶中，加 50mg 五氧化二钒粉末，再加 8m1 硝酸，振摇， 放置 4 小时，加 5m1 硫酸，混匀，然后移至 140℃砂浴上加热，开始作用较猛烈， 以后渐渐缓慢，待瓶口基本上无棕色气体逸出时，用少量水冲洗瓶口，再加热 5 分钟，放冷。加 5ml 5％高锰酸钾溶液，放置 4 小时(或过夜)，滴加 20％盐酸羟 胺溶液使紫色褪去，振摇，放置数分钟，移入容量瓶中，并稀释至刻度，蔬菜、 水果为 25ml，水产品为 100ml。 取与消化样品相同量的五氧化二钒，硝酸，硫酸按同一方法进行试剂空白试 验。 (二)测定 1、用回流消化法制备的样品消化液 (1)、吸取 10.Oml 样品消化液，置于汞蒸气发生器内，连接抽气装置，沿壁迅 速加入 2m130％氯化亚锡溶液，立即通人流速为 1.5 升／分的氮气或经活性炭处 理的空气，使汞蒸气经过氯化钙干燥管进入测汞仪中，读取测汞仪上最大读数， 同时做试剂空白实验。 (2)吸取 0.00，0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ML 汞标准使用液(相当 0、 0.01、 0.02、0.03、0.04、0.05ug 汞)置于试管中，各加 10ml l5N 混合酸，以下按测定 (1)自“置于汞蒸气发生器内”起依法操作，绘制标准曲线。 (3)计算： (A1-A2)×1000 X=- V2 m×-×1000 V1 X：样品中汞的含量，mg／kg； Al：测定用样品消化液中汞的含量，ug； A2：试剂空白液中汞的含量，ug； M；样品质量，g； Vl：样品消化液总体积，ml; V2：测定用样品消化液体积，ml。 2、用五氧化二钒消化法制备的样品消化液 (1) 吸取 10.Oml 样品消化液，以下按回流消化法的测定(1)的方法操做
(2) 吸取 0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml 汞标准使用液(相当 0、 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ug 汞)，置于 6 个 50ml 容量瓶中，各加 lmll：1)硫酸、lmll5％ 高锰酸钾溶液，加 20ml 水，混匀，滴加 20％盐酸羟胺溶液使紫色褪去，加水至 刻度混匀，分别吸取 10.Oml(相当 0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10ug 汞)，以 下按回流消化法(1)自“置于汞蒸气发生器内”起依法操作，绘制标准曲线。 (3)计算同前。 第二法 双硫腙法 一、原理： 样品经消化后，汞离子在酸性溶液中可与双硫腙生成橙色络合物，溶于三氯 佐烷，与标准系列比较定量。 二、试剂与仪器： 1、硝酸 2、硫酸 3、1N 硫酸：量取 5m1 硫酸、缓缓倒入 l5Oml 水中，冷却后加水至 180ml。 4、5％硫酸：量取 5ml 硫酸，缓缓倒入 90ml 水中，冷却后加水至 98ml。 5、氨水。 6、溴麝香草酚蓝指示液：0.1％乙醇溶液。 7、20％盐酸羟胺溶液：吹清洁空气，可使含有的微量汞挥发除去。 8、三氯甲烷：不应含有氧化物。 9、双腙硫溶液：同食品中铅的测定方法。 10、双腙硫使用液：同铅的测定方法。 11、汞标准溶液：精密称取 0.1354 克经干燥器干燥过的二氯化汞，加 1N 硫 酸使其溶解后，移入 lOOml 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 1ml 汞。 12、汞标准使用液：吸取 1.Oml 汞标准溶液，置于 lOOml 容量瓶中，加 1N 硫酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 lOug 汞。再吸取此液 5.Oml 于 50ml 容量 瓶中，加 1N 硫酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 1ug 汞。 13、消化装置 14、分光光度计
(2) 吸取 0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml 汞标准使用液(相当 0、 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ug 汞)，置于 6 个 50ml 容量瓶中，各加 lmll：1)硫酸、lmll5％ 高锰酸钾溶液，加 20ml 水，混匀，滴加 20％盐酸羟胺溶液使紫色褪去，加水至 刻度混匀，分别吸取 10.Oml(相当 0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10ug 汞)，以 下按回流消化法(1)自“置于汞蒸气发生器内”起依法操作，绘制标准曲线。 (3)计算同前。 第二法 双硫腙法 一、原理： 样品经消化后，汞离子在酸性溶液中可与双硫腙生成橙色络合物，溶于三氯 佐烷，与标准系列比较定量。 二、试剂与仪器： 1、硝酸 2、硫酸 3、1N 硫酸：量取 5m1 硫酸、缓缓倒入 l5Oml 水中，冷却后加水至 180ml。 4、5％硫酸：量取 5ml 硫酸，缓缓倒入 90ml 水中，冷却后加水至 98ml。 5、氨水。 6、溴麝香草酚蓝指示液：0.1％乙醇溶液。 7、20％盐酸羟胺溶液：吹清洁空气，可使含有的微量汞挥发除去。 8、三氯甲烷：不应含有氧化物。 9、双腙硫溶液：同食品中铅的测定方法。 10、双腙硫使用液：同铅的测定方法。 11、汞标准溶液：精密称取 0.1354 克经干燥器干燥过的二氯化汞，加 1N 硫 酸使其溶解后，移入 lOOml 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 1ml 汞。 12、汞标准使用液：吸取 1.Oml 汞标准溶液，置于 lOOml 容量瓶中，加 1N 硫酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 lOug 汞。再吸取此液 5.Oml 于 50ml 容量 瓶中，加 1N 硫酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 1ug 汞。 13、消化装置 14、分光光度计
三、操作方法： (一)样品消化 1、粮食或水分少的食品：称取 20 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃 珠数粒及 80ml 硝酸、15ml 硫酸、转动锥形瓶，防止局部炭化。装上冷凝管后， 小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后加热回流 2 小时。如加热过程中 溶液变棕色，再加 5ml 硝酸，继续回流 2 小时，放冷，用适量水洗涤冷凝管，洗 液并入消化液中，取下锥形瓶，加水至总体积为 150ml。取与消化样品相同量的 硝酸，硫酸按同一方法做试剂空白试验。 2、植物油及动物油脂：称取 10 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠 数粒及 15ml 硫酸，小心混匀至溶液变棕，然后加入 45ml 硝酸，装上冷凝管后， 以下按 1 自“小火加热”起依法操作。 3、蔬菜、水果、薯类、豆制品：称取 50 克捣碎混匀的样品(豆制品直接取样， 其他样品取可食部分洗净，晾干)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 45ml 硝酸，15ml 硫酸，转动锥形瓶，防止局部炭化，装上冷凝管后，以下按 l 自“小 火加热”起依法操作。 4、肉、蛋、水产品：称取 20 克捣碎混匀样品，置于消化装置锥形瓶中，加 玻璃珠数粒及 45ml 硝酸，15ml 硫酸，装上冷凝管后，以下按 1 自“小火加热” 起依法操作。 5、牛乳制品：称取 50 克牛乳、酸牛乳，或相当于 50 克牛乳的乳制品(6 克全 脂乳粉，20 克甜炼乳，12.5 克淡炼乳)置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 45ml 硝酸、牛乳、酸牛乳加 15ml 硫酸，乳制品加 lOml 硫酸装上冷凝管后，以 下按 1 自“小火加热”起依法操作。 (二)测定 1、取 1-5 消化液(全量)，加 20ml 水，在电炉上煮沸 10 分钟，除去二氧化氮 等，放冷。 2、于样品消化液及试剂空白液中各加 5％高锰酸钾溶液至溶液呈紫色，然后 再加 20％盐酸羟胺溶液使紫色褪去，加 2 滴麝香草酚蓝指示液，用氨水调节 PH， 使橙红色变为黄色(PHl—2)定量转移至 125m1 分液漏斗中。 3、吸取 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.Oml 汞标准使用液(相当于 0.0、 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.Oug 汞)，分别置于 125m1 分液漏斗中，加 lOmll5％
三、操作方法： (一)样品消化 1、粮食或水分少的食品：称取 20 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃 珠数粒及 80ml 硝酸、15ml 硫酸、转动锥形瓶，防止局部炭化。装上冷凝管后， 小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后加热回流 2 小时。如加热过程中 溶液变棕色，再加 5ml 硝酸，继续回流 2 小时，放冷，用适量水洗涤冷凝管，洗 液并入消化液中，取下锥形瓶，加水至总体积为 150ml。取与消化样品相同量的 硝酸，硫酸按同一方法做试剂空白试验。 2、植物油及动物油脂：称取 10 克样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠 数粒及 15ml 硫酸，小心混匀至溶液变棕，然后加入 45ml 硝酸，装上冷凝管后， 以下按 1 自“小火加热”起依法操作。 3、蔬菜、水果、薯类、豆制品：称取 50 克捣碎混匀的样品(豆制品直接取样， 其他样品取可食部分洗净，晾干)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 45ml 硝酸，15ml 硫酸，转动锥形瓶，防止局部炭化，装上冷凝管后，以下按 l 自“小 火加热”起依法操作。 4、肉、蛋、水产品：称取 20 克捣碎混匀样品，置于消化装置锥形瓶中，加 玻璃珠数粒及 45ml 硝酸，15ml 硫酸，装上冷凝管后，以下按 1 自“小火加热” 起依法操作。 5、牛乳制品：称取 50 克牛乳、酸牛乳，或相当于 50 克牛乳的乳制品(6 克全 脂乳粉，20 克甜炼乳，12.5 克淡炼乳)置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及 45ml 硝酸、牛乳、酸牛乳加 15ml 硫酸，乳制品加 lOml 硫酸装上冷凝管后，以 下按 1 自“小火加热”起依法操作。 (二)测定 1、取 1-5 消化液(全量)，加 20ml 水，在电炉上煮沸 10 分钟，除去二氧化氮 等，放冷。 2、于样品消化液及试剂空白液中各加 5％高锰酸钾溶液至溶液呈紫色，然后 再加 20％盐酸羟胺溶液使紫色褪去，加 2 滴麝香草酚蓝指示液，用氨水调节 PH， 使橙红色变为黄色(PHl—2)定量转移至 125m1 分液漏斗中。 3、吸取 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.Oml 汞标准使用液(相当于 0.0、 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.Oug 汞)，分别置于 125m1 分液漏斗中，加 lOmll5％
硫酸，再加水至 40ml 混匀。再各加 lml20％盐酸羟胺溶液，放置 20 分钟并时时 振摇。 4、于样品消化液，试剂空白液及标准液振摇放冷后的分液漏斗中加 5.Oml 双硫腙使用液，剧烈振摇 2 分钟，静置分层后，经脱脂棉将三氯甲烷层滤人 1cm 比色杯中，以三氯甲烷调节零点。在波长 490nm 处测光度，标准管吸光度减去 零管吸光度，绘制标准曲线。 计算： (A1-A2)×1000 X=- M×1000
硫酸，再加水至 40ml 混匀。再各加 lml20％盐酸羟胺溶液，放置 20 分钟并时时 振摇。 4、于样品消化液，试剂空白液及标准液振摇放冷后的分液漏斗中加 5.Oml 双硫腙使用液，剧烈振摇 2 分钟，静置分层后，经脱脂棉将三氯甲烷层滤人 1cm 比色杯中，以三氯甲烷调节零点。在波长 490nm 处测光度，标准管吸光度减去 零管吸光度，绘制标准曲线。 计算： (A1-A2)×1000 X=- M×1000