实验十九 蘑菇罐头中漂白剂的测定 ——盐酸副玫瑰苯胺比色法 一、目的与要求： 1、掌握盐酸副玫瑰苯胺比色法测定 S02 的方法与原理。 2、熟悉 72I 型分光光度计的工作原理和使用方法。 二、原理： 二氧化硫被四氯汞钠吸收液吸收后，生成稳定的络合物，再与甲醛和盐酸副 玫瑰苯胺作用，并经分子重排后，生成紫红色的络合物。颜色的深浅与二氧化硫 的浓度成正比，可以比色测定。反应式如下： 三、试剂及仪器 （1）四氯汞钠吸收液：称取氯化汞（HgCl2）27.2，氯化钠 11.7 克，溶于水 中并稀释至 1000 毫升，放置过夜，过滤后使用。 （2）显色计：融解盐酸福玫瑰苯胺 100 毫克于 200 毫升水中，加 40 毫升浓 盐酸，定容至 500 毫升，置于棕色瓶中。 （3）2％甲醛溶液：吸取 37-40％甲醛 5 毫升于水中，并稀释至 100 毫升。 （4）1％淀粉指示剂。 (5) 冰醋酸
实验十九 蘑菇罐头中漂白剂的测定 ——盐酸副玫瑰苯胺比色法 一、目的与要求： 1、掌握盐酸副玫瑰苯胺比色法测定 S02 的方法与原理。 2、熟悉 72I 型分光光度计的工作原理和使用方法。 二、原理： 二氧化硫被四氯汞钠吸收液吸收后，生成稳定的络合物，再与甲醛和盐酸副 玫瑰苯胺作用，并经分子重排后，生成紫红色的络合物。颜色的深浅与二氧化硫 的浓度成正比，可以比色测定。反应式如下： 三、试剂及仪器 （1）四氯汞钠吸收液：称取氯化汞（HgCl2）27.2，氯化钠 11.7 克，溶于水 中并稀释至 1000 毫升，放置过夜，过滤后使用。 （2）显色计：融解盐酸福玫瑰苯胺 100 毫克于 200 毫升水中，加 40 毫升浓 盐酸，定容至 500 毫升，置于棕色瓶中。 （3）2％甲醛溶液：吸取 37-40％甲醛 5 毫升于水中，并稀释至 100 毫升。 （4）1％淀粉指示剂。 (5) 冰醋酸
(6) 蛋白质沉淀剂。 a)饱和硼砂溶液：溶解约 25 克硼砂于 500 毫升水中． b)硫酸锌溶液溶解 150 克硫酸锌于 500 毫升水中。 (7) 0.1N 碘溶液。 (8) 0.1N 硫氏硫酸钠标准溶液。 并稀释至 (9) 二氧化硫标准溶液：称取 0.5 克亚硫酸氢钠溶于 200 毫升四氯汞钠吸收液 中，放置过夜。上清液用定量滤纸过滤备用，按下法进行标定。 取 10 毫升亚硫酸氢钠四氯汞钠溶液于 250 毫升碘价瓶中，加水 100 毫升， 加入 0.1N 碘溶液 20 毫升，冰醋酸 5 毫升，摇匀，用 0.1N 硫代硫酸钠溶液滴定 到淡黄色，加入 1％淀粉指示剂 5-6 滴，继续滴定至无色。空白试验于 250 毫升 碘价瓶中加 A300 毫升水，按上述步骤同样操作。 V1-V2 SO2(毫克/毫升)＝-×N×32.03 10 V1；空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的量(m1) V2：标准消耗硫代硫酸钠标准溶液的量(m1) N：硫代硫酸钠标准溶液的当量浓度 32.03：0.1N 硫代硫酸钠溶液 1 毫升相当于二氧化硫的量(毫克) 根据计算结果，用吸收液稀释成 1 毫升相当于 2 微克的二氧化硫。此应用液 于 4℃冰箱中保存，可供一周内使用。 (10)分光光度计 (1) 样品处理：称取经捣碎蘑菇样品 20 克，加入饱和硼砂溶液 5 毫升，硫酸 锌 2 毫升，搅拌均匀，移入 100 毫升容量瓶中，加水至刻度。过滤，滤液供测定 用(滤液必须澄清，否则要重复过滤数次)。 (2) 标准曲线的绘制：吸取每毫升相当于 2 微克的二氧化硫标准溶液 0.0、1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0 毫升于 25 毫升比色管中，各加入 2％甲醛溶液 1 毫升，显色 剂 1 毫升，另分别依次加入 10、9、8、7、6、5 毫升吸收液，混匀，静置 15 分 钟，于分光光度计 580 毫微米波长下测定
(6) 蛋白质沉淀剂。 a)饱和硼砂溶液：溶解约 25 克硼砂于 500 毫升水中． b)硫酸锌溶液溶解 150 克硫酸锌于 500 毫升水中。 (7) 0.1N 碘溶液。 (8) 0.1N 硫氏硫酸钠标准溶液。 并稀释至 (9) 二氧化硫标准溶液：称取 0.5 克亚硫酸氢钠溶于 200 毫升四氯汞钠吸收液 中，放置过夜。上清液用定量滤纸过滤备用，按下法进行标定。 取 10 毫升亚硫酸氢钠四氯汞钠溶液于 250 毫升碘价瓶中，加水 100 毫升， 加入 0.1N 碘溶液 20 毫升，冰醋酸 5 毫升，摇匀，用 0.1N 硫代硫酸钠溶液滴定 到淡黄色，加入 1％淀粉指示剂 5-6 滴，继续滴定至无色。空白试验于 250 毫升 碘价瓶中加 A300 毫升水，按上述步骤同样操作。 V1-V2 SO2(毫克/毫升)＝-×N×32.03 10 V1；空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的量(m1) V2：标准消耗硫代硫酸钠标准溶液的量(m1) N：硫代硫酸钠标准溶液的当量浓度 32.03：0.1N 硫代硫酸钠溶液 1 毫升相当于二氧化硫的量(毫克) 根据计算结果，用吸收液稀释成 1 毫升相当于 2 微克的二氧化硫。此应用液 于 4℃冰箱中保存，可供一周内使用。 (10)分光光度计 (1) 样品处理：称取经捣碎蘑菇样品 20 克，加入饱和硼砂溶液 5 毫升，硫酸 锌 2 毫升，搅拌均匀，移入 100 毫升容量瓶中，加水至刻度。过滤，滤液供测定 用(滤液必须澄清，否则要重复过滤数次)。 (2) 标准曲线的绘制：吸取每毫升相当于 2 微克的二氧化硫标准溶液 0.0、1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0 毫升于 25 毫升比色管中，各加入 2％甲醛溶液 1 毫升，显色 剂 1 毫升，另分别依次加入 10、9、8、7、6、5 毫升吸收液，混匀，静置 15 分 钟，于分光光度计 580 毫微米波长下测定
(3) 样品分析：吸取滤液 5 毫升，加人吸收剂 5 毫升，2％甲醛溶液 1 毫升， 显色剂 1 毫升，混匀，静置 15 分钟，于分光光度计 580 毫微米波长下测定光密 度。根据测得的光密度，从标准曲线查得相应的二氧化硫的含量。 计算： C S02：(毫克／公斤)＝-×1000 W C；相当于标准的量(毫克)。 W：测定时所取样品溶液相当于样品的量(克)。 注意事项： (1)最适反应为 20-25℃，温度低灵敏度低，故标准管与样品管需在相同温度下 显色。 (2)温度为 15-16℃，放置时间需延长为 25 分钟，颜色稳定 20 分钟。 (3)盐酸副玫瑰苯胺中的盐酸用量对显色有影响，加人盐酸量多，显色浅，加 入量少，显色深，所以要按操作进行。 (4) 甲醛浓度在 0.15-0.25％时，颜色稳定，故选择 0.2％甲醛溶液。 (5) 颜色较深的样品，可用 l0％活性炭脱色。 (6) 测定粉丝，粉条中的二氧化硫时，样品要浸泡 30 分钟。 (7) 样品加入四氯汞钠吸收液于 100 毫升容量瓶中，加水至刻度，摇匀。此溶 液中的二氧化硫含量在 24 小时之内很稳定。 实验法二、滴定法二氧化硫的测定 一、原理 样品中的二氧化硫包括游离的和结合的，加人氢氧化钾使之破坏其结合状 态，并使之固定。 S02+2KOH - K2S03+H20 加入硫酸又使二氧化硫游离，可用标准碘液滴定之， K2S03+H2S04 - K2S04+H2O+S02 S02+2H20+12 - H2S04+2HI 反应式如下：
(3) 样品分析：吸取滤液 5 毫升，加人吸收剂 5 毫升，2％甲醛溶液 1 毫升， 显色剂 1 毫升，混匀，静置 15 分钟，于分光光度计 580 毫微米波长下测定光密 度。根据测得的光密度，从标准曲线查得相应的二氧化硫的含量。 计算： C S02：(毫克／公斤)＝-×1000 W C；相当于标准的量(毫克)。 W：测定时所取样品溶液相当于样品的量(克)。 注意事项： (1)最适反应为 20-25℃，温度低灵敏度低，故标准管与样品管需在相同温度下 显色。 (2)温度为 15-16℃，放置时间需延长为 25 分钟，颜色稳定 20 分钟。 (3)盐酸副玫瑰苯胺中的盐酸用量对显色有影响，加人盐酸量多，显色浅，加 入量少，显色深，所以要按操作进行。 (4) 甲醛浓度在 0.15-0.25％时，颜色稳定，故选择 0.2％甲醛溶液。 (5) 颜色较深的样品，可用 l0％活性炭脱色。 (6) 测定粉丝，粉条中的二氧化硫时，样品要浸泡 30 分钟。 (7) 样品加入四氯汞钠吸收液于 100 毫升容量瓶中，加水至刻度，摇匀。此溶 液中的二氧化硫含量在 24 小时之内很稳定。 实验法二、滴定法二氧化硫的测定 一、原理 样品中的二氧化硫包括游离的和结合的，加人氢氧化钾使之破坏其结合状 态，并使之固定。 S02+2KOH - K2S03+H20 加入硫酸又使二氧化硫游离，可用标准碘液滴定之， K2S03+H2S04 - K2S04+H2O+S02 S02+2H20+12 - H2S04+2HI 反应式如下：
到达终点时，稍过量的碘即与淀粉指示剂作用，生成兰色的碘-淀粉复合物。 从碘标准溶液的消耗量可计算出二氧化硫的含量。 二、试剂及仪器： (1)1N 氢氧化钾溶液：溶解 57 号氢氧化钠于蒸馏水中，加蒸馏水稀释至 1000 毫升。 (2)1：3 硫酸溶液。 (3)0.01N 碘标准溶液。 (4)O.1％淀粉溶液。 (5)250 毫克容量瓶。 (6)250 毫升碘价瓶或具塞锥形瓶。 三、操作方法： 在小烧杯内称取试样 20 克(准确至 0.01 克)，用蒸馏水将试样洗入 250 毫升 容量瓶中，加蒸馏水至总 容量的二分之一，加塞振荡，再加蒸馏水至刻度，摇 匀。待瓶内液体澄清后，用 50ml 移液管吸取澄清液 50 毫升注入 250 毫升碘价瓶 中，加入 1NKOH 溶液 25 毫升。将瓶内混和液用力振摇后放置 l0 分钟，然后一 边振荡一边加入 1：3 硫酸溶液 10 毫升和淀粉液 1 毫升，以碘标准溶液滴定至呈 现兰色并半分钟不褪色为止。同时不加试样按上述进行空白试验。 计算： (V1-V2)×N×0.032×5 S02＝ -×100 W V1：滴定时所耗碘标液的量(毫升)。 V2：滴定空白试验所耗碘标液的量(毫升)。 N：碘标准溶液的规定浓度。 W：样品的重量(克) 0.032：二氧化硫的毫克当量
到达终点时，稍过量的碘即与淀粉指示剂作用，生成兰色的碘-淀粉复合物。 从碘标准溶液的消耗量可计算出二氧化硫的含量。 二、试剂及仪器： (1)1N 氢氧化钾溶液：溶解 57 号氢氧化钠于蒸馏水中，加蒸馏水稀释至 1000 毫升。 (2)1：3 硫酸溶液。 (3)0.01N 碘标准溶液。 (4)O.1％淀粉溶液。 (5)250 毫克容量瓶。 (6)250 毫升碘价瓶或具塞锥形瓶。 三、操作方法： 在小烧杯内称取试样 20 克(准确至 0.01 克)，用蒸馏水将试样洗入 250 毫升 容量瓶中，加蒸馏水至总 容量的二分之一，加塞振荡，再加蒸馏水至刻度，摇 匀。待瓶内液体澄清后，用 50ml 移液管吸取澄清液 50 毫升注入 250 毫升碘价瓶 中，加入 1NKOH 溶液 25 毫升。将瓶内混和液用力振摇后放置 l0 分钟，然后一 边振荡一边加入 1：3 硫酸溶液 10 毫升和淀粉液 1 毫升，以碘标准溶液滴定至呈 现兰色并半分钟不褪色为止。同时不加试样按上述进行空白试验。 计算： (V1-V2)×N×0.032×5 S02＝ -×100 W V1：滴定时所耗碘标液的量(毫升)。 V2：滴定空白试验所耗碘标液的量(毫升)。 N：碘标准溶液的规定浓度。 W：样品的重量(克) 0.032：二氧化硫的毫克当量