陕西医学高等专科学校教案(基础课程) 课程名称|病原生物学班级 专业,层次|临床、全科医学(大专) 和免疫学 授课方式 专业技 教师 术职务 (大,小班,大班时2学时 实习) 授课题目 第五章免疫系统一一免疫细胞 (章,节) 第一节免疫细胞第二节细胞因子 1《病原生物学和免疫学》(第五版),陈兴保主编人民卫生出版社北京20047 基本教材或主要参2医学微生物学本科教材(第六版),周正任主编人民卫生出版社北京200312 考书 3.《医学免疫学》本科教材(第三版),陈慰峰主编人民卫生出版社北京2000.8 4免疫学图像素材库,司传平主编,高等教育出版社 教学目的: 1.掌握T细胞、B细胞主要特点及功能;细胞因子的概念及种类 2.熟悉免疫细胞的概念及种类:T细胞的亚群及功能:NK细胞、单核吞噬细胞的特点 及功能:细胞因子的生物学功能。 1.了解T细胞、B细胞来源、分化与分布;细胞因子的共同特点 教学内容 基本概念 (15分钟) 2.免疫细胞的种类、特点、功能 (55分钟) 3.细胞因子概念和种类 (15分钟) 教学方法:启发式教学 教具:多媒体、胶片等 教学重点,难点: TC、BC的特性及免疫功能;NK细胞的特性及免疫功能 2.细胞因子概念和种类; 教研室审阅意见 安排合理,同意实施。 姜凤良(教研室主任签名) 年月日
陕西医学高等专科学校教案（基础课程） 课程名称 病原生物学 和免疫学 班级 专业，层次 临床、全科医学（大专） 教 师 专业技 术职务 授课方式 （大，小班， 实习） 大班 学 时 2 学时 授课题目 （章，节） 第五章 免疫系统——免疫细胞 第一节 免疫细胞 第二节 细胞因子 基本教材或主要参 考书 1.«病原生物学和免疫学»（第五版），陈兴保主编.人民卫生出版社.北京.2004.7 2.«医学微生物学»本科教材（第六版），周正任主编.人民卫生出版社.北京.2003.12 3.«医学免疫学»本科教材（第三版），陈慰峰主编.人民卫生出版社.北京.2000.8 4.免疫学图像素材库，司传平主编，高等教育出版社 教学目的： 1．掌握 T 细胞、B 细胞主要特点及功能；细胞因子的概念及种类。 2．熟悉免疫细胞的概念及种类；T 细胞的亚群及功能；NK 细胞、单核吞噬细胞的特点 及功能；细胞因子的生物学功能。 1． 了解 T 细胞、B 细胞来源、分化与分布；细胞因子的共同特点。 教学内容： 1．基本概念 （15 分钟） 2．免疫细胞的种类、特点、功能 （55 分钟） 3．细胞因子概念和种类 （15 分钟） 教学方法：启发式教学 教具：多媒体、胶片等 教学重点，难点： 1．TC、BC 的特性及免疫功能；NK 细胞的特性及免疫功能 2．细胞因子概念和种类； 教研室审阅意见 安排合理，同意实施。 姜凤良 （教研室主任签名） 年 月 日
基本概念:免疫细胞、抗原特异性淋巴细胞、抗原递呈细胞 2.T细胞和B细胞的主要表面标志比较 3.T细胞的亚群及功能 小结4.T细胞和B细胞的功能 (5分钟)5.NK细胞的特性和免疫功能 6.单核吞噬细胞的特性和免疫功能 7.细胞因子的概念、分类及主要作用 1.解释名词: 免疫细胞抗原特异性淋巴细胞抗原递呈细胞细胞因子 比较T细胞和B细胞的主要表面标志有何不同? 复习思考题|3.比较三群杀伤细胞(T、NK、LAK)作用特点 作业题4.简述T细胞的亚群及功能 5.简述T细胞和B细胞的功能 6.简述单核吞噬细胞的免疫功能 7.简述细胞因子的分类及主要作用 教学后记 第五章免疫系统 概述 机体免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成。 中枢免疫器官「骨髓 器官 胸腺 外周免疫器官「淋巴结 脾脏 粘膜相关淋巴组织 造血干细胞 T淋巴细胞 淋巴细胞 B淋巴细胞 第三群淋巴细胞(NK细胞、LAK细胞等)
小 结 （5 分钟） 1．基本概念：免疫细胞、抗原特异性淋巴细胞、抗原递呈细胞； 2．T 细胞和 B 细胞的主要表面标志比较 3．T 细胞的亚群及功能 4．T 细胞和 B 细胞的功能 5．NK 细胞的特性和免疫功能 6．单核吞噬细胞的特性和免疫功能 7．细胞因子的概念、分类及主要作用 复习思考题 作业题 1． 解释名词： 免疫细胞 抗原特异性淋巴细胞 抗原递呈细胞 细胞因子 2．比较 T 细胞和 B 细胞的主要表面标志有何不同？ 3．比较三群杀伤细胞（TC、NK、LAK）作用特点 4．简述 T 细胞的亚群及功能 5．简述 T 细胞和 B 细胞的功能 6．简述单核吞噬细胞的免疫功能 7．简述细胞因子的分类及主要作用 教学后记 第五章 免疫系统 概 述 机体免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成。 中枢免疫器官 骨髓 免疫器官 胸腺 外周免疫器官 淋巴结 脾脏 粘膜相关淋巴组织 造血干细胞 T 淋巴细胞 淋巴细胞 B 淋巴细胞 第三群淋巴细胞（NK 细胞、LAK 细胞等）
免疫细胞 单核吞噬细胞 树突状细胞 抗原呈递细胞并指样细胞 朗格汉斯细胞 B细胞 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 其他免疫细胞嗜碱性粒细胞、肥大细胞 红细胞 免疫球蛋白抗体 免疫分子补体系统 细胞因子 膜分子(CD分子、MHC分子等) 第一节免疫器官 中枢免疫器官 中枢免疫器官是免疫细胞发生、分化成熟的场所。 (一)胸腺(th 1.结构 被膜 皮质「浅皮质 实质 皮质 髓质 2.主要功能:是T淋巴细胞分化成熟的场所。 (二)骨髓( bone marrow) 主要功能:造血器官 是B淋巴细胞分化成熟的场所 (三)法氏囊( bursa of fabricius)又称腔上囊,是禽类动物B细胞分化成熟的场所。 二、外周免疫器官 (一)淋巴结( lymphoid node 1.结构及细胞组成 被膜 皮质厂浅皮质区:B细胞定居场所 实质 深皮质区:T细胞定居场所 髓质了髓索:B细胞、巨噬细胞 髓窦 高内皮静肘 边绿窦 皮质区 胶原性被膜 副皮质区 暗质区 初级淋巴滤泡 级淋巴滤 多计链
免疫细胞 单核吞噬细胞 树突状细胞 抗原呈递细胞 并指样细胞 朗格汉斯细胞 B 细胞 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 其他免疫细胞 嗜碱性粒细胞、肥大细胞 红细胞 免疫球蛋白/抗体 免疫分子 补体系统 细胞因子 膜分子（CD 分子、MHC 分子等） 第一节 免疫器官 一、中枢免疫器官 中枢免疫器官是免疫细胞发生、分化成熟的场所。 （一）胸腺（thymus） 1．结构 被膜 皮质 浅皮质 实质 深皮质 髓质 2．主要功能：是 T 淋巴细胞分化成熟的场所。 （二）骨髓（bone marrow） 主要功能：造血器官； 是 B 淋巴细胞分化成熟的场所； （三）法氏囊（bursa of Fabricius）又称腔上囊，是禽类动物 B 细胞分化成熟的场所。 二、外周免疫器官 （一）淋巴结（lymphoid node） 1． 结构及细胞组成 被膜 皮质 浅皮质区：B 细胞定居场所 实质 深皮质区：T 细胞定居场所 髓质 髓索：B 细胞、巨噬细胞 髓窦
淋巴结的结构示意图 2.主要功能 (1)过滤淋巴液 (1)是T细胞和B细胞定居和产生免疫应答的场所 (1)参与淋巴细胞再循环 淋巴细胞再循环模式图 (二)脾脏( spleen) 1.结构及细胞组成 被膜 白髓∫中央动脉周围淋巴鞘:T细胞定居场所 实质 林巴滤泡:B细胞定居场所 红髓了髓索:B细胞、巨噬细胞等 髓窦 小梁动脉 白奶 边缘塞
淋巴结的结构示意图 2． 主要功能 （1） 过滤淋巴液 （1） 是 T 细胞和 B 细胞定居和产生免疫应答的场所 （1） 参与淋巴细胞再循环 淋巴细胞再循环模式图 （二）脾脏（spleen） 1． 结构及细胞组成 被膜 白髓 中央动脉周围淋巴鞘：T 细胞定居场所 实质 淋巴滤泡：B 细胞定居场所 红髓 髓索：B 细胞、巨噬细胞等 髓窦
脾脏结构示意图 2.主要功能 1)过滤血液 (2)是T细胞和B细胞定居和产生免疫应答的场所 (3)参与淋巴细胞再循环 (1)贮血、造血 (三)粘膜相关淋巴组织 扁桃体、肠系膜淋巴结、集合淋巴结、阑尾等。 消化 生发中 粘蘖层 日细胞区 枯膜下层 消化道集合淋巴滤泡 第二节免疫细胞 概述 (一)基本概念 1.免疫细胞 参与免疫应答和与免疫应答有关的细胞及其前体细胞,主要包括淋 巴细胞、单核吞噬细胞、抗原呈递细朐等 淋巴细胞(T、B细胞 树突状细胞 单核细胞/巨噬细胞 中性粒细胞 嗜酸性粒组胞嗜碳性粒细胞大细胞红细胞血小板 免疫细胞的种类 2.免疫活性细胞(抗原特异性淋巴细胞)一一在抗原刺激下能活化、增殖与分化,并 能产生特异性免疫应答的细胞,包括T细胞和B细胞 3.抗原呈递细胞(APC)—一能摄取、加工、处理抗原,并能将抗原信息呈递给淋巴 细胞启动特异性免疫应答的细胞,如巨噬细胞、树突状细胞、B细胞等。 □树突状胞0OJ[巨雄)[胞
脾脏结构示意图 2． 主要功能 （1） 过滤血液 （2） 是 T 细胞和 B 细胞定居和产生免疫应答的场所 （3） 参与淋巴细胞再循环 （1） 贮血、造血 （三）粘膜相关淋巴组织 扁桃体、肠系膜淋巴结、集合淋巴结、阑尾等。 消化道集合淋巴滤泡 第二节 免疫细胞 一、概述 （一）基本概念： 1．免疫细胞——凡参与免疫应答和与免疫应答有关的细胞及其前体细胞，主要包括淋 巴细胞、单核吞噬细胞、抗原呈递细胞等。 免疫细胞的种类 2．免疫活性细胞（抗原特异性淋巴细胞）——在抗原刺激下能活化、增殖与分化，并 能产生特异性免疫应答的细胞，包括 T 细胞和 B 细胞。 3． 抗原呈递细胞（APC）——能摄取、加工、处理抗原，并能将抗原信息呈递给淋巴 细胞启动特异性免疫应答的细胞，如巨噬细胞、树突状细胞、B 细胞等
抗原提呈细胞(染色,LM) (二)兔疫细胞的特点 1.分化抗原 分化抗原是指血细胞在分化成熟为不同谱系、分化的不同阶段及细胞活化过程中,出现 和消失的细胞表面标记分子 CD(分化群, cluster of differentiation):应用以单克隆抗体鉴定为主的方法,将来自不 同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原称CD,如CD2、CD3、CD4、CD8等 2.有多种受体 3.活化后可产生多种细胞因子 淋巴细胞 T淋巴细胞 B淋巴细胞 第三群淋巴细胞(NK细胞、LAK细胞等) (一)T淋巴细胞( thymus dependent lymphocyte,胸腺依赖淋巴细胞) 1.来源、分化与分布 造血干细胞 淋巴样干细胞 始祖T细胞 胸腺内 早期发育阶段 阳性选择阶段 阴性选择阶段 CD4+ CD4+或CD4 CD4+或CD CD8 CD8 CD8 CD8CD8 (双阴)(双阳) (单阳) (单阳) 外周血液循环 淋巴细胞 再循环 外周免疫器官 *阳性选择: 在胸腺深皮质区,CD4+、CD8+双阳性细胞与胸腺皮质上皮细胞表面MHC-I类分子或
抗原提呈细胞（染色，LM） （二）免疫细胞的特点 1． 分化抗原 分化抗原是指血细胞在分化成熟为不同谱系、分化的不同阶段及细胞活化过程中，出现 和消失的细胞表面标记分子。 CD（分化群，cluster of differentiation）：应用以单克隆抗体鉴定为主的方法，将来自不 同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原称 CD，如 CD2、CD3、CD4、CD8 等。 2． 有多种受体 3． 活化后可产生多种细胞因子 二、淋巴细胞 T 淋巴细胞 B 淋巴细胞 第三群淋巴细胞（NK 细胞、LAK 细胞等） （一）T 淋巴细胞(thymus dependent lymphocyte，胸腺依赖淋巴细胞) 1． 来源、分化与分布 造血干细胞 ↓ 淋巴样干细胞 ↓ 始祖 T 细胞 ↓ ↓ 外周血液循环 淋巴细胞 再循环 外周免疫器官 *阳性选择： 在胸腺深皮质区，CD4+、、CD8+双阳性细胞与胸腺皮质上皮细胞表面 MHC-Ⅰ类分子或 胸 腺 内 早期发育阶段 阳性选择阶段 阴性选择阶段 CD4— CD4+ CD4+ 或 CD4— CD4+或 CD4— CD8— CD8+ CD8— CD8+ CD8— CD8+ （双阴） （双阳） （单阳） （单阳）
MHC-Ⅱ类分子发生有效结合时,该细胞就被选择而继续分化,发育为CD4+或CD8+的单 阳性细胞:不能有效结合的细胞则发生凋亡。 意义:获得了对自身主要组织相容性抗原(MHC-I类分子或MHC-Ⅱ类分子)的识别 能力。 *阴性选择: 在胸腺皮质和髓质交界处,自身反应性T细胞(CD4+或CD8的单阳性细胞)与巨噬 细胞或树突状细胞表面呈递出来的自身抗原肽-MHC-Ⅱ类或MHC-I类分子结合,则该细 胞发生凋亡或功能丧失 意义:清除了自身反应性T细胞,形成自身耐受现象。 期性选择(获得自身耐受性 图,不结合者发生亡 生台日分数全 /→ 度螺 FH.CD4"CDe- co4 cD8 cD4'cD8 T细胞在胸腺中的阳性选择和阴性选择示意图 2.T细胞的表面标志(包括表面受体和表面抗原) (1)抗原识别受体(TCR) 组成TCR的多肽链有α、β、Y、δ四种,约95%的T细胞为 TRAp异二聚体; 约5%的T细胞为TCRy6异二聚体 作用:特异性识别抗原 (2)促分裂原受体 植物血凝素受体(PHA-R) *刀豆蛋白A受体(Con-A-R) 意义:可接受相应促分裂原刺激,发生有丝分裂,T淋巴细胞可转化为淋巴母细 胞,故临床检验中常用于淋巴细胞转化试验。 (3)白细胞分化抗原(CD分子) CD3分子:为信号转导分子。与TCR非共价结合形成 TCR-CD3复合物 ITA CD3
MHC-Ⅱ类分子发生有效结合时，该细胞就被选择而继续分化，发育为 CD4+、或 CD8+的单 阳性细胞；不能有效结合的细胞则发生凋亡。 意义：获得了对自身主要组织相容性抗原（MHC-Ⅰ类分子或 MHC-Ⅱ类分子）的识别 能力。 *阴性选择： 在胸腺皮质和髓质交界处，自身反应性 T 细胞（CD4+、或 CD8+的单阳性细胞）与巨噬 细胞或树突状细胞表面呈递出来的自身抗原肽- MHC-Ⅱ类或 MHC-Ⅰ类分子结合，则该细 胞发生凋亡或功能丧失。 意义：清除了自身反应性 T 细胞，形成自身耐受现象。 2．T 细胞的表面标志（包括表面受体和表面抗原） （1）抗原识别受体（TCR） 组成 TCR 的多肽链有、、、 四种，约 95%的 T 细胞为 TCR异二聚体； 约 5%的 T 细胞为 TCR 异二聚体。 作用：特异性识别抗原。 （2）促分裂原受体 *植物血凝素受体（PHA-R） *刀豆蛋白 A 受体（Con-A-R） 意义：可接受相应促分裂原刺激，发生有丝分裂，T 淋巴细胞可转化为淋巴母细 胞，故临床检验中常用于淋巴细胞转化试验。 （3）白细胞分化抗原（CD 分子） *CD3 分子：为信号转导分子。与 TCR 非共价结合形成 TCR-CD3 复合物
TCR-CD3复合物结构式示意图 *CD4CD8分子:是MHC-Ⅱ类或MHC-I类分子的受体。使T细胞识别自身MHC 分子,参与T细胞活化过程。 此外,CD4也是HV的受体,是HIV的易感细胞 CD2分子(即绵羊红细胞受体,E受体):是T细胞表面的粘附分子,参与T细 胞活化过程 *CD28分子:是T细胞第二活化信号产生的重要的协同刺激分子受体,其配体为 B7分子 TCR 园回回回。9 CD58 CD2 TAM 28 CD40L T细胞 与T细胞识别、粘附、活化有关的CD分子 (4)白细胞介素等细胞因子受体:如IL-1R、ⅡL-2R等。 3.T细胞的亚群 THI CD4+T细胞 TH2 T细胞 CD8+T细胞Ts Tc(CTL) 4.T细胞的免疫功能 (1)承担机体的细胞免疫功能(TH1、T) (2)参与免疫调节(Tn2、Ts) (二)B淋巴细胞( bone marrow dependent lymphocyte,骨髓依赖淋巴细胞) 1.来源、分化与分布 造血干细胞 淋巴样干细胞 *始祖B细胞 *前B细胞 *不成熟B细胞 *成熟B细胞
TCR-CD3 复合物结构式示意图 *CD4/CD8 分子：是 MHC-Ⅱ类或 MHC-Ⅰ类分子的受体。使 T 细胞识别自身 MHC 分子，参与 T 细胞活化过程。 此外，CD4 也是 HIV 的受体，是 HIV 的易感细胞。 *CD2 分子（即绵羊红细胞受体，E 受体）：是 T 细胞表面的粘附分子，参与 T 细 胞活化过程。 *CD28 分子：是 T 细胞第二活化信号产生的重要的协同刺激分子受体，其配体为 B7 分子。 （4）白细胞介素等细胞因子受体：如 IL-1R、IL-2R 等。 3．T 细胞的亚群 TH1 CD4+、 T 细胞 TH2 T 细胞 CD8+ T 细胞 TS TC（CTL） 4． T 细胞的免疫功能 （1）承担机体的细胞免疫功能（TH1、TC） （2）参与免疫调节（TH2、TS） （二）B 淋巴细胞(bone marrow dependent lymphocyte,骨髓依赖淋巴细胞) 1． 来源、分化与分布 造血干细胞 ↓ 淋巴样干细胞 ↓ *始祖 B 细胞 ↓ *前 B 细胞 ↓ *不成熟 B 细胞 ↓ *成熟 B 细胞
外周血液循环 淋巴细胞 再循环 外周免疫器官 2.B细胞的表面标志 (1)B细胞抗原识别受体(BCR) 组成:膜表面免疫球蛋白(Smlg), SmIg M、 SmlgD。 作用:特异性识别抗原 b同 传导信号 mgM结构示意图 (2) IgGFc受体(FcγR):具有调节B细胞活化、增殖与分化的作用 (3)补体受体:调节B细胞活化。 (4)促分裂原受体 *脂多糖受体(LPS-R) *葡萄球菌A蛋白受体(SPA-R (5)白细胞介素等细胞因子受体:I-2R、IL-4R等 (6)CD分子:CD19、CD20、CD40等 cD19cD8086 pp CD81 回◇ booboo CD19CD21/CD81 BcR复合物 B细胞 与B细胞识别、粘附、活化有关的CD分子 3.B细胞的功能 (1)参与体液免疫 (2)参与免疫调节 (3)递呈抗原 三)第三群淋巴细胞(NK细胞、LAK细胞等) 1.自然杀伤细胞( natural killer cell NK)
↓ 外周血液循环 淋巴细胞 再循环 外周免疫器官 2． B 细胞的表面标志 （1）B 细胞抗原识别受体（BCR） 组成：膜表面免疫球蛋白（SmIg），SmIg M、SmIgD。 作用：特异性识别抗原。 （2）IgGFc 受体（FcR）：具有调节 B 细胞活化、增殖与分化的作用。 （3）补体受体：调节 B 细胞活化。 （4）促分裂原受体： *脂多糖受体（LPS-R） *葡萄球菌 A 蛋白受体（SPA-R） （5）白细胞介素等细胞因子受体：IL-2R、IL-4R 等。 （6）CD 分子：CD19、CD20、CD40 等。 3． B 细胞的功能 （1） 参与体液免疫 （2） 参与免疫调节 （3） 递呈抗原 （三）第三群淋巴细胞（NK 细胞、LAK 细胞等） 1． 自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）
(1)功能一一重要的免疫监视细胞 *抗病毒作用:非特异性杀伤病毒感染的靶细胞 *抗肿瘤作用:非特异性杀伤肿瘤细胞 *免疫调节作用 (1)作用特点 *不需要抗原致敏 *直接或依赖抗体杀伤靶细胞(ADCC) 非特异性杀伤 *不受MHC限制 ADCc (antibody dependent cell mediated cytotoxicity 2.淋巴因子活化的杀伤细胞( lymphokine activated killer cell, LAK) IL-2 巴细胞 具有广泛杀伤效应的淋巴细胞 杀伤细胞作用特点比较 三、单核吞噬细胞 (一)表面标志 1. logIc受体(FcγR):参与调理吞噬及ADCC效应 2.补体受体(CR1):C3b受体,参与调理吞噬和免疫粘附作用。 (二)免疫功能 1.吞噬杀伤作用 吞噬细胞 吞噬体 溶酶体酶 吞噬溶酶体 吞噬细胞的吞噬杀伤过程示意图 2.呈递抗原 3.抗肿瘤作用 4.分泌多种生物活性介质,发挥免疫调节等效用 四、其他免疫细胞 第三节细胞因子 、细胞因子的概念 细胞因子( cytokine,CK)指活化的免疫细胞和非免疫细胞合成与分泌的,具有调节细 胞生理功能、介导炎症反应、参与免疫应答和组织修复等多种效应的小分子多肽。 细胞因子的分类(根据功能分类) 1.干扰素( interferon,IFN):IFNa、IFN-B、IFN-y 2.白细胞介素( interleukin,IL):IL-1~Il-18 3.肿瘤坏死因子( tumor necrosis factor,TNF):TNF-a、TNF-B
（1） 功能——重要的免疫监视细胞 *抗病毒作用：非特异性杀伤病毒感染的靶细胞 *抗肿瘤作用：非特异性杀伤肿瘤细胞 *免疫调节作用 （1） 作用特点 *不需要抗原致敏 *直接或依赖抗体杀伤靶细胞（ADCC） *非特异性杀伤 *不受 MHC 限制 ADCC（antibody dependent cell mediated cytotoxicity） 2． 淋巴因子活化的杀伤细胞（lymphokin activated killer cell,LAK） IL-2 淋巴细胞 具有广泛杀伤效应的淋巴细胞 *三群杀伤细胞作用特点比较 三、单核吞噬细胞 （一）表面标志 1． IgGFc 受体（FcR）：参与调理吞噬及 ADCC 效应。 2． 补体受体（CR1）：C3b 受体，参与调理吞噬和免疫粘附作用。 （二）免疫功能 1． 吞噬杀伤作用 吞噬细胞的吞噬杀伤过程示意图 2． 呈递抗原 3． 抗肿瘤作用 4． 分泌多种生物活性介质，发挥免疫调节等效用 四、其他免疫细胞 第三节 细胞因子 一、细胞因子的概念 细胞因子（cytokine,CK）指活化的免疫细胞和非免疫细胞合成与分泌的，具有调节细 胞生理功能、介导炎症反应、参与免疫应答和组织修复等多种效应的小分子多肽。 二、细胞因子的分类（根据功能分类） 1． 干扰素（interferon,IFN）：IFN-、IFN-、IFN- 2． 白细胞介素（interleukin,IL）：IL-1~IL-18 3． 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）：TNF-、TNF-