缺血后处理对大鼠 离体心脏的影响 浙江大学医学院临床医学一系02级02班06组 组长：戴利菊 组员：韩若阔、傅华睿、黄坚成、韩婵娜
缺血后处理对大鼠 离体心脏的影响 浙江大学医学院临床医学一系02级02班06组 组长：戴利菊 组员：韩若阔、傅华睿、黄坚成、韩婵娜
引言 ■组织经历一定时间的缺血后恢复血流供应， 可能出现缺血性损伤进一步加重的现象，被 称为缺血-再灌注损伤(reperfusion injury)。关 于再灌注损伤的发生机制问题，到目前为止， 学说虽多而且有的也颇有说服力，但尚未得 到彻底阐明。 ■具体机制包括：
引言 组织经历一定时间的缺血后恢复血流供应， 可能出现缺血性损伤进一步加重的现象，被 称为缺血-再灌注损伤(reperfusion injury)。关 于再灌注损伤的发生机制问题，到目前为止， 学说虽多而且有的也颇有说服力，但尚未得 到彻底阐明。 具体机制包括：
一、无复流现象 ·心肌细胞肿胀 •血管内皮细胞肿胀 ·心肌细胞收缩 ·微循环堵塞 ■二、钙超载 ·钠的平衡障碍 ·细胞膜通透性增高 ·线粒体受损
一、无复流现象 心肌细胞肿胀 血管内皮细胞肿胀 心肌细胞收缩 微循环堵塞 二、钙超载 钠的平衡障碍 细胞膜通透性增高 线粒体受损
三、白细胞的作用 ·嵌顿、堵塞毛细血管有助于形成无复流现象 ·白细胞可以增加血管通透性水肿组织的含水量与白细胞 密度罩正相关，说朚百细胞可能疫水师。 ·激活中性粒细胞释放溶酶体酶，可以使组织发生蛋白水 解性破坏和液化 ·中性粒细胞可通过产生氧自由基而损伤组织 ·高能磷酸化合物的缺乏 ·缺血心肌的代谢障碍主要表现为对氧的利用能力有限， 有氧代谢严重受损。 ·ATP合成的前体物质（腺苷、肌苷、次黄嘌呤等）在再灌 注时被洗去，使心肌失去再合成高能磷酸化物的物质基
三、白细胞的作用 嵌顿、堵塞毛细血管有助于形成无复流现象。 白细胞可以增加血管通透性水肿组织的含水量与白细胞 密度呈正相关，说明白细胞可能引发水肿。 激活中性粒细胞释放溶酶体酶，可以使组织发生蛋白水 解性破坏和液化 中性粒细胞可通过产生氧自由基而损伤组织。 高能磷酸化合物的缺乏 缺血心肌的代谢障碍主要表现为对氧的利用能力有限， 有氧代谢严重受损。 ATP合成的前体物质（腺苷、肌苷、次黄嘌呤等）在再灌 注时被洗去，使心肌失去再合成高能磷酸化物的物质基 础
■五、自由基的作用 ■自由基作用于膜脂、蛋白质和核酸。 ■缺血一再灌注损伤的机制中的各种学说，无 一不与自由基有关。 ■自由基即使不是缺血一再灌注损伤的唯一发 病因素，至少也是甚为重要的环节
五、自由基的作用 自由基作用于膜脂、蛋白质和核酸。 缺血－再灌注损伤的机制中的各种学说，无 一不与自由基有关。 自由基即使不是缺血－再灌注损伤的唯一发 病因素，至少也是甚为重要的环节
有关研究成果 ■在Med Sci(Paris)2004年五月的 一篇综述中提出：参与缺血后处 理的保护机制的分子有“protein kinase C,PI3-kinase,possibly Akt and ERK1/2
有关研究成果 在Med Sci (Paris) 2004年五月的 一篇综述中提出：参与缺血后处 理的保护机制的分子有 “protein kinase C, PI3-kinase,possibly Akt and ERK1/2 ”
■Tsang A等在2004年8月发表的文章指出， 缺血后处理使Akt、eNOS和p70S6K大 量磷酸化。这个过程可以被LY一或者 Wortmannin阻断。提出缺血后处理激活 PI3K-Akt通路。这条通路被称为“RISK reperfusion injury salvage kinase pathway
Tsang A等在2004年8月发表的文章指出， 缺血后处理使Akt、eNOS和 p70S6K 大 量磷酸化。这个过程可以被LY－或者 Wortmannin阻断。提出缺血后处理激活 PI3K-Akt通路。这条通路被称为“RISK （ reperfusion injury salvage kinase ） pathway
■Yang XM等在2004年9月发表文章，通过对缺 血后处理的研究，发现： ·30s复灌，30s缺血4回合作预处理与后处理都可以 有效改善缺血一再灌注损伤（缺血30min)。同 时作两者效果无叠加。6回合效果无明显提高。 ·加入5-hydroxydecanoate或者glibenclamide:均 可阻断效果。PD98059(一种NO合酶抑制剂) 可取消保护效果。 ■结论：缺血活处理激活ERK产生nitric oxide 打开线粒体钾通道
Yang XM等在2004年9月发表文章，通过对缺 血后处理的研究，发现： 30s复灌，30s缺血4回合作预处理与后处理都可以 有效改善缺血－再灌注损伤（缺血30min）。同 时作两者效果无叠加。6回合效果无明显提高。 加入5-hydroxydecanoate 或者glibenclamide均 可阻断效果。 PD98059（一种NO合酶抑制剂） 可取消保护效果。 结论：缺血活处理激活ERK产生nitric oxide 打开线粒体钾通道
■Chiari PC等在2005年一月发表文章，用 isoflurane吸入作缺血后处理，该方法和短暂 复灌一短暂缺血的保护可叠加，且均可被 wortmannin阻断，用Vestern blotting测得 Akt(PI3K的一个下游分子)高度磷酸化。 ■结论是soflurane作缺血后处理保护激活了 PI3K
Chiari PC等在2005年一月发表文章，用 isoflurane吸入作缺血后处理，该方法和短暂 复灌－短暂缺血的保护可叠加，且均可被 wortmannin阻断，用Western blotting测得 Akt（PI3K的一个下游分子）高度磷酸化。 结论是soflurane作缺血后处理保护激活了 PI3K
实验思路 ■己知： ·1、缺血后处理（恢复灌流后30s夹闭30s灌流4回合）→ 心肌损伤面积减少。Vortmannin(渥曼青霉素)可以抑 制这一过程。（缺血预处理也有类似效果，且两者不叠 加。 ·2、,Vortmannin;是P13K(磷脂酰肌醇(-3)激酶)的专一性 抑制剂。 ·3、SOD在缺血预（后）处理中都有一定效果，且在缺血 预（后）处理中在血清中高表达。 ·4、Akt是PI3K的下游分子。当PI3K活性升高时，，Akt被 大量磷酸化。PI3K-Akt,eNOS,和p70S6K共同组成了 "reperfusion injury salvage kinase (RISK)pathway." 缺血-再灌注损伤的对抗过程中起到了重要作用
实验思路 已知： 1、缺血后处理（恢复灌流后30s夹闭30s灌流4回合）→ 心肌损伤面积减少。 Wortmannin（渥曼青霉素）可以抑 制这一过程。（缺血预处理也有类似效果，且两者不叠 加。） 2、 Wortmannin是PI3K（磷脂酰肌醇(-3)激酶）的专一性 抑制剂。 3、SOD在缺血预（后）处理中都有一定效果，且在缺血 预（后）处理中在血清中高表达。 4、Akt 是PI3K的下游分子。当PI3K活性升高时， Akt被 大量磷酸化。 PI3K-Akt, eNOS, 和 p70S6K 共同组成了 “reperfusion injury salvage kinase (RISK) pathway.”在 缺血-再灌注损伤的对抗过程中起到了重要作用