纳洛酮影响大鼠心脏缺血后处理 保护作用 刘光军胡烨文黄晓洁黄美霞 浙江大学医学院临床一系2班第五组
纳洛酮影响大鼠心脏缺血后处理 保护作用 刘光军 胡烨文 黄晓洁 黄美霞 浙江大学医学院临床一系2班第五组
实验背景 20世纪80年代中期，Mury等提出心肌在 经受多次短暂缺血再灌后，能减少心肌损 伤，且已被很多实验证实。其中很多文献 都证实阿片受体在其中的重要作用
实验背景 20世纪80年代中期，Murry等提出心肌在 经受多次短暂缺血再灌后，能减少心肌损 伤，且已被很多实验证实。其中很多文献 都证实阿片受体在其中的重要作用
阿片受体的机制 阿片受体 PKC Ischemia-induced G蛋白 KATP channels Ca 2overload Myocardial injury HSP70
阿片受体的机制 阿片受体 G蛋白 PKC KATP channels HSP 70 Ca 2+overload Ischemia-induced Myocardial injury
纳洛酮 纳洛酮是一种特异性的阿片受体阻滞剂，但较 大剂量时可对细胞直接作用，产生膜稳定性等 效应，而与阿片受体无关
纳洛酮 纳洛酮是一种特异性的阿片受体阻滞剂,但较 大剂量时可对细胞直接作用,产生膜稳定性等 效应,而与阿片受体无关
实验目的 缺血后处理的保护作用（有OR无） 阿片受体参与保护作用？（用纳洛酮来验证）
实验目的 缺血后处理的保护作用（有 OR 无） 阿片受体参与保护作用？（用纳洛酮来验证）
实验分组 10只/组 ischemia 30min reperfusion 30min Control Postcond Nal Nal+post 6s 6times
实验分组 ischemia 30min reperfusion 30min Control Postcond Nal Nal+post 6s 6times 10 只/组
心脏灌流 Pacemaker Air Trap Krebs Buffer Recorder Pump 围 ooo 国
心脏灌流
心室动力学指标 ±dP/dtmax LVEDP LVDP RPP 压力换能器
心室动力学指标 压力换能器 ±dP/dtmax LVEDP LVDP RPP
酶学指标 乳酸脱氢酶(LDH)的测定： 取缺血前，rep5min,rep10min,rep20min冠脉流出液 基质 加H2050uL 250uL 37 C 15min 每样本两管 37孵育3min 各50μL 加辅酶150uL 37 C 15min 2,4-二硝基 0.4mol/L 苯肼250L NaOH2.5ml 37℃孵育15min 静置3min440nm 测吸光度
酶学指标 乳酸脱氢酶（LDH）的测定： 取缺血前，rep5min，rep10min，rep20min冠脉流出液 每样本两管 各50μL 基质 250μL 37℃孵育3min 加H2O 50μL 37 ℃ 15min 加辅酶I 50μL 37 ℃ 15min 37 ℃孵育15min 2，4-二硝基 苯肼250μL 0.4mol/L NaOH2.5mL 静置3min 440nm 测吸光度
心肌线粒体渗透性转换孔道(MPTP)的开放程度 取沉淀重悬液重悬 心脏剪> 4℃1000g 取上清液4℃ 碎匀浆 离心10min 8000g离心10min >再次4℃8000g 高速离心10min 取沉淀重悬液 200umol/L和 ,中行考马斯亮 肿胀液稀释至 1mmol/1的CaCl2分别 兰蛋白测定法 >0.25gL蛋白→ 作用于线粒体，连续 测定蛋白含量 质浓度 观察在520nm处线 粒体吸光度的变化
心肌线粒体渗透性转换孔道(MPTP)的开放程度 心脏剪 碎匀浆 4 ℃ 1000 g 离心 10 min 取上清液4 ℃ 8000 g离心10 min 取沉淀重悬液重悬 再次4 ℃ 8 000 g 高速离心10 min 取沉淀重悬液 中行考马斯亮 兰蛋白测定法 测定蛋白含量 肿胀液稀释至 0.25 g/L 蛋白 质浓度 200 mol/L 和 1mmol/l的CaCl2分别 作用于线粒体，连续 观察在520 nm处线 粒体吸光度的变化