牛乳美兰还原试验检验方法修订（依据GB/T5409-85) 1原理 牛奶中的微生物分泌出还原酶，使美兰还原而褪色，还原反应的速度和所存在的细菌数 量有关，根据美兰褪色的时间估计牛乳中的细菌总数来评定牛乳的品质。 注：亚甲基蓝的配制： 5ml饱和亚甲基蓝乙醇溶液(0.1g亚甲基蓝溶于30mL30%乙醇溶液，定容至100mL容量 瓶中)加195mL水混匀，稀释好的溶液应在冰箱中保存，且应在一周内用完。 2操作步骤 2.1用灭菌的10mL吸管吸取20mL被检乳样于灭菌试管内。在水浴锅内加热到38℃，用灭菌 的1mL吸管吸取配好的亚甲基兰溶液1mL,加入试管，塞上塞子。 2.2上下倒转试管几次，使其混合均匀。 2.3置于38~40℃水浴内，不同时段看美兰褪色与否并记录时间，根据时间长短，来判定细 菌总数的含量。 3计数： 裉色时间 相当每毫升牛乳中的细菌总数 20分钟 >2×10 20-40分钟 1.0×10-2.0×10 40分钟-1小时 5.0×10-1.0×10 1小时-2小时 4.0×10°-5.0×10 2小时-3小时 3.0×10-4.0×10 3小时-4小时 2.0X10-3.0×10 4小时-5小时 1.0×10-2.0×10 5小时-5.5小时 5.0×10-1.0×10 5.5小时-6.5小时 3.0×10°-5.0×10 6.5小时-7.5小时 1.0×10-3.0×10 >7.5小时 1.0×10 此方法适用于原料乳的验收检验，所以一般观察时间控制在40min之内为宜。 4注意事项： 4.1水浴的水面应不低于试管内乳样高度。 4.2底部或表层余有少许蓝色者也应算其褪色完毕。 4.3严格记录褪色时间