熟火腿储存期中高压处理和抗菌剂生物可降解包装对单核细胞增多性李司特（氏）菌的控制 2.材料与方法 2.1细菌素生产 从肉制品中纯种分离得到的可产生促肠活动素A和B的肠球菌CTC492(Enterococcus faecium CTC492)可在改进后的MRS肉汤培养基上生长。标准的MRS肉汤培养基进行如下改 进：减少葡萄糖到0.5%，增加Tween80到0.75%，不添加浓缩牛肉汁。促肠活动素A和B 可以从在30℃培养15h后的培养物中获得。在培养物中添加300g/L的硫酸铵并在10000g 下离心10min获得菌体细胞.在10000g下离心30min获得蛋白沉淀物并溶解于50m的pH6.0 的磷酸缓冲液中。另外在100℃下热处理10min更有效果。获得的细菌素在-80℃下保存。 2.2细菌素检验 在添加了0.6%酵母提取物的胰蛋白酶大豆肉汤培养基上在30℃下分别培养指示菌株L. monocytogenes CTC1010,CTC1011,and CTC1034一晚。 细菌素活性通过琼脂点样实验进行量化。一个固体培养基由20g/L浓缩牛肉汁，20g/L 葡萄糖和15g/L琼脂组成，用于制备soft TSBYE(琼脂浓度为7.5g/L)培养基，接种20mL 培养一夜的L.monocy togenes混合物。促肠活动素样品用50mMpH6.0的磷酸缓冲液连续 稀释，每个稀释度取10mL样品点样到soft TSBYE培养基菌苔上。平板在30℃下培养一晚。 AU定义为最高稀释度下指示菌苔的生长抑制，而细菌素活性以AU/mL表示。 2.3薄膜制造 薄膜组成液见文献Del Nobile et al.(2003)和Buonocore et al.(2005)进行一些修 改。将溶于蒸馏水的5%(w/v)的褐藻酸(Sigma-A1 drich)溶液在80℃下活化2h。加入甘油 (5%,v/w)作为可塑剂，然后在室温下活化30mi。在测量了薄膜混合液的体积后，加入适 当的经过稀释含有促肠活动素(409,600AU/ml)的原液后获得浓度为2000AU/cm2的活化溶 液。溶液在室温条件下活化直到完全溶解。吸取3L准备好的溶液加入到已经灭过菌的聚苯 乙烯盘子(28cm2)上并在生物安全柜中风干。烘干后，将藻酸盐薄膜沉浸到2%(w/w)氯化 钙溶液中。薄膜的厚度使用Digimatic Micrometer(Mitutoyo,Japan)测量。薄膜厚度取lO 次测量的平均值。薄膜平均厚度在120加减10um。 2.4熟火腿制作 熟火腿采用猪蹄膀肉制作并添加一下成分(g/kg):水115：氯化钠20.7：葡萄糖5.8： 三磷酸钠5.8：carragenate2.3:亚硝酸钠0.1：L-维生素C0.6。猪蹄膀肉在-1℃下用
熟火腿储存期中高压处理和抗菌剂生物可降解包装对单核细胞增多性李司特(氏)菌的控制 2.材料与方法 2.1 细菌素生产 从肉制品中纯种分离得到的可产生促肠活动素 A 和 B 的肠球菌 CTC492（Enterococcus faecium CTC492）可在改进后的 MRS 肉汤培养基上生长。标准的 MRS 肉汤培养基进行如下改 进：减少葡萄糖到 0.5%，增加 Tween 80 到 0.75%，不添加浓缩牛肉汁。促肠活动素 A 和 B 可以从在 30℃培养 15h 后的培养物中获得。在培养物中添加 300g/L 的硫酸铵并在 10000g 下离心10min获得菌体细胞。在10000g下离心30min获得蛋白沉淀物并溶解于50mM的pH 6.0 的磷酸缓冲液中。另外在 100℃下热处理 10min 更有效果。获得的细菌素在-80℃下保存。 2.2 细菌素检验 在添加了 0.6%酵母提取物的胰蛋白酶大豆肉汤培养基上在 30℃下分别培养指示菌株 L. monocytogenes CTC1010,CTC1011, and CTC1034 一晚。 细菌素活性通过琼脂点样实验进行量化。一个固体培养基由 20g/L 浓缩牛肉汁，20g/L 葡萄糖和 15g/L 琼脂组成，用于制备 soft TSBYE（琼脂浓度为 7.5g/L）培养基，接种 20mL 培养一夜的 L. monocytogenes 混合物。促肠活动素样品用 50mM pH6.0 的磷酸缓冲液连续 稀释，每个稀释度取 10mL 样品点样到 soft TSBYE 培养基菌苔上。平板在 30℃下培养一晚。 AU 定义为最高稀释度下指示菌苔的生长抑制，而细菌素活性以 AU/mL 表示。 2.3 薄膜制造 薄膜组成液见文献 Del Nobile et al. (2003)和 Buonocore et al. (2005)进行一些修 改。将溶于蒸馏水的 5%（w/v）的褐藻酸(Sigma-Aldrich)溶液在 80℃下活化 2h。加入甘油 (5%, v/v)作为可塑剂，然后在室温下活化 30min。在测量了薄膜混合液的体积后，加入适 当的经过稀释含有促肠活动素(409,600 AU/ml)的原液后获得浓度为 2000 AU/cm2 的活化溶 液。溶液在室温条件下活化直到完全溶解。吸取 3mL 准备好的溶液加入到已经灭过菌的聚苯 乙烯盘子(28 cm2)上并在生物安全柜中风干。烘干后，将藻酸盐薄膜沉浸到 2% (w/v)氯化 钙溶液中。薄膜的厚度使用 Digimatic Micrometer (Mitutoyo,Japan)测量。薄膜厚度取 10 次测量的平均值。薄膜平均厚度在 120 加减 10um。 2.4 熟火腿制作 熟火腿采用猪蹄膀肉制作并添加一下成分（g/kg)：水 115；氯化钠 20.7；葡萄糖 5.8； 三磷酸钠 5.8；carragenate 2.3；亚硝酸钠 0.1；L-维生素 C 0.6。猪蹄膀肉在-1℃下用
切肉机(Teqmaq,Spain)切成4mm见方大小.用搅拌器(model35P,Tecnotrip S.A.,Terrassa, Spain)搅拌30min将成分搅匀。用填料机(model Hl:5,Tecnotrip)将肉末塞入一个直径90mm 的塑料外套中(Prolan,Proveedora Hipano Holandesa,S.A.,Sant Boi deLlobregat, Spain).产品在蒸汽锅中75℃加热煮熟直到内在温度达到72加减2℃(temperature probe TM 65,Crison Instruments S.A.,Barcelona,.Spain)。熟火腿在1℃下保存24h直到切片前。 2.5样品制备及高压处理 熟火腿在去除塑料外壳后，使用模具切成7mm厚度来适应薄膜尺寸。切片被灌输104 CFU/g单位的三种菌株L.monocytogenes(CTC1010,CTC1011,and CTC1034)的混合物。每株 菌先接种到TSBYE肉汤培养基上在30℃下生长过夜。切片包裹在两片薄膜间抽真空后包裹 在聚酰胺-聚乙烯袋子中(Sacoliva,.Castellardel Valle`s,Spain)。分别准备三组实验： 一组没有薄膜(C):一组有藻酸盐薄膜(AC):一组含有2000AU/cm2单位促肠活动素的藻酸 盐薄膜(AE)。 一半的样品不加压，另一半用HPP加压。加压条件为17℃400MPa,10min。PP是一个 工业静水力学加压单位(Alstom,Nantes,France),其体积为320L,直径为280mm。加压流 动相是水，其上升时间为13.5min,压力释放时间为1.33min,绝热温度为5℃。 2.6冷藏贮存和温度突变处理 HPP样品在1或6℃下储两个月后。经过60天的冷藏贮存，样品进行温度突变处理，维 持样品在室温条件(ca.20℃)下24h,模拟熟火腿上架时低温运输系统的中断。在这90天 中研究L.monocytogenes在6℃下的行为。 2.7L.monocytogenes检验 真空包装熟火腿样品在冷藏贮存期间，在0天（包装后），1天(HPP处理后)，4天，8 天，15天，22天，30天，39天，50天和60天取样。在低温运输系统中断(1℃)和6℃冷 冻保存，熟火腿在77天和90天分别取样。 在每个选定的时间，20g熟火腿被10被稀释在灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW) (AESLaboratoires,.Combourg,France))中。溶液用Masticator(IUL Instruments,.Barcelona,Spain)混匀lmin.经过适当稀释后，涂布在补充有SRO150(Merck) 的Palcam琼脂培养基(Merck,Darmstadt,.Germany)上检验Listeria的生长情况，在30C 下培养72h。为了确定病原菌的存在，均匀混合物涂布在Palcam琼脂培养基上37℃下培养 40h。 三组不同包裹C,AC,AE,温度(1和6℃)和不同处理方式（加压和不加压）分别在各自
切肉机(Teqmaq,Spain)切成4mm见方大小。用搅拌器(model 35P,Tecnotrip S.A., Terrassa, Spain)搅拌 30min 将成分搅匀。用填料机 (model H15,Tecnotrip)将肉末塞入一个直径 90mm 的塑料外套中(Prolan, Proveedora Hipano Holandesa, S.A., Sant Boi deLlobregat, Spain)。产品在蒸汽锅中75℃加热煮熟直到内在温度达到72加减2℃(temperature probe TM 65, Crison Instruments S.A.,Barcelona, Spain)。熟火腿在 1℃下保存 24h 直到切片前。 2.5 样品制备及高压处理 熟火腿在去除塑料外壳后，使用模具切成 7mm 厚度来适应薄膜尺寸。切片被灌输 104 CFU/g 单位的三种菌株 L.monocytogenes (CTC1010,CTC1011, and CTC1034)的混合物。每株 菌先接种到 TSBYE 肉汤培养基上在 30℃下生长过夜。切片包裹在两片薄膜间抽真空后包裹 在聚酰胺-聚乙烯袋子中(Sacoliva, Castellardel Valle` s, Spain)。分别准备三组实验： 一组没有薄膜(C)；一组有藻酸盐薄膜(AC)；一组含有 2000 AU/cm2 单位促肠活动素的藻酸 盐薄膜(AE)。 一半的样品不加压，另一半用 HPP 加压。加压条件为 17℃400MPa，10min。HPP 是一个 工业静水力学加压单位(Alstom, Nantes,France)，其体积为 320L，直径为 280mm。加压流 动相是水，其上升时间为 13.5min，压力释放时间为 1.33min，绝热温度为 5℃。 2.6 冷藏贮存和温度突变处理 HPP 样品在 1 或 6℃下储两个月后。经过 60 天的冷藏贮存，样品进行温度突变处理，维 持样品在室温条件(ca. 20℃)下 24h，模拟熟火腿上架时低温运输系统的中断。在这 90 天 中研究 L.monocytogenes 在 6℃下的行为。 2.7 L. monocytogenes 检验 真空包装熟火腿样品在冷藏贮存期间，在 0 天（包装后），1 天（HPP 处理后），4 天, 8 天, 15 天, 22 天, 30 天, 39 天, 50 天和 60 天取样。在低温运输系统中断（1℃）和 6℃冷 冻保存，熟火腿在 77 天和 90 天分别取样。 在每个选定的时间，20g 熟火腿被 10 被稀释在灭过菌的缓冲蛋白胨水（BPW） (AESLaboratoires, Combourg, France)中。溶液用 Masticator (IUL Instruments,Barcelona, Spain)混匀 1min。经过适当稀释后，涂布在补充有 SR0150 (Merck) 的 Palcam 琼脂培养基(Merck, Darmstadt, Germany)上检验 Listeria 的生长情况，在 30℃ 下培养 72h。为了确定病原菌的存在，均匀混合物涂布在 Palcam 琼脂培养基上 37℃下培养 40h。 三组不同包裹 C,AC,AE,温度（1 和 6℃）和不同处理方式（加压和不加压）分别在各自
的取样时间取样。 2.8统计分析 数据使用一般线性模型运用SAS统计软件包程序(SASr System for Windows,Release 8.2,SAS Institute,Cary,NC,USA)进行方差分析。 模型包括组别，储存温度，储存时间和作为固定效应的交互作用。不同效应间的差异用 Tukey test(Po0.05)方法进行评定。 在整个的储存过程中，藻酸盐组和对照组里，并没有发现在L.monocytogenes的数量上 有显著区别（没有数据显示）。这些结果表明在有藻酸盐薄膜的食品包装并没有 L.monocytogenesi产生行为的影响。包装有藻酸盐对照薄膜的烹饪过的火腿显示 L.monocytogenes在6℃时快速生长并在22天里达到最大生长量(8.61 og CFU,/g)。(图1)。在 6℃下L.monocytogenes在烹饪过的火腿中呈指数增长的能力说明，为了防止 L.monocytogenes在污染过的食品中生长，在冷藏中额外使用阻碍物是有必要的。 抗菌处理过的包装是一种积极的有前途的包装手段，尤其在肉食生产中。而且，以防止 食品为媒介的病原体，用藻酸盐薄膜含有的细菌素的效率最近有所证明。在最近的地研究中， 有藻酸盐薄膜含有2000AU/cm2促肠活动素的真空包装在6℃显著的延缓了L.monocytogenes 的生长.抗菌处理的包装在储存的头几天有能力阻止病原体的生长，延长了L.monocy togenes 的延缓期直到第8天。尽管有进一步的生长，但是在有促肠活动素的培养基里，15天病原体 并没有超过接种量的水平。这个发现与先前在污染有L.monocytogenes包装有含有2000 AU/cm2促肠活动素藻酸盐薄膜的烹饪过的火腿中的发现是一致的。在促肠活动素处理的培养 基中细菌的个数是1.6-3.0的1og,在30日内少于藻酸盐处理的培养基个数：此后，两种培养 基中在并没有明显的区别。在有促肠活动素的培养基中，L.monocytogenes在第39天达到停 滞期(8.31 og CFU/g)(图1)。因此，抗菌处理的包装（藻酸盐处理的含有2000AU/cm2)的火 腿片储藏在6℃时明显的延缓了L.monocytogenes的生长。尽管延缓，但是生长还是明显，说 明添加额外阻碍物的必要性，比如非热处理的应用。非热处理技术，比如Y射线，己经和抗 菌处理一起应用，作为一种控制L.monocytogenes的生长的方法。据我们所知，这是有关高 压处理技术和抗菌包装共同处理的第一篇报导。 对照组样品重，高压处理过程(400MPa,10min,17℃)导致L.monocytogenes,3.41og units 菌落的迅速下降。经过高压处理后，在6℃藻酸盐处理的培养基，获得的菌落水平保持
的取样时间取样。 2.8 统计分析 数据使用一般线性模型运用 SAS 统计软件包程序(SASr System for Windows, Release 8.2, SAS Institute, Cary, NC, USA)进行方差分析。 模型包括组别，储存温度，储存时间和作为固定效应的交互作用。不同效应间的差异用 Tukey test (Po0.05)方法进行评定。 在整个的储存过程中，藻酸盐组和对照组里，并没有发现在L. monocytogenes的数量上 有显著区别（没有数据显示）。这些结果表明在有藻酸盐薄膜的食品包装并没有 L.monocytogenes产生行为的影响。包装有藻酸盐对照薄膜的烹饪过的火腿显示 L.monocytogenes在6℃时快速生长并在22天里达到最大生长量(8.6 log CFU/g)。（图1）。在 6℃下L.monocytogenes在烹饪过的火腿中呈指数增长的能力说明，为了防止 L.monocytogenes在污染过的食品中生长，在冷藏中额外使用阻碍物是有必要的。 抗菌处理过的包装是一种积极的有前途的包装手段，尤其在肉食生产中。而且，以防止 食品为媒介的病原体，用藻酸盐薄膜含有的细菌素的效率最近有所证明。在最近的地研究中， 有藻酸盐薄膜含有2000 AU/cm2促肠活动素的真空包装在6℃显著的延缓了L.monocytogenes 的生长。抗菌处理的包装在储存的头几天有能力阻止病原体的生长，延长了L.monocytogenes 的延缓期直到第8天。尽管有进一步的生长，但是在有促肠活动素的培养基里，15天病原体 并没有超过接种量的水平。这个发现与先前在污染有L.monocytogenes包装有含有2000 AU/cm2促肠活动素藻酸盐薄膜的烹饪过的火腿中的发现是一致的。在促肠活动素处理的培养 基中细菌的个数是1.6-3.0的log，在30日内少于藻酸盐处理的培养基个数；此后，两种培养 基中在并没有明显的区别。在有促肠活动素的培养基中，L.monocytogenes在第39天达到停 滞期(8.3 log CFU/g)（图1）。因此，抗菌处理的包装(藻酸盐处理的含有2000 AU/cm2)的火 腿片储藏在6℃时明显的延缓了L.monocytogenes的生长。尽管延缓，但是生长还是明显，说 明添加额外阻碍物的必要性，比如非热处理的应用。非热处理技术，比如γ射线，已经和抗 菌处理一起应用，作为一种控制L.monocytogenes的生长的方法。据我们所知，这是有关高 压处理技术和抗菌包装共同处理的第一篇报导。 对照组样品重，高压处理过程(400 MPa, 10 min, 17℃)导致L.monocytogenes，3.4 log units. 菌落的迅速下降。经过高压处理后，在6℃藻酸盐处理的培养基，获得的菌落水平保持
了8天。（图1）直到第8天，在包装在对照薄膜处理的经过加压处理和没有加压处理的火腿样 品里发现有3.7-4.410g的数量差异。后来经过加压处理的藻酸盐培养基中的储藏允许 L.monocytogenes的生长，尽管如此，22天后没有获得接种水平的增加。经过这段期间，加 压处理的藻酸盐培养基同没有经过加压处理的有促肠活动素处理的藻酸盐培养基相比，显示 出更少的L.monocytogenes数量。这两个技术的比较说明，在6℃时，在控制L.monocytogenes 生长方面，加压处理比抗菌包装更有效。尽管它能加强病原体的控制，但是单独高压处理过 程并不能阻止病原体的生长（图1）。 两种技术综合使用的保藏总体来说加强了抗菌的效果，有延长的样品货架时间作为结 果。图1显示抗菌包装和高压处理过程（加压处理的促肠活动素培养基）的综合利用有很好 的表现。经过加压处理后，在促肠活动素培养基中的菌落水平(0.61ogCU/g)被保持，使 L.monocytogenes的延缓期延长，直到22天。此后，病原体的数量有少量增多，达到1.4-1.8 1ogCU/g的数量，一直保持到储存的结束(60天)。经过两个月的储藏，病原体的数量是 6.8-7.31og,与其它培养基相比加压的促肠活动素培养基更低。 到储藏的第60天，加压处理和非加压处理的藻酸盐培养基，还有非加压处理的有促肠活 动素的培养基己经达到了停滞期(8.2-8.81ogC℉U/g)。经过高压处理和抗菌包装综合处理 的包装在后来的储藏中的表现被评测。表1显示在6℃保藏的经过烹饪的火腿片到90天的菌落 数量。在后来的储藏中，加压处理的有促肠活动素的培养基不仅保持而且减少了菌落的数量。 更值得注意的是，经过3个月的在6℃的保藏后，包装在有藻酸盐薄膜中，有2000AU/cm2抗 菌素的烹饪过的火腿片的加压过程，不仅阻止了L.monocytogenes的生长，而且减少了菌落 的数量到达观测极限(5CFU/g)。 除此之外，尽管L.monocytogenes在冷藏储藏中有能力生长，但是温度的控制证实在减 少病原体危险中的必要性。在1℃冷藏的包装在对照薄膜的烹饪过的火腿片显示39天没有 L.monocytogenes的生长（图2）。结果与先前在冷藏在1℃有效控制烹饪过的火腿片的有效控 制病原体生长的结论相一致。图2显示在后来的储藏中产品接种水平的1.41ogCU/g增加。 在储藏的最后，在1℃储藏的藻酸盐培养基菌落的数量与在6℃相比少了3.410g。 在1℃条件下，经过储藏，用包含促肠活动素的薄膜包裹的熟火腿(AE1ot)比对照 组得到更少的数量(P<0.05)。图2显示从第30日直到第39日，L.monocytogenes的数量 比接种水平低一个对数值，并且这一数值在储藏结束时恢复到初始值。因此，因此，抗微生 物包装作为一项降低冷藏温度的附加的障碍对控制L.monocytogenes在60天的储藏期内的
了8天。（图1）直到第8天，在包装在对照薄膜处理的经过加压处理和没有加压处理的火腿样 品里发现有3.7-4.4log的数量差异。后来经过加压处理的藻酸盐培养基中的储藏允许 L.monocytogenes的生长，尽管如此，22天后没有获得接种水平的增加。经过这段期间，加 压处理的藻酸盐培养基同没有经过加压处理的有促肠活动素处理的藻酸盐培养基相比，显示 出更少的L.monocytogenes数量。这两个技术的比较说明，在6℃时，在控制L.monocytogenes 生长方面，加压处理比抗菌包装更有效。尽管它能加强病原体的控制，但是单独高压处理过 程并不能阻止病原体的生长（图1）。 两种技术综合使用的保藏总体来说加强了抗菌的效果，有延长的样品货架时间作为结 果。图1显示抗菌包装和高压处理过程（加压处理的促肠活动素培养基）的综合利用有很好 的表现。经过加压处理后，在促肠活动素培养基中的菌落水平(0.6 log CFU/g)被保持，使 L.monocytogenes的延缓期延长，直到22天。此后，病原体的数量有少量增多，达到1.4–1.8 log CFU/g的数量，一直保持到储存的结束（60天）。经过两个月的储藏，病原体的数量是 6.8-7.3log，与其它培养基相比加压的促肠活动素培养基更低。 到储藏的第60天，加压处理和非加压处理的藻酸盐培养基，还有非加压处理的有促肠活 动素的培养基已经达到了停滞期(8.2–8.8 log CFU/g)。经过高压处理和抗菌包装综合处理 的包装在后来的储藏中的表现被评测。表1显示在6℃保藏的经过烹饪的火腿片到90天的菌落 数量。在后来的储藏中，加压处理的有促肠活动素的培养基不仅保持而且减少了菌落的数量。 更值得注意的是，经过3个月的在6℃的保藏后，包装在有藻酸盐薄膜中，有2000 AU/cm2抗 菌素的烹饪过的火腿片的加压过程，不仅阻止了L.monocytogenes的生长，而且减少了菌落 的数量到达观测极限(5 CFU/g)。 除此之外，尽管L.monocytogenes在冷藏储藏中有能力生长，但是温度的控制证实在减 少病原体危险中的必要性。在1℃冷藏的包装在对照薄膜的烹饪过的火腿片显示39天没有 L.monocytogenes的生长（图2）。结果与先前在冷藏在1℃有效控制烹饪过的火腿片的有效控 制病原体生长的结论相一致。图2显示在后来的储藏中产品接种水平的1.4 log CFU/g增加。 在储藏的最后，在1℃储藏的藻酸盐培养基菌落的数量与在6℃相比少了3.4log。 在 1℃条件下，经过储藏，用包含促肠活动素 的薄膜包裹的熟火腿（AE lot）比对照 组得到更少的数量（P<0.05）。图 2 显示从第 30 日直到第 39 日，L.monocytogenes 的数量 比接种水平低一个对数值，并且这一数值在储藏结束时恢复到初始值。因此，因此，抗微生 物包装作为一项降低冷藏温度的附加的障碍对控制 L.monocytogenes 在 60 天的储藏期内的
生长是有效的。应当注意冷藏温度的重要性：1℃储藏是避免L.monocytogenes生长的关键 因素。然而，商业和家用冰箱的温度可能会以高于(1℃)运行，而且应用附加技术，例如 HPP和抗微生物包装将保证被污染食物在其销售期的安全性。高压处理并且以1℃冷藏的AC lot有效的减少L.monocytogenes数量至检测极限，并能够维持这一水平至储藏结束。类似 的，在整个储藏期内，经过高压处理的储藏于1℃的AE1ot在六十天内表现出大约0.61og CFU/g的水平（图2）。在任何已研究的lots中均未发现不存在L.monocytogenes的情况发 生。在1℃条件下，没有观察到压力处理过的AC和AE1ots之间存在差异(P<0.05),表明 在较低的储藏温度下，抗菌包装并没有给予对L.monocytogenes的，相对于压力处理过的样 品的附加防护。 为了评估这两种技术的有效性，在两个月的储藏期后实验者执行了一项不遵守规程的温 度过程。在经历了24小时的室温处理后，温度又重新被调整为1℃直至第90日。在连续冷 藏过程打断后，第77天，在对照lot中L.monocytogenes数量上升至31ogC℉U/g,达到 稳定期（表1）。然而在温度违规处理后，抗微生物包装允许一个较低时平的增长(2.11og C℉U/g)。用包含有促肠活动素的薄膜包裹处理。减慢了病原体的生长速率，并且显示出比对 照组低一个对数值的最终数量。表1表示了温度违规处理对压力处理过的AC样品最重要的 影响。在连续冷藏过程打断后，细菌数从0.6增长到第77日的6.61ogC℉U/g,并在第90 日达到最大值(8.511ogC℉U/g)这些结果表明了被压力处理损害的的细胞在适宜生长条件 下恢复正常的能力。而作为对比，冷冻过程打断后（第77天），在压力处理过的AE1ot中 没有观察到L.monocytogenes的生长。更长时间的，经历过温度违规处理的，在I℃条件下 的产品储藏过程导致轻微的增长，至1.71ogC℉U/g.因此抗微生物包装和HPP技术的结合是 一项不但能够控制并减少L.monocytogenes的数量，并且能够克服温度异常的方法。 PP是一项己经应用于可购买于美国和西班牙市场的切片熟火腿的技术。在己研究过的 方法中，与和RTE食品有关的能导致L.monocytogenes生长并与(EC)2073/2005规章相一致 的HPP和1℃储藏技术的结合技术，至销售期结束，可将细菌数限制在100CPU/g。然而， 在更高的冷藏温度(6℃)下，含促肠活动素的藻酸盐薄膜的抗微生物包装对维持微生物标 准是必要的。 鸣谢 本研究受以下支持：国家食品与农业研究研究所(INIA)项目RTAO4-O10,战略项目 CeRTA:2OO5-O6和FEDER资金Begonya Marcos是一名由INIA提供的一项医学奖学金的接收 者。作者感谢Raquel Rubio和Quim Arbone's的技术支持
生长是有效的。应当注意冷藏温度的重要性：1℃储藏是避免 L.monocytogenes 生长的关键 因素。然而，商业和家用冰箱的温度可能会以高于（1℃）运行，而且应用附加技术，例如 HPP 和抗微生物包装将保证被污染食物在其销售期的安全性。高压处理并且以 1℃冷藏的 AC lot 有效的减少 L.monocytogenes 数量至检测极限，并能够维持这一水平至储藏结束。类似 的，在整个储藏期内，经过高压处理的储藏于 1℃的 AE lot 在六十天内表现出大约 0.6 log CFU/g 的水平（图 2）。在任何已研究的 lots 中均未发现不存在 L.monocytogenes 的情况发 生。在 1℃条件下，没有观察到压力处理过的 AC 和 AE lots 之间存在差异（P<0.05），表明 在较低的储藏温度下，抗菌包装并没有给予对 L.monocytogenes 的，相对于压力处理过的样 品的附加防护。 为了评估这两种技术的有效性，在两个月的储藏期后实验者执行了一项不遵守规程的温 度过程。在经历了 24 小时的室温处理后，温度又重新被调整为 1℃直至第 90 日。在连续冷 藏过程打断后，第 77 天，在对照 lot 中 L.monocytogenes 数量上升至 3 log CFU/g，达到 稳定期( 表 1)。然而在温度违规处理后，抗微生物包装允许一个较低时平的增长（2.1log CFU/g）。用包含有促肠活动素的薄膜包裹处理。减慢了病原体的生长速率，并且显示出比对 照组低一个对数值的最终数量。表 1 表示了温度违规处理对压力处理过的 AC 样品最重要的 影响。在连续冷藏过程打断后，细菌数从 0.6 增长到第 77 日的 6.6log CFU/g，并在第 90 日达到最大值（8.51log CFU/g）这些结果表明了被压力处理损害的的细胞在适宜生长条件 下恢复正常的能力。而作为对比，冷冻过程打断后（第 77 天），在压力处理过的 AE lot 中 没有观察到 L. monocytogenes 的生长。更长时间的,经历过温度违规处理的，在 1℃条件下 的产品储藏过程导致轻微的增长，至 1.7logCFU/g.因此抗微生物包装和 HPP 技术的结合是 一项不但能够控制并减少 L.monocytogenes 的数量，并且能够克服温度异常的方法。 HPP 是一项已经应用于可购买于美国和西班牙市场的切片熟火腿的技术。在已研究过的 方法中，与和 RTE 食品有关的能导致 L.monocytogenes 生长并与(EC)2073/2005 规章相一致 的 HPP 和 1℃ 储藏技术的结合技术，至销售期结束，可将细菌数限制在 100CPU/g。然而， 在更高的冷藏温度（6℃）下，含促肠活动素的藻酸盐薄膜的抗微生物包装对维持微生物标 准是必要的。 鸣谢 本研究受以下支持：国家食品与农业研究研究所（INIA）项目 RTA04-010,战略项目 CeRTA2005-06 和 FEDER 资金 Begonya Marcos 是一名由 INIA 提供的一项医学奖学金的接收 者。作者感谢 Raquel Rubio 和 Quim Arbone′s 的技术支持