多克隆抗体的制备及 抗体效价测定
多克隆抗体的制备及 抗体效价测定
目的要求 ·掌握多克隆抗体制备的基本原理。 ·掌握多克隆抗体制备的操作步骤。 掌握肥达反应的实验原理、操作流程和结果判 断。 ·熟悉ELISA的实验原理、操作流程和结果判断。 ·了解细菌抗原和病毒抗原免疫程序上的异同。 ·了解免疫动物的选择原则
目的要求 • 掌握多克隆抗体制备的基本原理。 • 掌握多克隆抗体制备的操作步骤。 • 掌握肥达反应的实验原理、操作流程和结果判 断。 • 熟悉ELISA的实验原理、操作流程和结果判断。 • 了解细菌抗原和病毒抗原免疫程序上的异同。 • 了解免疫动物的选择原则
原理 1、克隆(clone):是指无性繁殖细胞系，是由单一 个祖先细胞分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。在 这个家族的所有成员中，如无突变发生，其基因 是完全相同的。 2、多克隆抗体(polyclonal antibody,pAb):用 一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺 激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的 不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种 抗体的混合物，即多克隆抗体
原理 1、克隆(clone)： 是指无性繁殖细胞系，是由单一 个祖先细胞分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。在 这个家族的所有成员中，如无突变发生，其基因 是完全相同的。 2、多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：用 一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺 激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的 不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种 抗体的混合物，即多克隆抗体
3、单克隆抗体(monoclonal antibodies, mAb)：由一个识别一种抗原表位的B细 胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异 性强、效价高、少或无交叉反应性
3、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）：由一个识别一种抗原表位的B细 胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异 性强、效价高、少或无交叉反应性
抗体的制备技术经历了三代： 第一代抗体是传统的抗体制备方法即利用 抗原免疫动物后获得抗体，称为多克隆抗 (polyclonal antibody); 第二代抗体是通过杂交瘤技术制备出针对 抗原中某一抗原决定簇的抗体称为单克隆 抗体(monoclonal antibody,McAb); 第三代抗体是利用基因工程技术制备而来， 称为基因工程抗体(genetic engineering antibody)
抗体的制备技术经历了三代： • 第一代抗体是传统的抗体制备方法即利用 抗原免疫动物后获得抗体，称为多克隆抗 体（polyclonal antibody）； • 第二代抗体是通过杂交瘤技术制备出针对 抗原中某一抗原决定簇的抗体称为单克隆 抗体(monoclonal antibody, McAb)； • 第三代抗体是利用基因工程技术制备而来， 称为基因工程抗体(genetic engineering antibody)
骨髓瘤小鼠 脾 取腹水 单克隆抗体和多克隆抗体产生区别示意图 抗原 B细胞 骨髓瘤细胞 ● +PEG,融合 杂交瘤细胞 Abl 抗血清 HAT培养， Ab2 Ab3 稀释 Ab4 Ab3 Abl Ab2 Ab4 Abl 普通抗血清（多克隆抗体） Ab2 Ab3 单克隆抗体
Ab1 Ab3 Ab4 单克隆抗体 抗原 Ab1 Ab1 抗血清 Ab2 Ab3 Ab4 Ab2 Ab3 Ab4 普通抗血清（多克隆抗体） 脾B细胞 骨髓瘤小鼠 取腹水 骨髓瘤细胞 HAT培养， 稀释 单克隆抗体和多克隆抗体产生区别示意图 杂交瘤细胞 + PEG, 融合
多克隆抗体制备流程 (一)免疫原的制备 ●】 (二)免疫动物 ● (三)免疫血清的收集 (四)免疫血清的鉴定 (五)免疫血清的保存
多克隆抗体制备流程 • （一）免疫原的制备 • （二）免疫动物 • （三）免疫血清的收集 • （四）免疫血清的鉴定 • （五）免疫血清的保存
操作步骤 一、免疫原的制备 免疫原(immunogen)指能刺激机体免疫 系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗 原最重要的性质是免疫原性 (immunogenicity 免疫原一天然抗原、人工合成抗原； 蛋白质、多糖、脂类、核酸抗原；
操作步骤 一、免疫原的制备 免疫原（immunogen）指能刺激机体免疫 系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗 原最重要的性质是免疫原性 （immunogenicity） 免疫原—天然抗原、人工 合成抗原； 蛋白质、多糖、脂类、核酸抗原；
(一)细胞性抗原制备： 绵羊红细胞(SRBC)-溶血素； 细菌-抗菌抗体（动物免疫血清） (二)可溶性抗原制备： 指蛋白质、多糖和脂类等
（一）细胞性抗原制备： 绵羊红细胞（SRBC）- 溶血素； 细菌- 抗菌抗体（动物免疫血清） （二）可溶性抗原制备： 指蛋白质、多糖和脂类等
1)细胞的破碎（物理法、化学法） ·反复冻融法 ·超声破碎法 ·自溶法 。 酶处里法 ·表面活性剂处理法
1）细胞的破碎（物理法、化学法） • 反复冻融法 • 超声破碎法 • 自溶法 • 酶处里法 • 表面活性剂处理法