·30· SICHUAN JOURNAL OF ANATOMY VOL.17 NO.1 2009 ·论著· 被动吸烟对胎鼠海马神经元超微结构及 神经生长因子表达水平的影响 叶寅寅，胡博，林琳1，徐楠，陈浩，陆怡，章诗琪，桂丽2，黄大可2，贾雪梅2 (1.安微医科大学临床本硕专业04级研究生；2.安徽医科大学综合实验室，安徽合肥230032) 【摘要】目的探讨被动吸烟对胎鼠海马超微结构的影响以及神经生长因子(NGF)表达的变化。方法24 只成年雕性大鼠随即分为实验组与对照组，每组12只，对实验组大鼠进行被动吸烟造模。应用电镜观察胎鼠海马神 经元的病理改变，采用免疫组化SP法检测海马神经元内神经生长因子表达变化。结果电镜下，被动吸烟组胎鼠神 经元内线粒体空泡样变性，出现水泡样结构，核染色质边集；实验组胎鼠神经元神经生长因子平均光密度低于实验 组，两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论被动吸烟使胎鼠神经元结构破坏和神经生长因子表达下降，对胎鼠学 习记忆能力可能有一定影响。 【关键词】被动吸烟；超微结构；神经生长因子，海马；胎鼠 【中图分类号】R329 【文献标识码】A Effects of Passive Smoking on the Ultramicrostructure and the Expression of Nerve Growth Factor of Fetal Rat Hippocampal Neurons YE Yin-yin,HU Bo,LIN Lin,XU Nan,CHEN Hao,LU Yi, ZHANG Shi-gi,GUI Li,HUANG Da-ke,JIA Xue-mei (1.Graduate student of Grade 2004,BSMS Programs of Clinical Medical Speciality, Anhui Medical University,Hefei 230032;2.Comprehensive Laboratory,Anhui Medical Universi- ty,Hefei 230032) [Abstract]Objective To observe the effects of passive smoking on the ultramicrostructure and the expression of Nerve Growth Factor(NGF)of fetal rat hippocampal neurons.Methods 24 rats were randomized into experimental group and control group,12 rats in each group.The model of passive smoking in pregnant rats of experimental group was made,then the pathologic change of hippocampal neurons was observed using transmission electron microscope and the expression of NGF was detected by SP immunehistochemical method.Results The vacuolar degeneration was observed in mitochondria of the experimental fetal rats,bubble-like substance and nuclear chroma- tin margination also appeared.The expression of NGF in hippocampus of the experimental group was lower than that of control group significantly(P<0.05).Conclusions Passive smoking can in- duce the degeneration of the rat neurons and reduce the expression of NGF,further,it may influence the learning and memory capability of fetal rats. [KeyWords]Passive smoking;Ultramicrostructure;Nerve growth factor;Hippocampus;Fetal rat 神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是一 起了人们对孕期吸烟对子代发育产生长期危害的关 种重要的运动和感觉神经元营养因子，不但在中枢神 注。20世纪80年代以来，尤其是从生殖健康定义被 经系统发育中对神经元的生存、分化、生长和生理功 民众接受以后，吸烟对男女生殖健康的危害倍受重 能的维持起关键作用，而且还具有抗损伤性刺激、抑 视[2~)。目前关于被动吸烟对胎鼠海马超微结构影 制神经细胞调亡、诱导神经元、轴突再生及促进神经 响的报道不多，本实验通过观察被动吸烟后胎鼠海马 通路修复等作用四。吸烟可导致胎儿发育迟缓、出生 神经元超微结构的变化及NGF表达的影响，为优生 体重下降及围产期死亡率升高等一系列不良反应，引 医学的提供一些有价值的资料。 项目：安徽省教育厅自然科学基金 作者简介：叶寅寅，本硕研究生。Email:yeyinyin1986@sohu.com 通讯作者：贾雪梅，女，教授，硕士生导师。Email:jiaxueme(@126.corm
· 3O · SICItUANJ0 RNALOFANATOM|YV0L．17 No．1 2009 被动 吸烟对胎鼠海马神经元超微结构及 神经生长 因子表达水平的影响 叶寅寅 ，胡博 ，林琳 ，徐楠 ，陈浩 ， (1．安徽 医科 大学临床本硕专业 04级研 究生； 陆怡 ，章诗琪 ，桂丽。，黄大可 ，贾雪梅 2．安徽 医科 大学综合 实验 室，安徽合肥 230032) 论著 【摘要 】 目的 探讨被动吸烟对胎鼠海马超微结构的影响以及神经生长因子(NGF)表达的变化。方法 24 只成年雌性大鼠随即分为实验组与对照组，每组 12只，对实验组大鼠进行被动吸烟造模。应用电镜观察胎鼠海马神 经元的病理改变，采用免疫组化 SP法检测海马神经元内神经生长因子表达变化。结果 电镜下，被动吸烟组胎鼠神 经元内线粒体空泡样变性，出现水泡样结构，核染色质边集；实验组胎鼠神经元神经生长因子平均光密度低于实验 组 ，两组 比较有显著性差异 (P<O．05)。结论 被动吸烟使胎 鼠神经元结构破坏 和神 经生 长因子表达下 降 ，对胎 鼠学 习记忆能力可能有一定影 响。 【关键 词】 被动吸烟；超微结构；神经生长因子；海马；胎鼠 【中图分 类号】 R329 【文 献标识码】 A EffectsofPassiveSm okingon theUltramierostruetureand theExpressionof NerveGrowth FactorofFetalRatHippocmnpalNeurons yE Y／n—yin，H U Bo，LIN Lin，X U № ，CH EN 0，LU Yi， ZHANG i—qi，GUILi，HUANGDa—ke，JIAXu~mei (1．GraduatestudentofGr ade2004，BS 『SProgramsofClinicalMedicalSpeciality， AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032；2．ComprehensiveLaboratory，AnhuiMedicalUniversi— ty，H e 230032) [Abstract] Objective Toobservetheeffectsofpassivesmokingontheuhramicrostructureand theexpressionofNerveGrowthFactor(NGF)offetalrathippocampalneurons．M ethods 24rats wererandomizedintoexperimenta1groupandcontrolgroup，12ratsineachgroup．Themode1of passivesmokinginpregnantratsofexperimentalgroup wasmade，then thepathologicchangeof hippocampa1neurons wasobserved using transmission electron microscope and theexpression of NGF wasdetected by SP immunehistochemicalmethod． Results Thevacuolardegeneration was observedinmitochondriaoftheexperimentalfetalrats，bubble-likesubstanceandnuclearchroma— tinmarginationalsoappeared． Theexpression ofNGF inhippocampusoftheexperimenta1group waslowerthanthatofcontro1groupsignificantly(P< 0．05)．Conclusions Passivesmokingcanin— ducethedegenerationoftheratneuronsandreducetheexpressionofNGF，further，itmayinfluence thelearningandmemorycapabilityoffetaIrats． [KeyWords] Passivesmoking；Uhramicrostructure；Nervegrowthfactor；Hippocampus；Fetalrat 神经生长 因子(nervegrowthfactor，NGF)是一 种重要 的运动和感觉神经元营养因子 ，不但在中枢神 经系统发育中对神经元 的生存、分化 、生长和生理功 能的维持起关键作用 ，而且还具有抗损伤性刺激、抑 制神经细胞凋亡、诱导神经元、轴突再生及促进神经 通路修复等作用[1]。吸烟可导致胎儿发育迟缓、出生 体重下降及围产期死亡率升高等一系列不良反应，引 项 目：安徽省教育厅 自然科学基金 作者简 介：叶寅寅 。本硕研究生oEmail：yeyinyin1986@sohu,COrn 通讯作者 ：贾雪梅 。女 ，教授 ，硕士生导师 。Email：jiaxueme@126．com 起了人们对孕期吸烟对子代发育产生长期危害的关 注。2O世纪 8O年代以来 ，尤其是从生殖健康定义被 民众接受以后 ，吸烟对男女生殖健康 的危害倍 受重 视[2叫]。目前关于被动吸烟对胎鼠海马超微结构影 响的报道不多，本实验通过观察被动吸烟后胎鼠海马 神经元超微结构的变化及 NGF表达 的影响，为优生 医学的提供一些有价值的资料
四川解剖学杂志2009年第17卷第1期 ·31 选取10只胎鼠脑组织置于甲醛液固定，石蜡包埋切 1材料与方法 片（厚度为5um),采用免疫组化SP法染色，切片常 1.1仪器与主要试剂透射电镜(JEM-1230型，日 规脱蜡至水，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶，微波 本产)；普通红三环过滤嘴香烟（安徽巢湖卷烟厂）：兔 修复抗原，滴加正常山羊血清室温下孵育30min,再 抗大鼠NGF、羊抗兔IgG、DAB显色剂均购于北京中 依序滴加一抗(1：400)，4℃过夜，次日PBS液洗涤 杉公司。 后滴加生物素标记的羊抗兔IgG,于37℃温箱孵育1 1.2实验动物及被动吸烟动物模型制备普通级雕 h,链霉素抗生物素-过氧化酶溶液复合物室温下孵有 性SD大鼠24只，体重180~250g,由安徽医科大学 10min,于37C温箱孵育1h、最后在室温下加DAB 实验动物中心提供。随机分成实验组和对照组，每组 显色l0min,清水洗涤、脱水、透明、封片和镜检。 12只。实验组大鼠在孕前吸烟一周直至分娩，对照 1.5图像分析采用Image-Pro Plus图像分析系 组12只大鼠不予被动吸烟。被动吸烟在特制的半封 统对免疫组织化学染色的切片进行摄片，并检测海马 闭的熏烟箱中进行，自制熏烟箱为55cm×40cm× 神经元内免疫组化染色的NGF的平均光密度值。 40cm,一侧留有8cmX8cm的通风口。每日被动吸 1.6统计方法所有数据采用SS11.0软件进行统 烟2次，每次40min,每次点燃10支香烟，按照3十3 计分析，以x士s表示，组间比较采用t检验。P< 十4的顺序（即依次分别点燃3支、3支和4支香烟直 0.05为差异有统计学意义。 至燃尽，保持烟雾浓度一定)自燃至灰烬。两组大鼠 常规饮食、饮水。孕鼠于受孕第21天行剖宫取胎，新 2结果 鲜胎鼠脑组织置于戊二醛中固定。 2.1电镜结果对照组胎鼠海马区神经元核膜清晰 1.3电镜观察胎鼠海马组织常规脱水，经环氧树 完整，粗面内质网及核糖体较丰富，线粒体嵴结构清 脂包埋后进行超薄切片，片厚70nm,水洗后入醋酸 晰，可见初级溶酶体和次级溶酶体（图1）；实验组胎 铀饱和水溶液，再入枸橼酸铅染液染色，日产JEM- 鼠海马区神经元染色质边集，细胞内水泡样物质形成 1230型透射电镜观察。 (图2)；部分线粒体嵴断裂或空泡样变性（图3）。 1.1免疫组织化学染色 实验组和对照组分别随机 图1对照组胎鼠海马神经元核膜清晰图2实验组胎鼠海马神经元染色质边集 图3实验组胎鼠海马神经元内线粒体 (◆)粗而内质网及核糖体较正常（▲）（↑)细胞内水泡样物质形成（▲）×10000 嵴断裂，空泡样变性（△）×20000 线杠体嵴结构清浙（△） 2.2免疫组化结果NGF主要分布于海马神经细 胞的胞浆内，呈棕黄色。对照组染色深，在胞浆内可 见大量棕黄色颗粒；实验组染色较浅，棕黄色颗粒少 (图4,5)。经Image-Pro Plus图像分析系统，对照组 胎鼠海马NGF表达平均光密度为0.2609土0.0619 ,实验组胎鼠海马NGF表达平均光密度为0.2003士 0.0283,两组数据经统计学比较后有显著性差异(P 图4对照组胎鼠海马NGF图5实验组胎鼠海马NGF <0.05)(表1)。 表达×400 表达×400
四 川 解 剖 学 杂 志 2009年 第 17卷 第 1期 · 31 · 1 材料与方法 1．1 仪器与主要试剂 透射电镜 (JEM-1230型 ，日 本产)；普通红三环过滤嘴香烟 (安徽巢湖卷烟厂)；兔 抗大 鼠NGF、羊抗兔 IgG、DAB显色剂均购于北京 中 杉 公 司 。 1．2 实验动物及被动吸烟动物模型制备 普通级雌 性 SD大 鼠 24只，体重 180~250g，由安徽医科大学 实验动物中心提供 。随机分成实验组和对照组，每组 12只 。实验组大 鼠在孕前吸烟一周直至分娩 ，对 照 组 l2只大鼠不予被动吸烟。被动吸烟在特制的半封 闭的熏烟箱中进行 ，自制熏烟箱为 55cm ×40cm x 40cm，一侧留有 8cmX8cm的通风 口。每 日被动吸 烟 2次 ，每次 40min，每次点燃 10支香烟 ，按照 3+3 +4的顺序(即依次分别点燃 3支 、3支和 4支香烟直 至燃尽 ，保持烟雾浓度一定)自燃至灰烬 。两组大 鼠 常规饮食 、饮水 。孕 鼠于受孕第 21天行剖宫取胎 ，新 鲜胎鼠脑组织置于戊二醛中固定 。 1．3 电镜观察 胎 鼠海马组织常规脱水 ，经环氧树 脂包埋后进行超薄切片，片厚 70nm，水洗后人醋酸 铀饱和水溶液 ，再 人枸橼酸铅染液染色 ，日产 JEM- 1230型透射 电镜观察 。 1．4 免疫组织化学染色 实验组和对照组分别随机 图 1对照组胎 鼠海马神经元核膜清晰 (十)粗而 内质 网及核糖体较正常 (▲) 线杠体嵴结构清 晰(△ )，、_ -t 选取 10只胎 鼠脑组织置于 甲醛液固定 ，石蜡包埋切 片(厚度为 5 m)，采用免疫组化 SP法染色，切片常 规脱蜡至水，3 HzOz封闭 内源性过 氧化物酶 ，微 波 修复抗原 ，滴加正常山羊血清室温下孵育 30min，再 依序滴加一抗(1：400)，4℃过夜 ，次 日PBS液洗涤 后滴加生物素标记的羊抗兔 IgG，于 37℃温箱孵育 1 h，链霉素抗生物素一过氧化酶溶液复合物室温下孵育 10rain，于 37℃温箱孵育 1h、最后在室温下加 DAB 显色 10min，清水洗涤 、脱水 、透明、封片和镜检 。 1．5 图像分析 采用 Image-ProPlus图像 分析系 统对免疫组织化学染色的切片进行摄片，并检测海马 神经元 内免疫组化染色的 NGF的平均光密度值 。 1．6 统计方法 所有数据采用 SS11．0软件进行统 计分析 ，以 X±S表示 ，组 间 比较采用 t检 验。P< 0．05为差异有统计学意义。 2 结果 2．1 电镜结果 对照组胎鼠海马区神经元核膜清晰 完整 ，粗面内质网及核糖体较丰富 ，线粒体嵴结 构清 晰，可见初级溶酶体 和次级溶酶体 (图 1)；实验组胎 鼠海马区神经元染色质边集 ，细胞内水泡样物质形成 (图 2)；部分线粒体嵴断裂或空泡样变性(图 3)。 图 2实验组胎 鼠海马神经元染色质边集 (十)细胞 内水泡样物质形成 (▲)×10000 图 4 对 照组胎 鼠海马 NGF 图 5 实验组胎鼠海 马 NGF 表达 X400 表达×400 图 3实验组胎 鼠海 马神经元 内线粒体 嵴断裂 ，空泡样变性 (△ )×20000 2．2 免疫组化结果 NGF主要分布于海马神经细 胞的胞浆 内，呈棕黄色。对 照组染色深 ，在胞浆 内可 见大量棕黄色颗粒 ；实验组染色较浅 ，棕黄色颗粒少 (图 4，5)。经 Image-ProPlus图像分析系统 ，对照组 胎鼠海马 NGF表达平均光密度为 0．2609±0．0619 ， 实验组胎鼠海马 NGF表达平均光密度为 0．2003± 0．0283，两组数据经统计学 比较后有显著性差异 (P <O．05)(表 1)
·32· SICHUAN JOURNAL OF ANATOMY VOL.17 NO.1 2009 表1两组胎鼠海马区NGF平均光密度值比较 IAP结合蛋白(Smac/DIABLO)和Procaspase2、一 (x士s,n=10) 3、一8、一9等从线粒体膜间隙被释放到细胞质中，随 组别 平均光密度值 后引起典型的调亡变化；还有一些调亡诱导物能够诱 对照组 0.2609±0.0619 导线粒体上的膜透过性转运孔开放，导致线粒体膜电 实验组 0.2003士0.0283 位消失和释放促调亡蛋白，减少蛋白表达]。可见， 注：·：两组比较，P<0.05 神经元线粒体结构的破坏与神经营养因子表达的下 降有一定的关系。关于被动吸烟对子代神经元功能 讨论 影响的具体机制有待于进一步研究。 NGF是最早发现的神经营养因子，中枢神经系 统以及唾液腺、前列腺、蛇毒腺、胎盘组织、脑内胆碱 参考文献 能神经元支配区都可以合成并分泌。NGF广泛作 [1]白春矫，王廷华.神经营养因子研究现状，四川解剖学杂志， 用于各生理系统。在胚胎发育期，NGF的主要作用 2008,16(1):30-35. 是维持神经元存活，促进神经细胞的生长和发育，阻 [2]Helland IB,Reseland J E,Saugstad OD,et al.Smoking related to 止损伤所致的神经细胞死亡，促进神经元分化)。 plasma leptin concentration in pregnant women and their new-bor infants.Acta Paediatr,2001,90(3):282. NGF在成熟大脑各脑区都存在，其中皮质、海马和嗅 [3]Dempsey DA,Benowitz NL.Risks and benefits of nicotine to aid 球有较高的表达水平。除此之外，NGF不仅对外周 smoking cessation in pregnaney.Drug Saf,2001,24(4):277. 神经的正常细胞有营养作用，而且具有调节损伤神经 4Eskes TK.Clotting disorders and placental abruption:homocys 修复机能)。同时，NGF作为一种多功能营养因子， teine-a new risk factor.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.2001, 95(2):206. 与免疫、造血、生育等多种生理、病理状态均有关系。 [5]Salehi A,Delcroix JD,sWab DF,et al.Alzheimer disease an NGF 大量研究表明被动吸烟可致仔鼠学习记忆功能降 signaling[J]J Neuroal Transm,2004:111(3):323-345. 低)]：李芳兰等人在研究被动吸烟对胎鼠小脑皮层影 E6]Zhou FQ,Zhou J,Dedhar S,et al.NGF-induced axon growth is 响时发现其NGF表达水平下降]；朱晓临等人的研 mediated by localized inactivation of GSK-3 beta and functions of 究发现吸烟与PD的发病率呈负性相关，且尼古丁通 the microtubule plus end binding protein APC.Neuron,2004, 42:897-912. 过烟碱受体能诱导碱性成纤维生长因子(FDF-2)和 [7]王红雁.鼠神经生长因子的临床应用，现代医药卫生，2008,24 脑源性神经营养因子(BDNF)的合成1)，对多巴胺能 (21):3243-3244. 神经元有保护作用一1]。本实验发现被动吸烟胎鼠 [8]马太芳，郭贤熙，李芳兰.枣鼠被动吸烟对仔鼠学习代记忆影响 海马区神经生长因子表达明显下降，尽管本研究部位 J].山西医科大学学报，1999,30(4)：299-300. 不同，但结果与他人报道基本一致。有研究表明长期 [9]李芳兰，被动吸烟对仔鼠小脑皮层NGF基因表达的影响及牛磺 酸的千预作用.医学研究通讯.2003,32(1)：35一36. 吸烟刺激可损害注意网络功能，导致认知功能的下 [10]朱晓临，管绯，宜梦塘等.被动吸烟对大鼠纹状体GDNF和多巴 降)。因此我们认为被动吸烟神经生长因子表达下 胺含量的影响，河南实用神经疾病杂志，2002,11(5)：9一10. 降可能是认知功能障碍的机制之一。 [11]Belluardo N,Blum M,Mudo G,et al.Acute intermittent nicoti- 大量研究表明吸烟能使体内自由基数目增多， netreatment produces regional increase of basic fibroblast growth H2O2的酶系统亢进以及阻止神经纤维对抗自由基损 factor messenger RNA and protein in the tel2and diencephalon of therat.Neuroscience,1998,83(1):723-740. 害能力下降也是导致神经元损伤的原因之一。吸烟 [12]Domino EF,Ni L,Zhang H,et al,Nicotine alone and in combi- 产生的许多毒性物质如一氧化碳、硫氰酸盐等也可透 nation with L-DOPA methyl ester or the D(2)agonist N-0923 in 过胎盘进人胎血，且这些毒性物质对血液系统，线粒 MPTP-induced chronic hemiparkinsonian monkeys.Exp Neurol, 体的三羧酸循环的阻断作用也可产生毒害作用。本 1999,158(2):414-421. [13]Mattson MP,Cheng B,Smith S,et al.Neutrophic factor media- 实验对被动吸烟胎鼠海马组织的超微结构观察中，见 ted proteetion from excitotoxicity and disturbances in calcium and 到线粒体空泡变性致原有正常形态消失，核周染色质 free radical metabolism.Neuroscience,1993,5:295-307. 边集等变化。众所周知，线粒体是真核细胞的一种重 [14]谢成娟，杜静，王长青等。吸烟对注意网络的影响研究.安徽医 要的细胞器，在细胞代谢和生理过程中发挥着重要的 科大学学报.2007,42(3)：328-330. 作用5)。线粒体破坏使能量合成减少，细胞在能量 [15]Desagher S,Martinou JC.Mitochondria as the central control point of apoptosis.Trends Cell Biol,2000,10:369-377. 有限的情况下会减少非必需蛋白的表达，由此造成 [16]张艳淑，刘清君，刘强等.神经生长因子对2,5-已二酮致运动神经 NGF的表达下降；此外，线粒体破坏后，有多种调亡 元功能损伤的影响.卫生研究.2007,36(3)：263一265. 诱导因子从线粒体释放，如细胞色素C、调亡诱导因 子(AIF)、第二种线粒体来源的激活剂/低等电点
· 32 · SICItUANJOURNALOFANATOMYVOL 17 NO．1 2009 表 1 两组胎鼠海马区 NGF平均光密度值比较 (x-_+s，n一1O) 组别 平均光密度值 对照组 实验组 0．2609± 0．0619 0．2003土 0．0283 注 ： ：两组 比较 ，P < 0．05 3 讨论 NGF是最早发现的神经营养因子 ，中枢神经系 统以及唾液腺 、前列腺 、蛇毒腺、胎盘组织、脑 内胆碱 能神经元支配区都可以合成并分泌[5]。NGF广泛作 用于各生理系统 。在胚胎发育期，NGF的主要作用 是维持神经元存活 ，促进神经细胞的生长和发育 ，阻 止损伤所 致 的神 经细 胞死亡 ，促进神 经元 分化[6]。 NGF在成熟大脑各脑区都存在 ，其 中皮质、海马和嗅 球有较高 的表达水平 。除此之外 ，NGF不仅对外周 神经的正常细胞有营养作用，而且具有调节损伤神经 修复机能[7]。同时，NGF作为一种多功能营养因子 ， 与免疫 、造血 、生育等 多种生理 、病理状态均有关系。 大量研究 表 明被 动 吸烟 可致 仔 鼠学 习记忆功能 降 低[8]：李芳兰等人在研究被动吸烟对胎 鼠小脑皮层影 响时发现其 NGF表达水平下降[93；朱晓临等人的研 究发现吸烟与 PD的发病率呈负性相关 ，且尼古丁通 过烟碱受体能诱导碱性 成纤维生长因子 (FDF-2)和 脑源性神经营养因子(BDNF)的合成[】川，对多 巴胺能 神经元有保护作用[1卜n]。本实验发现被动吸烟胎 鼠 海马区神经生长 因子表达明显下降，尽管本研究部位 不同，但结果与他人报道基本一致 。有研究表明长期 吸烟刺激可损害注意 网络功能 ，导致认知功能 的下 降[1。因此我们认 为被动吸烟神经生长因子表达下 降可能是认知功能障碍的机制之一。 大量研究表 明吸烟能使体 内 自由基数 目增多 ， Hzo2的酶系统亢进 以及阻止神经纤维对抗 自由基损 害能力下降也是导致神经元损伤 的原因之一 。吸烟 产生的许多毒性物质如一氧化碳 、硫氰酸盐等也可透 过胎盘进人胎血 ，且这些毒性物质对血液系统，线粒 体的三羧酸循环的阻断作用也可产生毒害作用。本 实验对被动吸烟胎 鼠海马组织 的超微结构观察 中，见 到线粒体空泡变性致原有正常形态消失，核周染色质 边集等变化 。众所周知，线粒体是真核细胞的一种重 要 的细胞器 ，在细胞代谢和生理过程中发挥着重要的 作用L1引。线粒体破坏使能量合成减少 ，细胞在能量 有限的情况下会减少非必需 蛋 白的表达 ，由此造成 NGF的表达下降 ；此外 ，线粒体破坏后 ，有多种凋亡 诱导 因子从线粒体释放，如细胞色素 C、凋亡诱导因 子(AIF)、第 二 种线 粒体来 源 的激 活剂／低 等 电点 IAP结合 蛋 白(Smac／DIABLO)和 Procaspase-2、一 3、一8、～9等从线粒体膜间隙被释放到细胞质中，随 后引起典型的凋亡变化 ；还有一些凋亡诱导物能够诱 导线粒体上的膜透过性转运孔开放 ，导致线粒体膜电 位消失和释放促凋亡蛋白，减少蛋 白表达[1引。可见 ， 神经元线粒体结构的破坏与神经营养 因子表达的下 降有一定的关系。关于被动吸烟对子代神经元功能 影响的具体机制有待于进一步研究 。 参考文献 EII白春 娇 ，王廷 华．神 经营 养 因子研 究现 状 ，四川解 剖学 杂 志 ， 2OO8，16(1)：3O一35． 1,2]HellandIB，ReselandJE，SaugstadOD，eta1．Smokingrelatedto plasmaleptinconcentrationinpregnantwomenandtheirnew-IN)rn infants．ActaPaediatr，2001，90(3)：282． [3]DempseyDA，BenowitzNL．Risksandbenefitsofnicotinetoaid smokingcessationinpregnancy．DrugSaf，2001，24(4)：277． 1,4]EskesTK．Clottingdisordersandplacentalabruption：homoeysteine—anew riskfactor．EurJObstetGynecolReprodBio1．2001， 95(2)：206． [5]SalehiA，DelemixJD，sWabDF，eta1．AlzheimerdiseaseanNGF signaling [J]．JNeuroalTransm，2004；111(3)：323-345． 1-6]ZhouFQ，ZhouJ，DedharS，eta1．NGF-indueedaxongrowthis mediatedbylocalizedinactivationofGSK-3betaand functionsof themicrotubuleplUSendbinding protein APC． Neuron。2004， 42：897— 912． [73王红雁．鼠神经生长因子的临床应用，现代医药卫生，2008。24 (21)：3243— 3244． 1,83马太芳 ，郭贤熙 ，李芳兰．孕 鼠被 动吸烟对仔 鼠学习代记忆影 响 口]．山西医科 大学学报 ，1999，30(4)；299-300． [9]李芳兰．被动吸烟对仔 鼠小脑 皮层 NGF基因表达 的影响及 牛磺 酸的干预作用．医学研究通讯．2003，32(1)：35—36． [10]朱 晓临 ，管绯 ，童萼塘等．被动吸烟对大 鼠纹状体 GDNF和多巴 胺含量 的影响 ，河南实用神经疾病杂志 ，2002，11(5)：9—1O． [11]BelluardoN，BlumM，MudoG，eta1．Acuteintermittentnicoti— netreatmentproducesregionalincreaseofbasicfibroblastgrowt h factormessengerRNA andproteininthetel2anddiencephalonof therat．Neuroscience，1998，83(1)：723—740． [12]DominoEF，NiL，ZhangH，eta1．Nicotinealoneandincombi— nationwithL-DOPA methy1esterortheD (2)agonistN-0923in MPTf nducedchronichemiparkinsonianmonkeys． ExpNeurol。 1999，158(2)：414—421． [13]MattsoniMP，ChengB，SmithS，eta1．Neutrophicfactormedia— tedproteetionfrom exeitotoxicityanddisturbancesincalcium and freeradicalmetabolism ．Neuroscience，1993，5：295— 3O7． 1,143谢成娟 ，杜静 ，王长青等．吸烟对注 意网络的影 响研究．安徽医 科大学学报．2007，42(3)：328-330． [15]DesagherS，Martinoujc．Mitoehondriaasthecentralcontrol pointofapoptosis．TrendsCellBiol，2000，10：369— 377． 1,16]张艳淑，刘清君 ，刘强等．神经生长因子对 2，5一已二酮致运动神经 元功能损伤的影 响．卫生研究．2007，36(3)：263—265．