国内外微生物检测新技术开究 与应用进展
国内外微生物检测新技术研究 与应用进展
前言 近年来，全球食品安全事件频频发生， 如美国的“李斯特氏杆菌事件”、日本的 “大肠杆菌0157流行事件”等，对人类健康 带来很大危害。 传统的检测方法（如分离培养、生化鉴定 等)特异性不高、灵敏度低、操作烦琐耗时， 不能实现有效的监测、预防作用。 因此，发展新的快速检测与鉴定食源性 致病微生物的方法是及时有效地控制和预防 致病微生物传播的前提
前言 近年来，全球食品安全事件频频发生， 如美国的“李斯特氏杆菌事件”、日本的 “大肠杆菌0l57流行事件”等，对人类健康 带来很大危害。 传统的检测方法(如分离培养、生化鉴定 等)特异性不高、灵敏度低、操作烦琐耗时， 不能实现有效的监测、预防作用。 因此，发展新的快速检测与鉴定食源性 致病微生物的方法是及时有效地控制和预防 致病微生物传播的前提
国内外微生物检测新技术 冬免疫学检测技术 聚合酶链反应(PCR)等技术 。生物芯片技术 代谢学技术 $其它技术
国内外微生物检测新技术 ❖ 免疫学检测技术 ❖ 聚合酶链反应(PCR)等技术 ❖ 生物芯片技术 ❖ 代谢学技术 ❖ 其它技术
第一节免疫学检测技术 免疫学检测技术将抗原-抗体反应的特 异性与标记技术（荧光素、放射性同位素和 酶)的相结合，是一种可以定位、定性和 定量的综合技术，具高专一性和高敏感度。 冬免疫荧光技术 ·免疫磁性分离技术 。免疫胶体金技术 酶联免疫吸附检测(ELISA) 酶联荧光免疫分析技术(VIDAS)
第一节 免疫学检测技术 ❖ 免疫荧光技术 ❖ 免疫磁性分离技术 ❖ 免疫胶体金技术 ❖ 酶联免疫吸附检测(ELISA) ❖ 酶联荧光免疫分析技术(VIDAS) 免疫学检测技术将抗原-抗体反应的特 异性与标记技术(荧光素、放射性同位素和 酶)的相结合， 是一种可以定位、定性和 定量的综合技术，具高专一性和高敏感度
1.免疫荧光技术 ·原理与特点：免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体 活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应 的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种 特异性荧光反应。此技术的主要特点有特异性强、 敏感性高、速度快。 应用：此技术可用来对沙门氏菌、李斯特菌、葡萄 球菌毒素、E·Co1i0157和单核细胞增生李斯特氏菌 等进行快速检测。王军等建立了养殖大黄鱼病原溶 藻弧菌的荧光抗体免疫快速检测技术
1. 免疫荧光技术 ❖ 原理与特点：免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体 活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应 的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种 特异性荧光反应。此技术的主要特点有特异性强、 敏感性高、速度快。 ❖ 应用：此技术可用来对沙门氏菌、李斯特菌、葡萄 球菌毒素、E·ColiO157和单核细胞增生李斯特氏菌 等进行快速检测。王军等建立了养殖大黄鱼病原溶 藻弧菌的荧光抗体免疫快速检测技术
2. 免疫磁性分离技术 原理与特点： ·免疫磁性分离技术是将特异性抗体偶联在 磁性颗粒表面，与样品中被检致病菌发生 特异性的结合，载有致病菌的磁性颗粒在 外加磁场的作用下，向磁极方向聚集，弃 去检样混合液，使致病菌不断得到分离、 浓缩。 免疫磁性分离技术代替了常规的选择性增 菌培养过程，可特异有效地将目的微生物 从样品中快速的分离出来
2. 免疫磁性分离技术 ❖ 原理与特点： ❖ 免疫磁性分离技术是将特异性抗体偶联在 磁性颗粒表面，与样品中被检致病菌发生 特异性的结合，载有致病菌的磁性颗粒在 外加磁场的作用下， 向磁极方向聚集，弃 去检样混合液，使致病菌不断得到分离、 浓缩。 ❖ 免疫磁性分离技术代替了常规的选择性增 菌培养过程，可特异有效地将目的微生物 从样品中快速的分离出来
应用：Skjerve等报道了采用免疫磁性分离技 术，从乳及乳制品、肉类和蔬菜中分离沙门 氏菌，其检测灵敏度为100CFU/g。在英国， 此法主要应用于牛奶中大肠杆菌0157：H7的监 测和食品中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血 性弧菌、小肠结肠耶尔森氏菌)等的检测。 在实际应用中，还可以与直接镜检技术、阳抗 技术、酶联免疫试验、PCR等技术相结合应用
❖ 应用：Skjerve等报道了采用免疫磁性分离技 术， 从乳及乳制品、肉类和蔬菜中分离沙门 氏菌，其检测灵敏度为100CFU／g。在英国， 此法主要应用于牛奶中大肠杆菌O157：H7的监 测和食品中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血 性弧菌、小肠结肠耶尔森氏菌)等的检测。 ❖ 在实际应用中，还可以与直接镜检技术、阳抗 技术、酶联免疫试验、PCR等技术相结合应用
3.免疫胶体金技术 原理： 以微孔滤膜为载体包被 已知抗原或抗体，加入 待检标本后，经滤膜的 毛细管作用或渗滤作用 使标本中的抗原或抗体 与膜上包被的抗体或抗 原结 ,再用胶体金 结合物标记而达到检测 自的
3. 免疫胶体金技术 ❖ 原理： ❖ 以微孔滤膜为载体包被 已知抗原或抗体，加入 待检标本后，经滤膜的 毛细管作用或渗滤作用 使标本中的抗原或抗体 与膜上包被的抗体或抗 原结合， 再用胶体金 结合物标记而达到检测 目的
·特点是单份测定、简单快速、特异敏感 ，几分钟就可用肉眼观察到颜色鲜明的 实验结果，并可保存实验结果
❖ 特点是单份测定、简单快速、特异敏感 ，几分钟就可用肉眼观察到颜色鲜明的 实验结果，并可保存实验结果
4.酶联免疫吸附检测(ELISA) ÷原理：1971年Engval1建立了ELISA方法，它 以酶或者辅酶作为标记物，标记抗原或者抗 体，用酶促反应的放大作用来显示初级免疫 学反应，并且利用聚苯乙烯微量反应板（或球） 吸附抗原或者抗体，使其固相化，在其中进 行免疫反应和酶促反应。根据酶反应底物显 色的深浅进行定性或定量分析
4.酶联免疫吸附检测(ELISA) ❖ 原理：1971年Engvall建立了ELISA方法，它 以酶或者辅酶作为标记物，标记抗原或者抗 体， 用酶促反应的放大作用来显示初级免疫 学反应，并且利用聚苯乙烯微量反应板(或球) 吸附抗原或者抗体，使其固相化， 在其中进 行免疫反应和酶促反应。根据酶反应底物显 色的深浅进行定性或定量分析