细胞化学染色
细胞化学染色
■子 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。 ·用于研究血细胞生理、病理和化学结构； 。临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、 疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据。 虚
▪ 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。 ▪ 用于研究血细胞生理、病理和化学结构； ▪ 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、 疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据
·血细胞化学染色的基本要求是在原位显示 细胞成分和结构，故在染色时应尽量保持 细胞的生前结构、化学成分和酶活性，反 应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定 性。 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、 蛋白质，包括某些氨基酸、蛋白质SH基、 结合的糖蛋白、粘蛋白、核酸（包括RNA ，DNA)、及无机盐等。 图
▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位显示 细胞成分和结构，故在染色时应尽量保持 细胞的生前结构、化学成分和酶活性，反 应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定 性。 ▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、 蛋白质，包括某些氨基酸、蛋白质SH基、 结合的糖蛋白、粘蛋白、核酸（包括RNA ，DNA）、及无机盐等
·血细胞化学染色首先是要固定骨髓片或 血片，然后才是各种定性、定量的特殊 染色。 (一)固定 ·固定有物理法与化学法， ·前者为干燥和火焰固定， ·后者最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋 酸等
▪ 血细胞化学染色首先是要固定骨髓片或 血片，然后才是各种定性、定量的特殊 染色。 （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 前者为干燥和火焰固定， ▪ 后者最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋 酸等
(二)显示 1、偶氮偶联法：这类方法多利用人工合成 的酶底物，在酶作用下，产生分解产物， 再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成 不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀
（二）显示 1、偶氮偶联法：这类方法多利用人工合成 的酶底物，在酶作用下，产生分解产物， 再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成 不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀
■3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 ■4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。 ■5、四唑盐法 ·6、金属沉着法 ·其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色 (显示脂质)、 荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断
▪ 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 ▪ 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。 ▪ 5、四唑盐法 ▪ 6、金属沉着法 ▪ 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色 （显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断
（三)细胞化学定量 ·粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别 为阴性和各种程度的阳性。 ■百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。 ·积分法，是常用的半定量法，将前述的等级估量与百分率 相结合（计算方法见碱性磷酸酶染色)，它既反映了细胞 阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。 ·流式细胞仪测定单个细胞内的化学成分含量。 以细胞受色反应的强弱比色，常用于RNA、DNA定量测定 和各阶段幼红细胞胞浆中血红蛋自定位、定量等
▪ （三）细胞化学定量 ▪ 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别 为阴性和各种程度的阳性。 ▪ 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。 ▪ 积分法，是常用的半定量法，将前述的等级估量与百分率 相结合（计算方法见碱性磷酸酶染色），它既反映了细胞 阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。 ▪ 流式细胞仪测定单个细胞内的化学成分含量。 ▪ 以细胞受色反应的强弱比色，常用于RNA、DNA定量测定 和各阶段幼红细胞胞浆中血红蛋自定位、定量等
·1985年国际血液学标准化委员会(ICSH) 推荐了五种方法，即： ·过氧化物酶法、碱性磷酸酶法、酸性磷酸 酶法、非特异性酯酶法、氯乙酸AS-D蔡酚 酯酶法。 ·这些方法学在白血病的鉴别诊断上很重要 ,须对其染色方法和临床意义加以充分地 理解。下面介绍几种常用的细胞化学染色 方法。 超
▪ 1985年国际血液学标准化委员会（ICSH） 推荐了五种方法，即： ▪ 过氧化物酶法、碱性磷酸酶法、酸性磷酸 酶法、非特异性酯酶法、氯乙酸AS-D蔡酚 酯酶法。 ▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上很重要 ，须对其染色方法和临床意义加以充分地 理解。下面介绍几种常用的细胞化学染色 方法
一、过氧化物酶染色(POX) (一)四甲基联苯胺法 ■【原理】粒细胞和单核细胞的胞浆内的 髓过氧化物酶(POX orMPO)分解过氧 配化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧 化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色 晶化合物沉着于细胞质内。 图
一、过氧化物酶染色（POX） （一）四甲基联苯胺法 ▪ 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的 髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧 化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色 化合物沉着于细胞质内
【试剂】 ·1.1%TMB(3,5,3',5气四甲基联苯胺)乙醇溶液 0.Ig TMB溶于100m188%乙醇中，置棕色瓶内 ， 放冰箱中保存。 ·2.亚硝基铁氰化钠饱和溶液在少量蒸馏水中加人 亚硝基铁氰化钠晶体，至不再溶解为止，置棕色 瓶内，放冰箱中保存。 ·3.1%过氧化氢溶液取30%过氧化氢1l加人蒸馏 水29m1,放冰箱中。 ·4.稀过氧化氢溶液取过氧化氢1滴，加I0l蒸馏 水稀释（需临时配制)。 5.瑞氏染色液
▪ 【试剂】 ▪ 1. 1%TMB (3,5,3',5气四甲基联苯胺）乙醇溶液 O.lg TMB溶于100m1 88%乙醇中，置棕色瓶内 ，放冰箱中保存。 ▪ 2. 亚硝基铁氰化钠饱和溶液在少量蒸馏水中加人 亚硝基铁氰化钠晶体，至不再溶解为止，置棕色 瓶内，放冰箱中保存。 ▪ 3. 1%过氧化氢溶液取30%过氧化氢l ml加人蒸馏 水29m1，放冰箱中。 ▪ 4. 稀过氧化氢溶液取过氧化氢1滴，加l0 ml蒸馏 水稀释（需临时配制）。 ▪ 5. 瑞氏染色液