版权所有·禁止翻制、电子传】 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1768-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫及其 代谢产物的快速测定方法 Determination of malachite green,crystal violet and the corresponding leuco compounds in the aquatic products 2006-04-25发布 2006-11-15实施 宙家债量民检总胃 发布
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售 水产品中孔雀石绿和结晶紫及其 代谢产物的快速测定方法 SN/T1768-2006 邮政编码：100045 网址www.bzcbs.com 电话：6852394668517548 中国标准出板社秦空岛印别厂印刷 开本880×12301/16印张1.25字数30千字 2006年8月第一：2006年8月第一次印鬧 印数1-2000 书号，155066·2-17032定价12.00元
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售 SN/T1768-2006 前言 本标准附录A.附录B均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共 和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国江西出入境检验 检度局、中华人民共和国祺江出入境检验检疫局、中华人民共和国舟山出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：贾东芬、张顺合、张维、徐超一、林维宜、田苗、李耀平、占春瑞、陈伟、周向阳 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发善 SN/T1768-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫及其 代谢产物的快速测定方法 1范固 本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物晚色孔雀石绿、结品紫及其代谢物隐鱼结品紫残留量 的高效液相色谱、液相色谱串联质谱的快速测定方法 本标准适用于鲜活水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结品紫及其代谢物隐色 结品紫残留量的测定。 2液相色谱法 2.1原理 试样中的残留的孔金石绿、结品紫及其代谢物用孔金石绿，结品紫快速检测前处理试剂盒提俱的试 剂提取、浓缩后用液相色谱进行检测，外标法定量 2.2试剂和材袋 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水」 2.2.1乙腈：色谱纯。 2.22无水乙酸钠 2.2.3冰乙酿：色谱纯 2.2.4异丙醇 2.2.5对-甲苯磺酸。 2.2.6乙酸盐缓冲液：称取4.950g无水乙酸钠及0.950g对甲苯磺酸，溶解于950mL水中，用冰乙 酸调节擦被DH到4.5，最后用水定容到1000ml 22.7标准品：孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结品紫、隐色结晶紫纯度大于98% 2.2.8标准贮备溶液：准确称量孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结品紫、隐色结晶紫各10g,用乙腈分别定 容于100mL容量瓶中，配制成100g/mL的标准贮备液。 2.2.9混合标准溶液：用流动相稀释标准贮备溶液，配制成孔雀石绿，隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结品 紫均为10g/mL的混合标准溶液。0℃~4℃避光保存。 2.2.10孔雀石续、结晶紫快速检测前处理试剂盒 2.3仪器和设备 2.3.1高效液相色谱仪：配紫外-可见光可变液长检测器，检测波长时间程序可控。 2.3.2匀浆机。 2.3.3旋转蒸发仪 2.3 4离心机：4000/min,8000r/min 2.3.5振满器， 2.3.6招声波水裕 2.3.7聚四氟乙烯离心管：2.5mL,50mL,具 2.3.8微孔滤膜：0.45m 孔雀石绿，结品紫快速检测筛处型试剂盆是由中同检验检疫科学研究院研发北京陆桥衡检新技术公司所生产产 品的商品名称。给出这一信息是为了给本标准的使用者提供方便，而不是标准主管部门对这一产品的认可
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发昏 SN/T1768-2006 2.4测定步骤 2.4.1提取、净化 准确称取已热路的样品5,00g于50L离心管中，先加人孔雀石绿、结品紫快速检测前处理试剂 盒中的提取剂”（液体20.0ml),用匀浆机以8000r/mi的速度均质30s,再加入提取剂2（固体粉 末)，振荡1min,4000r/min离心5min,取上清液10.0mL于鸡心瓶中再加入异丙醇10mL50℃ 55℃水浴旋转蒸干。残留物用1.0mL流动相溶解，溶解液放入2.5mL离心管中，8000/min离心 5mi后，用微孔滤膜过滤，滤液供仪器测定 2.4.2绘制标准工作曲线 移取孔雀石绿，隐色孔雀绿，结晶紫、隐色结品紫混合标准溶液，用流动相稀释成2gmL、50g/mL 250ng/mL、500ng/mL标准工作溶液，用高效液相色谱仪测定，得出标准工作曲线。 2.4.3测定 2.4.3.1液相色谱条件 )色谐柱：Ca柱，250mmX4.6mm(内径)，粒度5 流动相：乙+乙酸盐缓冲液(80+20，体积分数)： c)流速：1.0ml/min, d)柱温：室温： e）检测波长时间程序：0min~5.0min,618nm5.0min~12min,588nm12min~l8min 267nm;孔雀石绿的检测波长为618nm,结晶紫的检测波长为588nm,隐色孔雀石绿和隐色 品紫的检测波长为267nm: f)进样量：50L 2.4.3.2色谱测定 根据样液中孔石绿，隐色孔金绿、结品紫、隐色结品紫的含量情况，选定蜂面积相近的标准工作溶 液。标准工作溶液和样液中孔雀石绿、隐色孔金绿，结品紫、隐色结品紫的响应值均应在仪器的检测气 性范倒内。在上述色谱条件下，孔雀石绿、隐色孔雀绿，结晶紫、隐色结晶繁的保留时间约为孔雀石绿 4.0min、隐色孔雀石绿13.6min、结晶紫5.4min和隐色结晶紫14.7min。标准品色谐图参见附录A 中图A.1。 2.4.4空白实验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。 2.5结果计算 用色谐数据处理机或按式()分别计算供试样品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结品 紫残留景 -2xoxr 。 式中 一水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿，结品紫和隐色结品紫残留量，单位为微克每千克(g/kg): 标准曲线上查出试样溶液中孔雀石绿、隐色孔富石绿、结晶紫和隐色结品紫标准工作溶液的 浓度，单位为微克每升（μg/L): 由有机化学试剂组成的混合液体试剂，其 作用是将样品 物有效地提取出来。 部门对这 由无机化学组成的泥 合粉状试剂，其作 你声检的处进是的中本商的银供方限，面东极庭王在郁们对 品的认可 2
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发善 SN/T1768-2006 V一最终定容体积数，单位为毫升(mL): 2—换算常数： m—供试试料样品质量，单位为克(g)。 本方法分别计算孔雀石绿及代谢产物隐色孔雀石绿，并分别报告孔雀石绿及代谢产物隐色孔雀石 绿 本方法分别计算结品紫及代谢产物隐色结品紫，并分别报告结品紫及代谢产物隐色结品紫结果。 3测定低限、回收率 3.1检测限 本方法孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结晶紫、隐色结品紫的检测限均为2.0g/kg。 3.2回收率 本方法五雀石绿，隐色孔雀石绿，结晶紫、隐色结晶紫回收幽为：85%一I05%, 4液相色谱-由联质谱法 4.1原理 试样中残留的孔雀石绿，结品紫及其代物用孔雀石绿，结品紫快速检测前处理试剂盒提供的试剂 提取、浓缩后用液相色谱串联质谐进行检测，外标法定量。 4.2试荆和材魁 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 4.2. 乙腈：色谱纯 4.2.2无水乙酸铵。 4.2.3冰乙酸：色谱纯 4.2.4异丙醇 4.2.55m ol/L乙酸铵缓冲溶液：称取0.385g无水乙酸铵，溶解于大约980mL水中，用冰乙酸调节 pH到4.5，最后用水定容到1000mL,过0.2m滤腿 4.2.6标准品：孔餐石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫隐色结晶紫纯度大于98%。 4.2.7标准贮各溶液，准确称取孔雀石绿、隐色孔常石绿、结品紫、隐色结品紫各10田g,用乙醋分别溶 解定容于100mL容量瓶中，配制成100红g/mL的标准心备液。 4.2.8混合标准溶液：用流动相稀释标准贮备溶液，配制成孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫，隐色结品 紫均为10g/mL的混合标准溶液。 1光保存 4.2.9孔金石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盆， 4.3仪器和设备 4.3.1高效液相色谱-串联质谱联用仪：配有电隨雾(ES)离子源 4.3.2匀浆机 4.3.3 旋转慕发仪 4.3.4离心机：4000r/min、8000r/min 4.3.5撒荡器 4.3.6相声波水裕 4.3.7聚四氟乙烯离心管：2.5mL,50mL,带塞 4.3.8 微孔滤膜：0.45m。 4.4测定步骤 4.4.1提取和净化 准确称取已捣碎的样品5.00g于50mL离心管中，先加入孔雀石绿、结品紫快速检测前处理试剂
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发鲁 SN/T1768-2006 盒中的提取剂1（液体20.0mL),用匀浆机以8000r/min的速度均质30s,再加入提取剂2（周体粉 末)，振荡1min,4000r/mim离心5mim,取上清液10.0mL于鸡心瓶中再加人异丙醇10mL, 50℃~55℃水浴旋转蒸干，残留物用2.5mL流动相溶解，溶解液放入2.5mL,离心管中，8000r/min 离心5min后，用微孔滤膜过滤，滤液供仪器测定 4.4.2绘制标准工作曲线 移取孔雀石绿、隐色孔雀绿、结晶紫、隐色结品紫混合标准溶液，用流动相稀释成0.1g/mL 0.2ng/mL,0.5ng/mL、L.0ng/mL、5.0ng/mL、l0ng/mL标准工作溶液，用高效液相色谱-串联质谱 仪测定，得出标准工作曲线 4.4.3测定 4.4,3.1高效液相色谱-串联质谱条件 a)色谱柱：C柱，150mmX2.1mm(内径)，粒度5m: b)流动相：乙晴+5mmol/L,乙酸按(75+25，V/V): 流速：0.2ml/min 柱温：35℃， c)进样量：10L )离子源：电晴露ES1.正离子」 g)扫描方式：多反应监测MRM: h) 雾化 、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气：使用前应调节各气体谎量以使质谱灵献 度达到要求： D喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度： j)监测离子对：孔雀石绿m/2329/313(定量离子)，329/208：隐色孔雀石绿m/2331/316(定量离 子)、331/239：结品紫m/2372/356(定量离子)、372/251：隐色结品崇m/2374/358(定景离 子)、374/238 4.4,3.2液相色谱串联质谱定量测定 按照4.4.3.1液相色谱串联质谐条件测定样品和标准工作溶液，标准曲线法测定样液中的孔雀石 绿、隐色孔金石绿、结品紫、隐色结晶紫含量。样品中被测物残留量应在标准曲线范围之内，如果含量超 出标准曲线范，应用流动相适当稀释。在上述色谱条件下，孔雀石绿，结品紫、隐色孔雀石绿，隐色结 晶紫的保留时间约为1.89min,5.35min,2.47min和5.51mim,标准溶液的液相色谱电喷雾质量色 谐图参见附录B中的图B1 4.4.3.3液相色谱-串联质谱定性测定 按照4.4.3.1液相色谱-串联质谱条件定样品和标准工作溶液，分别计算样品和标准工作溶液由 一物质 两对子色清连断积的比值，仅当西者数值的相对棉花本于25时方可确定西者为圆 除不加试样外，均按上述测定步强进行。 4.6结果计算表述 按式(2)分别计算供试样品中的孔雀石绿，流色孔室石绿，结品紫和色结晶残留量，计算结果需 扣除空白。 .(2》 式中： 一水产品中孔蛋石绿、隐色孔雀石绿、结品紫或隐色结品紫残留量，单位为微克每千克(g/kg): 一标准曲线上查出试样溶液中孔衡石绿，隐色孔雀石绿，结品紫和隐色结品紫的标准工作溶液 浓度，单位为微克每升(g/L):
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发 SN/T1768-2006 V最终定容体积数，单位为毫升(mL): 2—换算常数； m一供试试料样品质量，单位为克(g)。 本方法分别计算孔雀石绿及代谢物隐色孔雀石绿，并分别报告孔雀石绿及代谢物隐色孔雀石绿 结 本方法分别计算结品紫及代谢物隐色结品紫，并分别报告结品紫及代谢物隐色结品紫结果。 5测定低限、回收率 5.1测定低限 本方法孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结品紫、隐色结品紫的检测低限均为0.5g/kg 5.2回收率 本方法孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结晶紫、隐色结晶紫同收率均为：85%一105%
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版权所有●禁止翻制、电子传阅、发昏 SN/T1768-2006 附录A (资料性附录) 标准品色谱图 结紫 2 图A1孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结品紫，隐色结品紫混合标准品的液相色谱至 6
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售 SN/T1768-2006 附录B (资料性附录) 标准品液相色谱-电喷雾质量色谱图 T Screen Thief MRM (11 pairs):329.4313.2 amu from Sample 8 (10)of mg+cy 1024.wiff (Tarbo Spray) Max.3.2e5 cps. 3251孔霍石绿 81.9e5,2色结紫 0.0 03604560 606.67.0 ,845ce 0e5结品紫 @060003901.50箭806.7 XIC of+MRM(11 pairs)331.43163 amu from Sample 0of mgtcv 1024 wi Turbo Spray) Max.3.le5 cps 号3151隐色孔衔石绿 图B1孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结品紫、隐色结晶紫液相色谱-电喷雾质量色谱图
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