GB/T17336-1998 前言 红曲色素作为食品着色剂已经列入GB2760一1996食品添加剂使用卫生标 准，按正常需要量加入。目前未发现国内外食品中红曲色素的薄层层析检测方 法，我们选用先制定标准TLC板，柱层去掉干扰物，本法快速、准确。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准起草单位：中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所、卫生部食 品卫生监督检验所和中国药品生物制品检定所。 本标准起草人：李严巍、王梅、鲁雁飞、杨祖英、刘宝灵。 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负贵解释。 中华人民共和国国家标准 食品中红曲色素的测定 Determination of monascas colours in foods GB/T17336—1998 1范 标准规定了用薄层层析方法测定食品中红曲色素。 本标准适用于食品中红曲色素的测定。 2原 样品中红曲色素经提取， 净化后，TLC分离，与标准TLC板比较定性，选用 分配系数在两相中不同而达到分离的目的。 3试剂 3.1硅胶：柱层析用，120~180目。 3.2车胶GF254。 3.3 正已烷：醋酸乙酯：甲醇(5：3：2). 3.5氯仿：甲醇(8：3)。 3.6海沙：先用1：10盐酸煮沸15min,用水洗至中性，再于105℃干燥， 贮于具塞的玻璃瓶中，备用。 入5g硅胶，拌匀，装入50g硅胶层析柱中（湿法装柱），将拌有硅胶的红曲 色素装在柱项，后用甲醇洗脱：直至洗脱下来的甲醇无色为止，然后减压浓缩 至青状，于60~70℃烘箱中烘干，约剩下0.89g的红曲色素作为薄层分析用标 准品。用甲醇配成1 s/L的标准溶液。 3.9红曲色素标准使用液： 临用 时吸取标准溶液5.0mL,置于50mL容量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.1g红曲色素。 4仪器 4.1徽量注射器10μL。 中华人民共和国卫生部1998一04一20批准 1999-01一01实施
GB/T 17336—1998 前 言 红曲色素作为食品着色剂已经列入 GB 2760—1996 食品添加剂使用卫生标 准，按正常需要量加入。目前未发现国内外食品中红曲色素的薄层层析检测方 法，我们选用先制定标准 TLC 板，柱层去掉干扰物，本法快速、准确。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准起草单位：中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所、卫生部食 品卫生监督检验所和中国药品生物制品检定所。 本标准起草人：李严巍、王梅、鲁雁飞、杨祖英、刘宝灵。 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。 中华人民共和国国家标准 食品中红曲色素的测定 Determination of monascas colours in foods GB/T 17336—1998 1 范围 本标准规定了用薄层层析方法测定食品中红曲色素。 本标准适用于食品中红曲色素的测定。 2 原理 样品中红曲色素经提取，净化后，TLC 分离，与标准 TLC 板比较定性，选用 分配系数在两相中不同而达到分离的目的。 3 试剂 3．1 硅胶：柱层析用，120～180 目。 3．2 奎胶 GF254。 3．3 甲醇。 3．4 正己烷﹕醋酸乙酯﹕甲醇（5﹕3﹕2）。 3．5 氯仿﹕甲醇（8﹕3）。 3．6 海沙：先用 1﹕10 盐酸煮沸 15 min，用水洗至中性，再于 105℃干燥， 贮于具塞的玻璃瓶中，备用。 3．7 石油醚：沸程 60～90℃。 3．8 红曲色素的标准溶液：取 1 g 红曲色素，加入 30 mL 甲醇溶解，然后加 入 5 g 硅胶，拌匀，装入 50 g 硅胶层析柱中（湿法装柱），将拌有硅胶的红曲 色素装在柱项，后用甲醇洗脱；直至洗脱下来的甲醇无色为止，然后减压浓缩 至膏状，于 60～70℃烘箱中烘干，约剩下 0.89 g 的红曲色素作为薄层分析用标 准品。用甲醇配成 1 mg/mL 的标准溶液。 3．9 红曲色素标准使用液：临用时吸取标准溶液 5.0 mL，置于 50 mL 容量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 0.1 mg 红曲色素。 4 仪器 4．1 微量注射器 10μL。 中华人民共和国卫生部 中华人民共和国卫生部 1998—04—20 1998—04—20 批准 19 批准 1999—01—01 99—01—01 实施
GB/T17336-198 4.2展开槽25cm×6cm×4cm. 4.3薄层板：市售预制硅胶GF254板， 4.4层析柱。 4.5 接收瓶 4.6 全玻璃浓缩器。 4.7真空泵。 5操作方法 5.1样品处理 5.1. 配制酒：取10L样品，于水浴上挥干，加少量乙醇溶解残渣，进行 薄层分析。 5.1.2蛋糕：取30.0g蛋糕，搅碎，加海沙少许，混匀，用热风机吹干样品 即可，加入30mL石油醚去脂肪，重复3~5次，弃去石油醚，然后将蛋糕渣放 入通风橱中，残余石油醚自然挥除后，放入蒸馏瓶中，加95%乙壁约90L,回 流30in, 过滤，用乙醇洗涤5次，合并提取液， 将提取液浓缩至20L。此 液留作测定用。 5.1.3市售豆腐乳：取豆腐乳30g,搅碎，加95%的乙醇50~70mL,提取回 流30mi,过滤，用乙醇洗涤残渣5次，合并乙醇提取液，减压浓缩至20mL, 此液留作测定用。 5.1.4 火腿肠：称取30g火腿肠，捣碎，加海沙少许，混匀，每次加入50m 石油酰提取脂肪，共挑取三次，每次提取4 in,过滤，滤液弃去，残渣放通风 橱中，用吹风机吹干，用50mL甲醇提取红曲色素30min,共3次，过滤，合并 滤液，滤液中加入3L的钨酸钠溶液沉淀蛋白，弃去蛋白，滤液减压浓缩至10mL, 此液供测定用。 5.2测定 5.2.1 点样：取市售硅胶GF254板(4cm×20cm),离底边2cm处，点上 述样品溶液10μL,同时在右边点2μL色素标准溶液。 5.2.2展开：将52.1已点上样品与标准品的二块板，分别放入试剂“3.3” 和“3.4”中展开，待展开剂前沿至15cm处，取出，放入通风橱，晾干，在V254 m下观寨，试剂“3.3”得到4个点，R值分别分0.86,0.71,0.54,0.38，试 剂“3.4”得到3个点，R值分别为 0.86,0.69,0.57。样品与标品的斑点的R 值一致。则证明样品的色素为红曲色素。 中华人民共和国卫生部1998一04一20批准 1999一0101实施
GB/T 17336—1998 4．2 展开槽 25cm×6cm×4cm。 4．3 薄层板：市售预制硅胶 GF254 板。 4．4 层析柱。 4．5 接收瓶。 4．6 全玻璃浓缩器。 4．7 真空泵。 5 操作方法 5．1 样品处理 5．1．1 配制酒：取 10 mL 样品，于水浴上挥干，加少量乙醇溶解残渣，进行 薄层分析。 5．1．2 蛋糕：取 30.0g 蛋糕，搅碎，加海沙少许，混匀，用热风机吹干样品 即可，加入 30 mL 石油醚去脂肪，重复 3～5 次，弃去石油醚，然后将蛋糕渣放 入通风橱中，残余石油醚自然挥除后，放入蒸馏瓶中，加 95%乙醇约 90 mL，回 流 30 min，过滤，用乙醇洗涤 5 次，合并提取液，将提取液浓缩至 20 mL。此 液留作测定用。 5．1．3 市售豆腐乳：取豆腐乳 30g，搅碎，加 95%的乙醇 50～70 mL，提取回 流 30 min，过滤，用乙醇洗涤残渣 5 次，合并乙醇提取液，减压浓缩至 20 mL， 此液留作测定用。 5．1．4 火腿肠：称取 30g 火腿肠，捣碎，加海沙少许，混匀，每次加入 50mL 石油醚提取脂肪，共提取三次，每次提取 45min，过滤，滤液弃去，残渣放通风 橱中，用吹风机吹干，用 50mL 甲醇提取红曲色素 30 min，共 3 次，过滤，合并 滤液，滤液中加入 3mL 的钨酸钠溶液沉淀蛋白，弃去蛋白，滤液减压浓缩至 10 mL， 此液供测定用。 5．2 测定 5．2．1 点样：取市售硅胶 GF254 板（4 cm×20 cm），离底边 2 cm 处，点上 述样品溶液 10μL，同时在右边点 2μL 色素标准溶液。 5．2．2 展开：将 5.2.1 已点上样品与标准品的二块板，分别放入试剂“3.3” 和“3.4”中展开，待展开剂前沿至 15 cm 处，取出，放入通风橱，晾干，在 UV254 nm 下观察，试剂“3.3”得到 4 个点，Rf值分别分 0.86，0.71，0.54，0.38，试 剂“3.4”得到 3 个点，Rf值分别为 0.86，0.69，0.57。样品与标品的斑点的 Rf 值一致。则证明样品的色素为红曲色素。 中华人民共和国卫生部 中华人民共和国卫生部 1998—04—20 1998—04—20 批准 19 批准 1999—01—01 99—01—01 实施