GB/T15206-1994 中华人民共和国国家标准 食品中胆固醇的测定方法 Method for determination of cholesterol in foods GB/T15206-1994 1主题内容与适用范围 本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。 本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。 2原理 当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因 此可先对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中 胆固醇的含量。 3试 全部试剂除注明外均匀分析纯，实验用水蒸馏水。 3.1石油醚。 32无水7 3.3 3.4冰乙酸：优级纯。 3.5磷酸。 3.6胆固醇标准物质 3.7阳周醇标雅」 3. 7.1 胆固醇标准储备液(1g/L):精确称取胆固醇100g,溶于冰乙酸 中，并定容至100L。此液至少在2个月内保持稳定。 3.7.2胆固醇标准常备液(100μg/L):吸取胆固醇标准储备液10L,用 冰乙酸定容至100mL。此液用时临时配制。 3.8铁矾显色剂。 8.1 铁矾储备液：溶解4.463g硫酸铁铵[FeL(S0,·H0]于100L85% 磷酸中，贮于干燥 器内，此液在室温中稳定。 8.2铁矾显色液：吸取铁矾储备液10L,用浓碗酸定容至100mL。贮于 干燥器内，以防吸水。 3.950%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。 3105第氯化敏溶腋， 弥取5 g氯化钠，用蒸馏水溶解， 并稀释至100mL。 3.11钢瓶氮气：纯度99.99% 仪器和设备 4.1实验室常用设备。 4.2721型分光光度计。 4.3电热恒温水浴。 4 电动振荡器 5 具玻塞试管：体积10L、25L。 5 操作步骤 5.1胆固醇标准线 中华人民共和国卫生部199408一10批准 1994一08-10实施
GB/T 15206—1994 中华人民共和国国家标准 食品中胆固醇的测定方法 Method for determination of cholesterol in foods GB/T 15206—1994 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。 本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。 2 原理 当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因 此可先对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中 胆固醇的含量。 3 试剂 全部试剂除注明外均匀分析纯，实验用水蒸馏水。 3．1 石油醚。 3．2 无水乙醇。 3．3 浓硫酸。 3．4 冰乙酸：优级纯。 3．5 磷酸。 3．6 胆固醇标准物质。 3．7 胆固醇标准液。 3．7．1 胆固醇标准储备液（1 mg/mL）：精确称取胆固醇 100 mg，溶于冰乙酸 中，并定容至 100 mL。此液至少在 2 个月内保持稳定。 3．7．2 胆固醇标准常备液（100μg/mL）：吸取胆固醇标准储备液 10 mL，用 冰乙酸定容至 100 mL。此液用时临时配制。 3．8 铁矾显色剂。 3．8．1 铁矾储备液：溶解 4.463 g 硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2·H2O]于 100 mL85% 磷酸中，贮于干燥器内，此液在室温中稳定。 3．8．2 铁矾显色液：吸取铁矾储备液 10 mL，用浓硫酸定容至 100 mL。贮于 干燥器内，以防吸水。 3．9 50%氢氧化钾溶液：称取 50 g 氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至 100 mL。 3．10 5%氯化钠溶液：称取 5 g 氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至 100 mL。 3．11 钢瓶氮气：纯度 99.99%。 4 仪器和设备 4．1 实验室常用设备。 4．2 721 型分光光度计。 4．3 电热恒温水浴。 4．4 电动振荡器。 4．5 具玻塞试管：体积 10 mL、25 mL。 5 操作步骤 5．1 胆固醇标准线 中华人民共和国卫生部 1994—08—10 批准 1994—08—10 实施
GB/T15206-1994 吸取胆固醇标准常备液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分别置于10l试管 内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达4L。沿管壁加入2L铁矾显色液，混 在15 90 in内， 在560 575m波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐 标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。 5.2样品测定 5.2.1食品脂肪的提取与测定 根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。 并计算出每100 g食品中的脂肪含量 5.2.2食品胆固醇的测定 将提取的油脂3~4滴（约含胆固醇300~500μg),置于25L试管内，准 确记录其重量。加入4mL无水乙醇，0.5mL50%氢氧化钾溶液，在65℃恒温水 浴中皂化1h。皂化时每隔20~30min振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出 试管，冷却。加入3l5%氯化钠溶液，10L石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡 器上振摇2min,静置分层( 般约需 1h以上)。 取上层石油醚液2mL,置于10mL具玻塞试管内，在65℃水浴中用氨气吹 干，加入4mL冰乙酸，2mL铁矾显色液，混匀，放置15min后在560~575nm 波长下比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。 6结果计算 P,×m, 1000 式中：X 样品中胆固醇含量，mg/100g: 测得的吸光度值在胆固醇标准线上显示的胆固醇含量，μg: 取出的石油醚体积， mL; m 称取食品油脂样品量，g: 食品样品油脂含量，g/100g: 1/100 一折算成每100g食品中胆固醇毫克数。 7平均允许误差 同 实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10% 8标准曲线 0.60 0.50 段0.40 度0.30 0.20 0.10 0.00 0 50 100 150200μg 胆固醇标准曲线 中华人民共和国卫生部1994一08一10批准 1994一08一10实施
GB/T 15206—1994 吸取胆固醇标准常备液 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL 分别置于 10 mL 试管 内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达 4 mL。沿管壁加入 2 mL 铁矾显色液，混 匀，在 15～90 min 内，在 560～575 nm 波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐 标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。 5．2 样品测定 5．2．1 食品脂肪的提取与测定 根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。 并计算出每 100 g 食品中的脂肪含量。 5．2．2 食品胆固醇的测定 将提取的油脂 3～4 滴（约含胆固醇 300～500μg），置于 25 mL 试管内，准 确记录其重量。加入 4 mL 无水乙醇，0.5 mL50%氢氧化钾溶液，在 65℃恒温水 浴中皂化 1 h。皂化时每隔 20～30 min 振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出 试管，冷却。加入 3 mL5%氯化钠溶液，10 mL 石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡 器上振摇 2 min，静置分层（一般约需 1 h 以上）。 取上层石油醚液 2 mL，置于 10 mL 具玻塞试管内，在 65℃水浴中用氮气吹 干，加入 4 mL 冰乙酸，2 mL 铁矾显色液，混匀，放置 15 min 后在 560～575 nm 波长下比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。 6 结果计算 1000 1 11 × × × × = mV cVm X 式中：X——样品中胆固醇含量，mg/100 g； m——测得的吸光度值在胆固醇标准线上显示的胆固醇含量，μg； V——石油醚总体积，mL； V1——取出的石油醚体积，mL； m1——称取食品油脂样品量，g； c——食品样品油脂含量，g/100 g； 1/1000——折算成每 100 g 食品中胆固醇毫克数。 7 平均允许误差 同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的 10%。 8 标准曲线 胆固醇标准曲线 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0 50 100 150 200μg 吸 光 度 中华人民共和国卫生部 1994—08—10 批准 1994—08—10 实施
GB/T15206-1994 测定时间 胆固醇，g 1985 1990 1991 0.132 0.130 0.130 100 0.225 0.260 0.255 150 0.390 0.390 0.390 200 0.515 0.510 0.513 注：表中每个值均为三个测定值的平均值。 附如说明： 本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准由中国预防医学院营养与食品卫生研究所负责起草。 本标准主要起草人王春荣、张坚、王苹、范文洵。 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。 中华人民共和国卫生部1994一08一10批准 1994-08-10实施
GB/T 15206—1994 测定时间 胆固醇，μg 1985 1990 1991 50 0.132 0.130 0.130 100 0.225 0.260 0.255 150 0.390 0.390 0.390 200 0.515 0.510 0.513 注：表中每个值均为三个测定值的平均值。 附加说明： 本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准由中国预防医学院营养与食品卫生研究所负责起草。 本标准主要起草人王春荣、张坚、王苹、范文洵。 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。 中华人民共和国卫生部 1994—08—10 批准 1994—08—10 实施