中华人民共和国国家标准 食物中维生素A和推生素E的测定方法 1主愿内容与适用藏国 本标准规定了用高效液相色谱法测定食物中隆生素A和雄生素E。 本标准适用于食物中推生素A和推生素E的测定。 第一篇高效液相色油法 2原埋 样品中的隆生素A及最生素E经电化提取处理后，将其从不可电化都分提取至 有机溶剂中。月高效液相色谱法©18反相柱将推生素A和滩生素E分离。经繁外检 测器检测。并用内标法定量测定。最小校出量分别为：V:0,8g-七：91.8ng图 Y-E:366ng:6-E:20.6mg 3试剂 实验用水为蒸帽水。试剂不加说明为分析纯。 3.1无水乙醚：不含有过氧化物。 3.1,1过氧化物检查方法：用5.乙醚加110%碘化钾溶液，振摇1ain·如 有过氧化物则成出游离偏，水层呈黄色或如4滴0.5研淀粉液。水层呈背色。该乙 瑟需处理后使用， 3.1.2去除过氧化物的方法：重燕乙时.瓶中放人纯肤丝或铁未少许。弃去 1初帽液和1G作残幅液。 3.2无水乙醇：不得含有醛类物质。 3,2.1检查方法：取2L很氨溶液于试管中，加入少量乙醇。据匀。再加入 1顶氢氧化钠溶液，如热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。 3,2.2殿醛方法：取2g硝酸根溶于少量水中。取4g氯氧化的溶于温乙醇中。 将两者顿入儿乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时据动，促选反的，经过滤， 置蒸馆瓶中蒸馆。弃去初蒸出的50。当乙醇中含醛较多时。硝酸银用量适当增加， 3.3无水硫酸钠- 3,4甲醇，重蒸后使用。 3·5重蒸水：水中加少量高红酸钾，：路用酸蒸馏。 3·610%抗坏血酸溶液(m/W):临用前配制
中华人民共和国国家标准 食物中维生素 A 和维生素 E 的测定方法 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定食物中维生素 A 和维生素 E。 本标准适用于食物中维生素 A 和维生素 E 的测定。 第一篇高效液相色谱法 2 原埋 样品中的维生素 A 及维生素 E 经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至 有机溶剂中。用高效液相色谱法 c18 反相柱将维生素 A 和维生素 E 分离，经紫外检 测器检测，并用内标法定量测定。最小检出量分别为：V:0．8ng：a-E：9l．8ng： γ-E:36.6ng:δ-E:20.6ng. 3 试剂 实验用水为蒸馏水。试剂不加说明为分析纯。 3．1 无水乙醚：不含有过氧化物。 3．1，1 过氧化物检查方法：用 5mL 乙醚加 1mL10%碘化钾溶液，振摇 1min·如 有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加 4 滴 0．5%淀粉液，水层呈蓝色。该乙 醚需处理后使用。 3．1。2 去除过氧化物的方法；重蒸乙醚时．瓶中放人纯铁丝或铁未少许。弃去 10%初馏液和 10%残馏液。 3．2 无水乙醇：不得含有醛类物质。 3．2．1 检查方法：取 2mL 银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入 10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。 3．2．2 脱醛方法：取 2g 硝酸银溶于少量水中。取 4g 氢氧化钠溶于温乙醇中。 将两者倾入 1L 乙醇中，振摇后，放置暗处两天(不时摇动，促进反应)，经过滤， 置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的 50mL。当乙醇中含醛较多时．硝酸银用量适当增加。 3．3 无水硫酸钠。 3．4 甲醇：重蒸后使用。 3·5 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，；临用前蒸馏。 3·610%抗坏血酸溶液（m/V）：临用前配制
3,71:1氢氧化钾溶液， 3·810m氢氧化钠溶液(a/y》。 3.95阶酸恨溶液(/y)。 3·10鼠氨溶液：加氨水至隆硝酸根溶液中，直至生成的沉淀重新溶解为止， 再加1心氢氧化销溶液数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解， 3·11推生素A标准液：视黄醇（纯度85韩）或视黄醇乙酸酯（纯度90m)经皂化处理 后使用。用税醛乙酵溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1山相当于 1g祝黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度. 3·12雄生素E标准脑：a一生育酚（纯度95），丫-生有酚95)6-生有酚（纯 度5)》。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约 为1相当于【暖，临用前用紫外分光光度分别标定此三种推生素E的准确浓度。 3·13内标溶液：移取苯并[®]能（纯度9），用盼醛乙醇配制成每1L相 当10可g苯并[e]芘的内标溶液。 3.14p一14试纸， 4仪器和设备 4.1实验室常用设备 4·2高压液相色罐仪带黄外分光检测器。 4.3旋转满发器. 4,4高速离心机 4.4.1小离心管：具塑料盖1.5一3.0ml塑料离心管（与高速离心机配套）. 4.5高纯氯气. 4.6恒温水浴锅。 4,了餐外分完光度计。 5操作步墨 5.1样品处理 5.1,1皂化 称取1一10%样品《含维生素A约3ng,维生素E各异构体约为40ng于 皂化瓶中，如30无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。如5 10作抗坏血酸，苯并[©】花标准液2·00，混匀。10l1:1氢氧化钾，混匀。 于沸水浴巨蓬30mi使皂化完全。皂化后立即做人冰水中冷却
3．7l：l 氢氧化钾溶液. 3·8l0%氢氧化钠溶液（m/v）。 3．95%硝酸银溶液（m/v）。 3·10 银氨溶液：加氨水至 5%硝酸银溶液中，直至生成的沉淀重新溶解为止， 再加 10%氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。 3·11 维生素 A 标准液：视黄醇（纯度 85%）或视黄醇乙酸酯（纯度 90%）经皂化处理 后使用。用脱醛乙酵溶解维生素 A 标准品，使其浓度大约为 1mL 相当于 1mg 视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度. 3·12 维生素 E 标准脑:a-生育酚(纯度 95%)，丫-生育酚(95%)δ-生育酚（纯 度 95%)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素 E 标准品，使其浓度大约 为 1mL 相当于 1mg。临用前用紫外分光光度分别标定此三种维生素 E 的准确浓度。 3·13 内标溶液：称取苯并[e]芘（纯度 98%），用盼醛乙醇配制成每 1mL 相 当 10ηg 苯并［e］芘的内标溶液。 3．14pHl 一 14 试纸， 4 仪器和设备 4．1 实验室常用设备 4·2 高压液相色谱仪带紫外分光检测器。 4．3 旋转蒸发器。 4．4 高速离心机 4．4．1 小离心管：具塑料盖 1．5 一 3．0mL 塑料离心管（与高速离心机配套）。 4．5 高纯氮气。 4．6 恒温水浴锅。 4．7 紫外分光光度计。 5 操作步骤 5．1 样品处理 5．1．1 皂化 称取 1～10g 样品（含维生素 A 约 3ηg，维生素 E 各异构体约为 40ηg 于 皂化瓶中，加 30mL 无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加 5mL 10%抗坏血酸，苯并[e]芘标准液 2·00mL，混匀。10mL1：1 氢氧化钾，混匀。 于沸水浴回流 30min 使皂化完全。皂化后立即放人冰水中冷却
5.1.2提取 5.1.2.1将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50山水分2一3☆洗皂化瓶， 洗液并入分液漏斗中。用釣100L乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙酷液并入 分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤人分液漏斗， 轻轻振摇分表漏斗2▣in,静置分层，弃去水层. 5.1.3洗涤 5.1.3.1用的50L水洗分液漏斗中的乙醚层，用H试纸检验直至水层不 显碱性（最初水洗轻摇，逐次叛瑶强度可增加）。 5,1,4馏 5.1.4.1将乙醚提取液经过无水硫酸钠（的5》滤人与炭转发器配套的 250一300L.球形燕发瓶内，用约100L乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并 入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于55℃水济中减压蒸馏并回收乙随，特 瓶中剩下约2L乙醒时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。立即加入2,0L 乙醇，充分混合，帝解提取物 &1.5将乙醇液移人一小塑料离心管中(4.4.1)。离心：5mlm(5000rm)。 上清液供色灌分析。如果样品中维生素含量过少，可用氯气将乙醇液吹干后，再 用乙醇重新定容。并记下体积比， 5.2标准曲找的制备 5,2.1推生素A和维生素E标准浓度的标定方法 取雀生素A和各维生素E标准液若干微升，分别稀释至3.00L.乙醇中，并分别按给定 波长测定各推生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。 测定条件如下表所示 表1 1标准|加人标准的量|比吸光系数|波长 I IsLIEI%nI 1视黄醇110.00118351251 1￥-生有酚1100.0171194 16-生有酚1100.0192.812981
5．1．2 提取 5．1．2．1 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用 50mL 水分 2 一 3 次洗皂化瓶， 洗液并入分液漏斗中。用约 100mL 乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并入 分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤人分液漏斗。 轻轻振摇分液漏斗 2min，静置分层，弃去水层。 5．1．3 洗涤 5．1．3．1 用约 50mL 水洗分液漏斗中的乙醚层，用 pH 试纸检验直至水层不 显碱性（最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加）。 5．1．4 浓缩 5．1．4。1 将乙醚提取液经过无水硫酸钠(约 5g)滤人与旋转蒸发器配套的 250～300mL 球形蒸发瓶内，用约 100mL 乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠 3 次，并 入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于 55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待 瓶中剩下约 2mL 乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。立即加入 2．00mL 乙醇，充分混合，溶解提取物。 5.1．5 将乙醇液移人一小塑料离心管中（4．4．1）．离心：5mIn（5000rpm）。 上清液供色谱分析。如果样品中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，再 用乙醇重新定容。并记下体积比。 5．2 标准曲线的制备 5．2．1 维生素 A 和维生素 E 标准浓度的标定方法 取维生素 A 和各维生素 E 标准液若干微升，分别稀释至 3．00mL 乙醇中，并分别按给定 波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。 测定条件如下表所示 表 1 ┌─────┬──────┬─────┬───┐ │标准│加人标准的量│比吸光系数│波长│ ││sηL│E1%cm││ ├─────┼──────┼─────┼───┤ │视黄醇│10.00│1835│25│ │γ-生育酚│100.0│71│94│ │δ-生育酚│100.0│92．8│298│
1a-生有酚1100.0191.21298| 浓度计算： A13.00 -X- E1005×10-1 式中：S1一—一某推生素浓度，/l 维生素的平均紫外吸光值： 如入标准的量，身L E一某种推生素1比吸光系数： 300 标流液稀释倍数 S×10 5,2.2标准由线的制备 本方法采用内标法定量。把一定量的隆生素A、ā一生有酚、B一生育酚、8-生有酚及 内标苯并[]花液混合均匀。选择合适灵敏度，使上述物质的各峰高钓为满量程 T%。为高浓度点，高浓度的一为低浓度点（其内标苯并[]花的沫度值不变）。用 此 2 种浓度的混合标准进行色滞分析，结果见色谢图。维生素标准曲线绘制是以推生素峰面 积与内标物峰面积之比为飙坐标，维生素浓度为核坐标绘制，减计算直线回归方程。如有微 处理机装置，则按仪器说明用二点内标法透行定量。 本方法不能将B-E和Y-E分开，放Y-E峰中包含有B-E峰。 5,3高效液相色袖分析 5.3.1色谱条件（推荐条件） 5.3.1.1谈柱：ultrasphere00S10nn4m*4.5cn 5.3.1.2分析柱：ultrasph0rc0063n具4.6mm*25 5.3.1.3流动相：甲醇：水=98：2。混匀。于监用简脱气。 5.3.1.4装外险测器波长：300nn。量程0.02
│α－生育酚│100.0│91．2│298│ └─────┴──────┴─────┴───┘ 浓度计算： A13．00 X1=-------×---------×-----------------……………………………（1） E100S×10-1 式中：S1---------某维生素浓度，g/mL； A----------维生素的平均紫外吸光值； S----------加入标准的量，ηL， E----------某种维生素 1%比吸光系数； 3.00 ---------------------标准液稀释倍数 S×10 5．2．2 标准曲线的制备 本方法采用内标法定量。把一定量的维生素 A、α-生育酚、β-生育酚、δ-生育酚及 内标苯并[E]芘液混合均匀。选择合适灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程 1 70%，为高浓度点。高浓度的-----为低浓度点(其内标苯并［e］芘的浓度值不变)．用 此 2 种浓度的混合标准进行色谱分析，结果见色谱图。维生素标准曲线绘制是以维生素峰面 积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素浓度为模坐标绘制，或计算直线回归方程。如有微 处理机装置，则按仪器说明用二点内标法进行定量。 本方法不能将β-E 和γ-E 分开，故γ-E 峰中包含有β-E 峰。 5．3 高效液相色谱分析 5．3．1 色谱条件（推荐条件） 5．3．1．1 预柱：ultrasphereODS10ηm,4mm*4.5cm 5．3．1.2 分析柱：ultrasphereODS5ηm,4.6mm*25cm 5．3．1．3 流动相：甲醇：水=98：2。混匀。于临用前脱气。 5．3．1.4 紫外硷测器波长：300nm。量程 0．02
5,3.1,5进样量：20nL. 5.3.1.6流速：1,7l/ln 5,4样品分析 取样品浓缩液2]几L,待绘制出色谱图及色灌参数后，再进行定性和定量。 5.4.1定性：用标准物色语峰的保留时间定性。 5,4,2定量：根据色请图求出某种推生素峰面积与内标物峰面积的比值，以此值在标 准曲线上查到其含量。或用目归方程求出其含量。 6计算 e 2 式中，2一某种维生素的含量，/1000 c一由标准由线上查到某种维生素含量，可/L: 了-样品浓缩定容体积，： ■一样品质量，g: 用微处理机二点内标法遗行计算时.按其计算公式计算或由微机直接给出结果。 7结果的允许差 同一实验室，同时测定或重复测定结果相对偏差绝对植≤1风 第二篇比色法 8原理 推生素A在三氧甲统中与三氯化梯相互作用，产生竖色物质，其深浅与溶液中所含维生 素A的含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620 ■波长处测定其吸光度。 9试剂 本实险用水均为燕篇水 9,1无水硫酸钠：月3.3， 9.2乙酸酐。 9.3乙随：月3.1. 9.4无水乙醇：同3.2， 9,5三氯甲烷：应不含分解物，否则会破坏维生素九
5．3．1．5 进样量：20ηL。 5．3．1．6 流速：1．7mL/mln 5．4 样品分析 取样品浓缩液 20lηL，待绘制出色谱图及色谱参数后，再进行定性和定量。 5．4．1 定性：用标准物色谱峰的保留时间定性。 5．4.2 定量：根据色谱图求出某种维生素峰面积与内标物峰面积的比值，以此值在标 准曲线上查到其含量。或用回归方程求出其含量。 6 计算 c X2=------……………………………………（2） m 式中：X2 一某种维生素的含量，mg/l000： c 一由标准曲线上查到某种维生素含量，ηg/mL； V-样品浓缩定容体积，mL； m 一样品质量，g; 用微处理机二点内标法进行计算时．按其计算公式计算或由微机直接给出结果。 7 结果的允许差 同一实验室，同时测定或重复测定结果相对偏差绝对值≤10% 第二篇比色法 8 原理 维生素 A 在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生 素 A 的含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于 620 nm 波长处测定其吸光度。 9 试剂 本实验用水均为蒸馏水。 9．1 无水硫酸钠：同 3．3。 9．2 乙酸酐。 9．3 乙醚：同 3．1。 9．4 无水乙醇：同 3．2。 9．5 三氯甲烷；应不含分解物，否则会破坏维生素 A
9.5.1检查方法 三氧甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成氯化氢和光气。检查时可取少量三氯 甲烷置试管中加水少许振据。使氯化氢溶到水层。加人几滴硝酸肌液，如有白色沉淀即说明 三氯甲烷中有分解产物： 9.5.2处理方法 试剂应先测验是否含有分解产物，如有，则应于分液漏斗中加水洗数次，加无水硫酸钠 或氯化钙使之殿水，然后盛馏。 9.625%三氧化梯一三氯甲烷溶液：用王氯甲烷配制25%三氧化梯溶液，储于棕色瓶中 (注意勿使吸收水分》： 9.71:1氢氧化钾溶液。 0.8推生素A或祝黄醇乙酸酯标准液：同3.11。其标定方法同5.2.1. 9.9附酞指示剂：用95乙醇配制1溶液。 10仪器和设备 10.1实铃室常用设备. 10.2分光光度计， 10.3回流冷凝装置。 11操作步覆 推生素A极易被光破环，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪图。 1山，1样品处理根据样品性质，可采用皂化法成研备法。 1山.1.1皂化法：近用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干找，但全 部试验过程费时，且易导致推生素A视失。 11.1.1.1皂化：根据样品中维生素A含量的不月，称取0.5一5g样品于三角瓶中， 加入101：1氢氧化钾及2040.乙醇，于电格板上国流30mn至皂化完全为止 1山.1.1.2提取：将皂化瓶内混合物移至分液漏斗中，以30L水洗皂化瓶，洗液并 入分液漏斗。如有渣子，可用酸脂棉漏斗滤人分液漏斗内。用50L乙健分二次洗皂化瓶， 洗液并入分液漏斗中。振摇并注意放气，静置分层后。水层放人第二个分液漏斗内。皂化瓶 再用约30L乙瑟分二次冲洗，洗液顿人第二个分液漏斗中。振据后，静置分层，水层放人 三角粗中，酰层与第一个分液漏年合并。重复至水液中无维生素A为止。 1山.1,1.3洗涤：用约30l.水如入第一个分液漏斗中，轻轻振摇，静置片刻后，放 去水层。加15一200,501/1氢氧化钾液于分液漏斗中，轻轻振据后，弃去下层碱液·除
9．5．1 检查方法 三氯甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成氯化氢和光气。检查时可取少量三氯 甲烷置试管中加水少许振摇，使氯化氢溶到水层。加人几滴硝酸银液，如有白色沉淀即说明 三氯甲烷中有分解产物。 9．5．2 处理方法 试剂应先测验是否含有分解产物，如有，则应于分液漏斗中加水洗数次，加无水硫酸钠 或氯化钙使之脱水，然后蒸馏。 9．625%三氯化锑－三氯甲烷溶液：用王氯甲烷配制 25%三氯化锑溶液，储于棕色瓶中 （注意勿使吸收水分）。 9．71：l 氢氧化钾溶液。 0．8 维生素 A 或视黄醇乙酸酯标准液：同 3．ll。其标定方法同 5．2．1。 9．9 酚酞指示剂：用 95%乙醇配制 1%溶液。 10 仪器和设备 10．1 实验室常用设备。 10．2 分光光度计。 10．3 回流冷凝装置。 11 操作步骤 维生素 A 极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。 ll．1 样品处理：根据样品性质，可采用皂化法或研磨法。 11．1．1 皂化法：适用于维生素 A 含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全 部试验过程费时，且易导致维生素 A 损失。 1l．1．1．1 皂化：根据样品中维生素 A 含量的不同，称取 0．5 一 5g 样品于三角瓶中， 加入 10mL1：1 氢氧化钾及 20～40mL 乙醇，于电热板上回流 30min 至皂化完全为止。 11．1．1．2 提取：将皂化瓶内混合物移至分液漏斗中，以 30mL 水洗皂化瓶，洗液并 入分液漏斗。如有渣子，可用脱脂棉漏斗滤人分液漏斗内。用 50mL 乙醚分二次洗皂化瓶， 洗液并入分液漏斗中。振摇并注意放气，静置分层后，水层放人第二个分液漏斗内。皂化瓶 再用约 30mL 乙醚分二次冲洗，洗液倾人第二个分液漏斗中。振摇后，静置分层，水层放人 三角瓶中，醚层与第一个分液漏斗合并。重复至水液中无维生素 A 为止。 11．1．1．3 洗涤：用约 30mL 水加入第一个分液漏斗中，轻轻振摇，静置片刻后，放 去水层。加 15～20mL0．5mol／l 氢氧化钾液于分液漏斗中，轻轻振摇后，弃去下层碱液·除
去醚溶性酸皂。蝶续用水洗涤，每次用水约30阳】直至洗涤液与酚酞指示剂呈无色为止：《大 的3次)。醚层液静置10一20ain,小心故出析出的水。 1山.1.1.4浓馏：将醚层液经过无水磺酸销滤入三角瓶中，再用约251乙醚冲洗分 液漏斗和陶酸销两次，洗液并入三角瓶内。置水浴上蒸馆，收回乙酰。待瓶中剩的5和】乙醚 时取下，用减压抽气法至干。立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中推生素A含量在适宜浓度 范国内。 11.1,2研磨法：适用于每克样品裤生素A含量大于5一10#g样品的测定，如肝的 分析。 步骤简单，省时，。结果淮确。 11.1,2.1研磨：精确称2一5a样品，放人盛有3一5倍样品重量的无水硫酸钠研体 中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。 1山.1.2.2提取：小心地将全部均质化样品移入带盖的三角篇内，准确如入0一100m 乙隧。紧压盖子，用力据摇2，使样品中排生素A溶于乙魅中。使其自行澄清（大约需1 一)，暖离心澄清（因乙瑟易挥发，气温高时应在冷水浴中操作。装乙陆的试制瓶也应事 先成人冷水浴中)。 11.1.2.3浓馏：取渣清提取乙艇液2一5a1,放人比色管中，在70一80℃水浴上 抽气减干。立即如入1L三氯甲烷溶解残渣。 2测定步墨 12.1标准曲线的制备 准确取一定量的雀生素A标准液于4一5个容量系中，以三氯甲烷配制标准系列，再取 相同数量比色管顺次取】三氯甲烷和标准系列使月液1，各管加入乙酸酐1 滴。制成标准比色列。于20加■波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色 列按顺序移人光路前，迅速加入9如1三氧化梯一三氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度，将吸 光度为纵坐标。以推生素A含量为桶坐标绘制标准由线图。 12.2样品测定 于一比色管中加入10L三氧甲烷，如入1滴乙酸断为空白液。另一比色管中加入1L 三氯甲烷，其余比色管中分别如入1样品溶液及1滴乙酸酐.其余步撑同标准曲线的制备。 13计算 c100 -一XYX- 一1n(3
去醚溶性酸皂。继续用水洗涤，每次用水约 30ml 直至洗涤液与酚酞指示剂呈无色为止（大 约 3 次）。醚层液静置 10 一 20min，小心放出析出的水。 ll．1．1．4 浓缩：将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约 25ml 乙醚冲洗分 液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。置水浴上蒸馏，收回乙醚。待瓶中剩约 5ml 乙醚 时取下，用减压抽气法至干，立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中维生素 A 含量在适宜浓度 范围内。 11．1．2 研磨法：适用于每克样品维生素 A 含量大于 5 一 10μg 样品的测定，如肝的 分析。 步骤简单，省时，结果准确。 ll．1．2．1 研磨：精确称 2～5g 样品，放人盛有 3～5 倍样品重量的无水硫酸钠研钵 中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。 11．1．2．2 提取：小心地将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内，准确加入 50 一 100ml 乙醚。紧压盖子，用力振摇 2min，使样品中维生素 A 溶于乙醚中。使其自行澄清（大约需 1 一 2h)，或离心澄清（因乙醚易挥发，气温高时应在冷水浴中操作。装乙醚的试剂瓶也应事 先放人冷水浴中）。 11．1．2．3 浓缩：取澄清提取乙醚液 2 一 5ml，放人比色管中，在 70 一 80℃水浴上 抽气蒸干。立即加入 1mL 三氯甲烷溶解残渣。 2 测定步骤 12．1 标准曲线的制备 准确取一定量的维生素 A 标准液于 4 一 5 个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。再取 相同数量比色管顺次取 1ml 三氯甲烷和标准系列使用液 1ml，各管加入乙酸酐 1 滴，制成标准比色列。于 620nm 波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色 列按顺序移人光路前，迅速加入 9ml 三氯化锑－三氯甲烷溶液。于 6s 内测定吸光度，将吸 光度为纵坐标，以维生素 A 含量为横坐标绘制标准曲线图。 12．2 样品测定 于一比色管中加入 l0mL 三氯甲烷，加入 1 滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入 1mL 三氯甲烷，其余比色管中分别加入 1ml 样品溶液及 1 滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备。 13 计算 c100 x=---×V×------……………………………………(3)
a1000 式中，X一样晶中含推生素A的量，/100（如按国际单位， 每1国际单位=0,3μ推生素A): ©一由标准曲线上查得样品中含维生素A的含量，u/L ■一样品质量，： ￥一提取后加三氯甲统定量之体积，1 100一以每百克样品计
m1000 式中：X 一样品中含维生素 A 的量，mg/l00g（如按国际单位， 每 1 国际单位=0．3μg 维生素 A)； c 一由标准曲线上查得样品中含维生素 A 的含量，μg/mL； m 一样品质量，g; V 一提取后加三氯甲烷定量之体积，ml 100 一以每百克样品计