GB/T8312-2002 前 言 本标准是对GB/T83】2一1987《茶物非碱的测定的修订，本标准“第一法高效凌相色游法”等 效朵用1S010727:1995(高效液相色讲法测定燕和固态速溶茶中的知时戴含量》. 本标准与5010727：1995的主婴差并是，将等教采用的[S010727:1995方法作为本标准的第 一法。 本标准与GB/T8312一1987的主要差异是：增加了第一法高效液相色谐齿，并裤GB/T8312一 187中“紫外分光光度法”作为本标准的第二法。 本标准第一法和第二法可获得相同的结果。 木标准自实焦之日起，同时代特GB/T8312一197. 本标准由中华金国供精合指总社提白， 本标准由中华全国供钠合作总社杭州茶叶研究院白口， 本标准起草单位：中华全国供销合作总吐杭州茶叶研究统， 本标准主要悬草人：周卫龙孙安华、钟草。 本标准由中华全国供镇合作总社筑州茶叶研究院负费解释。 144
GB/' r 8312-2002 前 言 本标准是对GB/T 8312-1987《茶 咖啡碱的测定》的修订。本标准“第一法 高效液相色谱法”等 效采用ISO 10727:1995((高效液相色谱法测定茶和固态速溶茶中的咖啡碱含量》。 本标准与 ISO 10727:1995的主要差异是:将等效采用的 ISO 10727:1995方法作为本标准的第 一法 。 本标准与 GB/T 8312-1987的主要差异是:增加了第一法高效液相色谱法，并将 GB/T 8312- 1987中“紫外分光光度法”作为本标准的第二法。 本标准第一法和第二法可获得相同的结果。 本标准自实施之日起，同时代替GB/T 8312-1987, 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院归口。 本标准起草单位:中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。 本标准主要起草人:周卫龙、孙安华、钟萝。 本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院负责解释
GB/T8312-2002 IS0前言 1)(国际标准化组织)是一个各国标准优组凯机构(130成员出体)的国际性联望。通常割定国际 标准的工作是由S0技术委员会承担，每个战员闭体如有英厘，都有权成为孩溪目委层金的代表，与 1S)有联系的官方或律官方的国际标准组织也鑫与工作，S0与国际电工委员会(C)在电工标霍文件 紧密合作。 技术委员会所采纳的国际标准草案提交各成员团体表决，国际标准的出医必氰散得不少干收员团 体75%的赞成蔡. 国际标准1S010727是由IS0/TC34农产食品技术委员会制定。 属际标准S)10727的附求A和用录B仅供参考。 145
GB/T 8312-2002 ISO前言 ISO(国际标准化组织)是一个各国标准化组织机构(ISO成员团体)的国际性联盟。通常制定国际 标准的7一作是由ISO技术委员会承担，每个成员团体如有兴趣，都有权成为该项目委员会的代表，与 ISO有联系的官方或非官方的国际标准组织也参与工作 ISO与国际电工委员会(IEC)在电工标准文件 紧密合作 技术委员会所采纳的国际标准草案提交各成员团体表决，国际标准的出版必须取得不少于成员团 体75环的赞成票。 国际标准ISO 10727是由ISO/TC34农产食品技术委员会制定。 国际标准IS) 10727的附录A和附录B仅供参考
中华人民共和国国家标准 GB/T8312-2002 茶 咖啡碱测定 eqv5010727,1995 代替GB/T93121987 Tea-Determination of eaffeine content 1范国 本标准规定了用高效液相色讲法，紫外分光光厦法封茶叶中如叶戴测定的原理，仪器和用具，试剂 和溶液，操作方法及结果计算方法 本怀准适用于茶叶中咖啡碱的测定。 2引用标准 下列标准断包食的条文，通过在本标准中引用面构成为木标准的条文。本标准出版时，所示做本均 为有效。所有标准椰会蔽修订，使用本标准的各方应探材使用下到标准最新板本的可能性， G1B/T8302一2002茶取样 GB/T8303一2002茶磨醉甘样的制备及其干物质含量测定 第一法高效液相色灌法 3原 誉叶中则啡城经沸水和氧化程合提取后，经高效液相色前仪，C,分离柱，紧外检测器检测，与标 准系列比较定量。 《位器和用具 实验室常规仅器及下列各项： 4,1高效被相色进仪。 4.2紫外检测卷：检图放长280m。 43分析柱C,(ODS柱). 44分析天平：感量0.0001g 5试剂和溶凌 甲醇为色谐纯，水为重蒸⑧水。 51氧化钱：分析纯。 52高效液相色谱流动相：取600mL甲醇例人1400m1.重馏水，混匀，聪气。 5.3咖啡碱标在液：称取125mg壶垂碱（纯度不低于99⅓）如乙醇：水(114》溶解，定容至50ml 使用时，特标准流系室后，取2ml.扣水至100mL.作为工作液. 6操作方法 区1数样 中华人民共和国国家质量监置检验检度总局2002-06-17批准 2002.12.01实施 14G
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 茶 咖啡碱测定 GB/T 8312--2002 e4v ISO 10727:1995 Tea- Determination of caffeine content 代替 Gt4/T 8312 1987 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法、紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、仪器和用具、试剂 和溶液、操作方法及结果计算方法。 本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性 GB/T 8302-2002 茶 取样 GB/T 8303-2002 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定 第一法 高效液相色谱法 3 原理 茶叶中咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后，经高效液相色谱仪、C。分离柱、紫外检测器检测，与标 准系列比较定量。 4 仪器 和用具 实验室常规仪器及下列各项: 4.1 高效液相色谱仪。 4.2 紫外检测器:检测波长 280 nm 4.3 分析柱:C,a (ODS柱)。 4.4 分析天平:感量 0. 000 1 K e 5 试荆和溶液 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。 5，， 氧化镁:分析纯。 5.2 高效液相色谱流动相:取 600 mL甲醇倒人 1 400 m工重蒸馏水，混匀，脱气。 5. 3 咖啡碱标准液:称取 125 mg咖啡碱(纯度不低于 ”%)加乙醇 :水(1:4)溶解，定容至 250 m工 使用时，待标准液至室温后，取 2 m工加水至 100 mL作为工作液。 6 操作方法 6.1 取样 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局 2002-06-17批准 2002一12一01实施
GB/T8312-2002 按GB/T830m的规定， 6.2试样制备 按GB/丁8303的规是. 6.3测定步混 6.3.1其液制备 称取1.0g(准确至0.0001黑》密辞茶样(6,2)，骨于500ml.烧瓶中，加名5R氧化铁及300mL,拂 水，于沸水浴中加热，浸提20mi(每隔5mi加播动一次)，浸樱完华后文即趁格减压过德，滤液移人 500mL存量瓶中，冷却后，用水泥容至刻度，混匀。取一部分试液，酒过Q.45m独痕过滤，棒用。 6.3.2色淋条件 6.3.2.1检测波长：常外检测播.波长280nm。 63.2.2瓶动相，水：甲静的体积分数为7：3. 63.2.3流速：0.5mL/minl.5mL./min。 63.2.4柱盟：40℃. 63.2.5进样量：10L.一204l. 63.3测定 在确吸取料备液(6.3.1)10L一20L,注人高效液相色语仅，并用如时减标准液5.3)别作标准曲 线，进行色请测定。 7结果计算 了.1计算方法 比较试样和标准样的峰面积，按式(1)计算： c,×L 有啡装(%)=×m,X000X100nm(1》 式中：C,一测定液中室啡碱含量g L,—一样品总体积，mL 4一进棒体积L M一一试样的质量，g: m:一试样干物质含量，%。 如果符合重复性（⑦，2）的要求，取两次测定的算术平均侦作为结果，结果绿留小数点后一位 7.2重复性 同一样品的两次测定值之差：每100g试样不初超过0,2g。 第二法紫外分光光度法 8原建 系叶中的面时碱易溶于水，除去干扰物质后，用特定波长测定其含量。 9仅适和用具 实验堂常规仪益及下列各项： 91:外分光光度仅。 9.2分析天平：感量0001最 147
GB/' r 8312-2002 按 GB/T 8302的规定。 6.2 试样制备 按 GB/T 8303的规定。 6.3 测定步骤 6.3.1 试液制备 称取 1.0 g(准确至0. 000 1 g)磨碎茶样(6.2),置于500 ml,烧瓶中.加4.5 g氧化镁及 300 ml沸 水，于沸水浴中加热，浸提 20 min每隔 5 min摇动一次)，浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移入 500 mL容量瓶中，冷却后，用水定容至刻度，混匀。取一部分试液，通过。.45 pm滤膜过滤，待用 6. 3.2 色谱条件 6.3-2.1 检测波长:紫外检测器，波长 280 nmo 6.3-2.2 流动相:水 :甲醇的体积分数为 7:3, 6.3.2.3 流速:0. 5 mL/min一1. 5 mL/min 6.3-2.4 柱温;40 C。 6. 3.2. 5 进样量:10 pL---20 1A 6.13 测定 准确吸取制备液(6-3. 1)10 pL-20川一，注人高效液相色谱仪，并用咖啡碱标准液(5.3)制作标准曲 线，进行色谱测定 了 结果计算 了门 计算方法 比较试样和标准样的峰面积，按式(L)计算: 咖啡碱(%)= M:X m,只 1 000 又 100 ··。·····。···············… … (1) 几X 一么 C 式中:C}一 一测定液中咖啡碱含量，Kg; L,一 一样品总体积 ，mL; L2— 进样体积，1'L; M 一一试样的质量，9; 川.— 试样干物质含量，% 如果符合重复性(7-2)的要求，取两次测定的算术平均值作为结果，结果保留小数点后一位。 了.2 重复性 同一样品的两次测定值之差，每 100 g试样不得超过 。. 2 g. 第二法 紫外分光光度法 8 原理 茶叶中的咖啡碱易溶于水，除去干扰物质后，用特定波长测定其含量。 9 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项: 9.1 紫外分光光度仪。 9.2 分析天平:感量 。0.o0011R
GB/T8312-2002 10试剂和溶液 所用试利应为分析纯(AR),水为燕南水， 101城式乙酸船溶液，称收50g威式乙酸铅，加本100ml.静置连夜，领出上清液过德， 10.2盐酸：0.01m©l/L.溶藏，取0,9ml漆盐酸，用水稀释1L,摇匀. 10.3硫散：4.5m©/几.溶液.取旅疏酸250mL,用水稀斯至1L摇匀 10.4咖啡碱标准液：称取10∞mg脚啡碱（纯发不低于9%）溶于100mL.水巾，作为母藏，准确吸发 5ml包水至10的mL作为工作液(1mL含室啡碱a.05mg). 11测定步潭 11.1试液割备 称取3g(南确至小.001g)磨醉试样(6.2)于500mL维形瓶中，知沸燕信水450mL,立即移人需水 浴中，浸提5mn(每隔10mn摇动一次)。浸提完毕后义即整株减压过德。就液移人500mL存量瓶 中，残清用少量热满馏水洗涤2一3次，井将使液边人上送容量丽中，冷却后用藏增水释师至刻度。 11-2用移流管准瑞吸取试流(1小.1)10ml.移人100mL帝量框中，加人4mla01ml/1.盐酸 (102)和1ml.碱式乙酸船静液(101)，用水稀释至刻度，混静置澄清过选，准确预数堂减25mL, 注人50ml,容量南中，知人0.1mL45al/1能酸溶液(103》，加水稀释至剩度，器匀，静置沿清过 地。用10mm比色杯，在被长2了4nm处，以试剂空自溶液作参比，测定吸光度《4》. 11,3如峰碱标准曲线的制作 分别吸取0,1.2,3,4,5,6mL血即城工作液(10,4)干一组25ml.容量瓶中，各如人1.0mL盐酸 (14.2),用水稀释至刻度，2匀，用10mm石英比色杯，在波长274m处，以试剂空白溶液作参比：刺定 装光度(A》。将衡得的吸光度与对应的脚啡碱藤虔栓制标准由线 12结果计算 茶叶中脚啡碱含量以干态质慧分数表示，按式(2)计算： m酸6)一1000X0×59 :X国： 2至1002） 式中，C:一根据试样周得的吸光度(A),从如啡碱标座由线上查得的★啡碱相成含量，mg/m L一试液总量，ml: M:一试样用量，R 两一一试样干物质含量，% 如果符合重复性(7,2，取两次衡定的算术平均值作为结菜，保留小数点后一位， 148
GB/T 8312-2002 10 试荆和溶液 所用试剂应为分析纯(AR)，水为蒸馏水。 10.1 碱式乙酸铅溶液:称取 50 g碱式乙酸铅，加水 100 ml，静置过夜，倾出上清液过滤。 10.2 盐酸:0.01 mot/L溶液，取 0. 9 ml浓盐酸，用水稀释1 L,摇匀 10.3 硫酸:4.5 mot儿 溶液，取浓硫酸 250 ml，用水稀释至 II，摇匀 10.4 咖啡碱标准液:称取 100 mg咖啡碱(纯度不低于 99%)溶于 100 ml水中，作为母液，准确吸取 5 ml,加水至100 mL作为工作液t1 rot含咖啡碱0.05 mg) 11 测定步骤 11飞 试液制备 称取3创准确至0. 001 g)磨碎试样(6-2)于500 mL锥形瓶中，加沸蒸馏水450 mL，立即移人沸水 浴中，浸提 45 min(每隔 10 min摇动一次、。浸提完毕后立即趁热减压过滤。滤液移入 500 ml容量瓶 中，残渣用少量热蒸馏水洗涤 2-3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度 11.2 用移液管准确吸取试液(It. 1)10 m工，移人 100 mL容f瓶中，加人 4 mt, 0. 01 mot/L盐酸 (10.2)和 1 ml碱式乙酸铅溶液(10.1)，用水稀释至刻度，提匀，静置澄清过滤，准确吸取滤液 25 mL, 注人 50 ml容量瓶中，加人。. 1 m工4.5 moll 硫酸溶液(10.3)，加水稀释至刻度，混匀，静置澄清过 滤。用 10 mm比色杯，在波长 274 nm处 以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)d 11.3 咖啡碱标准曲线的制作 分别吸取 。,1,2,3,4,5,6 ml,咖啡碱工作液(10.4)于一组 25 ml容量瓶中，各加人 1. 0 mL盐酸 (10.2),用水稀释至刻度，混匀，用10 mm石英比色杯，在波长274 nm处，以试剂空自溶液作参比，测定 吸光度(A) 将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线 12 结果计算 茶叶中咖啡碱含量以干态质量分数表示，按式(2)计算; 式中:C, I 咖啡碱(%) 一根据试样测得的吸光度(A) C,·La 1000 _5205 M X m, 又 100 。·。··。 ···… … (2) ，从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量,mg/mLt 试液总量，ml; M。一一试样用量，9; m:一 试样干物质含量,% 如果符合重复性(7.2)，取两次测定的算术平均值作为结果，保留小数点后一位