肌糖元的酵解作用 实验目的 1.学习检定糖酵解作用的原理和方法 ■2.了解糖酵解作用在糖代谢过程中的地 位及生理意义
肌糖元的酵解作用 ◼ 实验目的 ◼ 1. 学习检定糖酵解作用的原理和方法 ◼ 2. 了解糖酵解作用在糖代谢过程中的地 位及生理意义
■实验原理 ■在动物、植物、微生物等许多生物机体內,糖 的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行,本 实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。 肌糖元的酵解作用,即肌糖元在缺氧的条件下 经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。 肌肉组织中的肌糖元首先与磷酸化合而分解 经过己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系 列中间产物,最后生成乳酸。该过程可综合在 下列反应式 1/n(CHOsn+H,o-2CH3CHOHCOOH 糖元 乳酸
◼ 实验原理 ◼ 在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖 的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行，本 实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。 肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下， 经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。 肌肉组织中的肌糖元首先与磷酸化合而分解， 经过己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系 列中间产物，最后生成乳酸。该过程可综合在 下列反应式： ◼ 1/n（C6H5O5）n ＋H2O→2CH3CHOHCOOH ◼ 糖元 乳酸
■肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种 方式。当机体突然需要大量的能量,而又供氧 不足(如剧烈运动时),则糖元的酵解作用暂 时满足能量消耗的需要。在有氧条件下,组织 内糖元的酵解作用受到抑制,而有氧氧化则为 糖代谢的主要途径。 ■糖元酵解作用的实验,一般使用肌肉糜或肌肉 提取液。在用肌肉糜时,必须在无氧的条件下 进行;而肌肉提取液,则可在有氧条件下进行。 因为,催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉 提取液中,而催化呼吸作用(即三羧酸循环) 的酶系统,则集中在线粒体中,糖元可用淀粉 代替
◼ 肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种 方式。当机体突然需要大量的能量，而又供氧 不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用暂 时满足能量消耗的需要。在有氧条件下，组织 内糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化则为 糖代谢的主要途径。 ◼ 糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉 提取液。在用肌肉糜时，必须在无氧的条件下 进行；而肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。 因为，催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉 提取液中，而催化呼吸作用（即三羧酸循环） 的酶系统，则集中在线粒体中，糖元可用淀粉 代替
淀粉存在于绿色植物的多种组织中(种子、块 茎、干果)。 糖元是动物和细菌细胞内糖及其所反应的能源 的一种储存形式,其作用与淀粉在植物中的作 用一样,故有“动物淀粉”之称。 糖元或淀粉的酵解作用,可由乳酸的生成来观 察,在除去蛋白质与糖以后,乳酸可以与硫酸 共热变成乙醛,后者再与对羟基联苯反应产生 紫红色物质,根据颜色的显现而加以鉴定。 该法比较灵敏,每毫升溶液含15μg乳酸即产 生明显的颜色反应,若有大量糖类和蛋白质等 杂质存在,则严重干扰测定结果,因此,实验 中应尽量除净这些物质。另外,测定时所用的 仪器应严格地洗涤干净
◼ 淀粉存在于绿色植物的多种组织中（种子、块 茎、干果）。 ◼ 糖元是动物和细菌细胞内糖及其所反应的能源 的一种储存形式，其作用与淀粉在植物中的作 用一样，故有“动物淀粉”之称。 ◼ 糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观 察，在除去蛋白质与糖以后，乳酸可以与硫酸 共热变成乙醛，后者再与对羟基联苯反应产生 紫红色物质，根据颜色的显现而加以鉴定。 ◼ 该法比较灵敏，每毫升溶液含1-5µg乳酸即产 生明显的颜色反应，若有大量糖类和蛋白质等 杂质存在，则严重干扰测定结果，因此，实验 中应尽量除净这些物质。另外，测定时所用的 仪器应严格地洗涤干净
试剂和器材 ■1.材料家兔的肌肉 ■2.试剂 ■(1)0.5%糖元溶液(或0.5%淀粉溶液)、液 体石蜡、15%偏磷酸溶液、氢氧化钙(粉末) 浓硫酸、饱和硫酸铜溶液。 (2)1/15mo磷酸二氢钾溶液(pH8.0) 1/15moL磷酸二氢钾溶液(pH7.4) (3)对羟基联苯试剂 ■3.器材 ■试管及试管架、移液管(5ml、2ml、1ml、 0.5ml)、滴管、量筒(10ml)、玻璃棒、恒 温水浴、小台秤、剪刀及镊子、研钵、冰浴、 表面皿、橡皮塞
◼ 试剂和器材 ◼ 1. 材料 家兔的肌肉 ◼ 2. 试剂 ◼ （1）0. 5%糖元溶液（或0.5%淀粉溶液）、液 体石蜡、15%偏磷酸溶液、氢氧化钙（粉末）、 浓硫酸、饱和硫酸铜溶液。 ◼ （2）1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH8.0） ◼ 1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH7.4） ◼ (3)对羟基联苯试剂； ◼ 3. 器材 ◼ 试管及试管架、移液管（5 ml、2 ml、1 ml、 0.5 ml）、滴管、量筒（10 ml）、玻璃棒、恒 温水浴、小台秤、剪刀及镊子、研钵、冰浴、 表面皿、橡皮塞
操作方法 1制备肌肉糜:将家兔杀死后,立即剥皮,割 取背部和腿部肌肉,在低温条件下用剪刀尽量 把肌肉剪碎即成肌肉糜,低温保存备用(临用 前制备)。 ■2肌肉的糖酵解:取4支试管,编号后各加入 6m磷酸缓沖液φpH7.4和2m10.5%淀粉溶液。 1、2号管为实验管;3、4号管为对照管。向对 照管内加入15%偏磷酸4m(沉淀蛋白质并终 止酶反应)。然后,在每支试管中加入新鲜肌 肉糜2g用玻璃棒将肌肉碎块打散,搅匀,再 分别加入少许液体石蜡(约lml管),使它在 液面形成一薄层以隔绝空气,并将4支试管同 时放入37℃恒温水浴中保温
◼ 操作方法 ◼ 1.制备肌肉糜：将家兔杀死后，立即剥皮，割 取背部和腿部肌肉，在低温条件下用剪刀尽量 把肌肉剪碎即成肌肉糜，低温保存备用（临用 前制备）。 ◼ 2.肌肉的糖酵解:取4支试管，编号后各加入 6ml磷酸缓冲液(pH 7.4)和2ml 0.5%淀粉溶液。 1、2号管为实验管；3、4号管为对照管。向对 照管内加入15%偏磷酸4ml（沉淀蛋白质并终 止酶反应）。然后，在每支试管中加入新鲜肌 肉糜2g,用玻璃棒将肌肉碎块打散，搅匀，再 分别加入少许液体石蜡（约1ml/管），使它在 液面形成一薄层以隔绝空气，并将4支试管同 时放入37℃恒温水浴中保温
■2h后,取出试管,立即向试验管内加入15%偏 磷酸4ml,混匀。将各试管内容物离心 (3000rmin,15min),弃去沉淀。量取每个样 品的滤液4ml,分别加入已编号的试管中,然 后向每管内加入饱和硫酸铜溶液2m,混匀 再加0.8g氢氧化钙粉末,塞上橡皮塞后用力振 荡。因皮肤上有乳酸,勿使手指接触,放置 30min,并不时振荡,使糖沉淀完全。将每个 样品离心(3000min,15min),弃去沉淀
◼ 2h后，取出试管，立即向试验管内加入15%偏 磷 酸 4ml ， 混 匀 。 将各试管内容物离心 (3000r/min, 15min) ，弃去沉淀。量取每个样 品的滤液4ml，分别加入已编号的试管中，然 后向每管内加入饱和硫酸铜溶液2ml，混匀， 再加0.8g氢氧化钙粉末，塞上橡皮塞后用力振 荡。因皮肤上有乳酸，勿使手指接触，放置 30min，并不时振荡，使糖沉淀完全。将每个 样品离心(3000r/min, 15min)，弃去沉淀
■3.乳酸的测定:取4支洁净、干燥的试管,编号 各加入浓硫酸1.5m和4-8滴对羟基联苯试剂 混匀后放入冰浴中冷却。 将每个样品的滤液0.5ml逐滴加入到已冷却的 上述浓硫酸与对羟基联苯混合液中,边加边摇 动冰浴中的试管,应注意冷却。 ■将试管内液体混合均匀,放入沸腾的水浴锅中 煮沸10min,冷却后,比较和记录各管溶液的 颜色深浅,并加以解释
◼ 3.乳酸的测定:取4支洁净、干燥的试管，编号， 各加入浓硫酸1.5ml和4-8滴对羟基联苯试剂， 混匀后放入冰浴中冷却。 ◼ 将每个样品的滤液0.5ml逐滴加入到已冷却的 上述浓硫酸与对羟基联苯混合液中，边加边摇 动冰浴中的试管，应注意冷却。 ◼ 将试管内液体混合均匀，放入沸腾的水浴锅中 煮沸10min，冷却后，比较和记录各管溶液的 颜色深浅，并加以解释
脂肪转化为糖的定性实验 实验目的 ■学习和了解生物体内脂肪转化为糖的基 本原理、检验方法和生理意义
脂肪转化为糖的定性实验 ◼ 实验目的 ◼ 学习和了解生物体内脂肪转化为糖的基 本原理、检验方法和生理意义
■实验原理 ■糖代谢、脂肪代谢和蛋白质代谢是相互 联系的,三类物质可以互相转化 ■本实验以休眠的花生种子和花生的黄化 幼苗为材料,定性地了解花生种子内贮 存的大量的脂肪转化成为黄化幼苗中还 原糖的现象
◼ 实验原理 ◼ 糖代谢、脂肪代谢和蛋白质代谢是相互 联系的，三类物质可以互相转化。 ◼ 本实验以休眠的花生种子和花生的黄化 幼苗为材料，定性地了解花生种子内贮 存的大量的脂肪转化成为黄化幼苗中还 原糖的现象