实验六：肌苷的分析
实验六： 肌苷的分析
肌苷NHHONteen肌音片OHOHR-FO01201WMWMein0+20129β-D-核糖次黄嘌岭SMDYF.CV肌替在体内参与细胞能量代谢和蛋白质合成，提高相关代谢酶的活性，改善肝脏功能，促进受损肝脏的恢复。肌苷片用于急、慢性肝炎的辅助治疗，规格：0.2g
肌苷 9b-D-核糖次黄嘌呤 肌苷在体内参与细胞能量代谢和蛋白质合成，提高相关代谢 酶的活性，改善肝脏功能，促进受损肝脏的恢复。肌苷片用于急、 慢性肝炎的辅助治疗，规格：0.2g
一、鉴定1、取本品2片，研细，加水10ml溶解，滤过，取滤液1ml，等体积3,5-二羟基甲苯溶液(含盐酸，Fe3+)，混匀，在水浴中加热约10min，即显绿色----鉴别核糖肌苷—>核糖—>糖醛—3.5-二羟基甲苯>绿色配合物Fe3+2、取本品饱和水溶液2mL（可直接取鉴别1中的滤液），加氨制硝酸银试液数滴，即产生白色胶状沉淀---鉴别岭碱基浓氨水嘌呤碱银化物嘌呤碱+AgNO
一、鉴定 2、取本品饱和水溶液2mL（可直接取鉴别1中的滤液）， 加氨制硝酸银试液数滴，即产生白色胶状沉淀-鉴别嘌呤 碱基 1、取本品2片，研细，加水10ml溶解，滤过，取滤液1ml， 等体积 3,5-二羟基甲苯溶液(含盐酸，Fe3+)，混匀，在水浴 中加热约10min，即显绿色-鉴别核糖 3 3,5- Fe ⎯⎯→ ⎯⎯→ ⎯⎯⎯⎯⎯→ + + + 肌苷 H H 核糖 糖醛 二羟基甲苯 绿色配合物 +AgNO3 ⎯⎯⎯→ 嘌呤碱 浓氨水 嘌呤碱银化物
3、将本品配成10ug/mL的溶液，在200-400nm波长内扫描，在248nm土1nm处有最大吸收，在222nm土1nm处有最小吸收。溶液配制：取10片肌苷片，精密称定，计算平均每片质量研细，精密称取适量（相当于肌昔0.1g），置于100ml容量瓶：加水充分振摇溶解，用水稀释至刻度，滤过。精密量取续滤液1.0mL，置100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，制成每ml约含10ug的溶液。210220230245波长(nm)200215222225240吸光度波长(nm)248250255260270300400330360吸光度
3、将本品配成10mg/mL的溶液，在200-400nm波长内扫描，在 248nm±1nm处有最大吸收，在222nm±1nm处有最小吸收。 波长(nm) 200 210 215 220 222 225 230 240 245 吸光度 波长(nm) 248 250 255 260 270 300 330 360 400 吸光度 溶液配制：取10片肌苷片，精密称定，计算平均每片质量， 研细，精密称取适量（相当于肌苷0.1g），置于100ml容量瓶， 加水充分振摇溶解，用水稀释至刻度，滤过。精密量取续滤 液1.0mL ， 置100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，制成每ml 约含10mg的溶液
二、次黄嘌岭的检香9NHHOATOHHOHOOHOH精密称取本品0.5g，置50mL量瓶，加水溶解并稀释至刻度，摇匀过滤，取续滤液（已配制），吸取上述溶液1uL（毛细管高度约3mm即可），以次黄嘌岭的饱和水溶液为对照品，分别点于3cm×20cm层析滤纸上，以水为展开剂，上行展开至6~7cm处，取出晾干，于紫外灯254nm下检视，不得出现杂质斑点。肌苷一次黄嘌岭
二、次黄嘌呤的检查 精密称取本品0.5g，置50mL量瓶，加水溶解并稀释至刻度，摇匀过 滤，取续滤液（已配制），吸取上述溶液1mL（毛细管高度约3mm即 可），以次黄嘌呤的饱和水溶液为对照品，分别点于3cm ×20cm层析滤 纸上，以水为展开剂，上行展开至6~7cm处，取出晾干，于紫外灯254nm 下检视，不得出现杂质斑点。 肌苷 次黄嘌呤 +
三、含量测定（紫外分光光度法）吸收系数法：稀释已知→求A=→C→C(g / mL)过程：W(g)样/含iAC, [g / mL]=El% ×1004取鉴定3中的溶液，测定248nm士1nm附近的最大吸光度为460，根据朗伯比尔定律。已知肌苷的百分吸收系数计算肌苷片的含量，并与标示量比较
三、含量测定（紫外分光光度法） 取鉴定3中的溶液，测定248nm±1nm附近的最大吸光度， 已知肌苷的百分吸收系数 为460，根据朗伯比尔定律。 计算肌苷片的含量，并与标示量比较。 1% E1cm ( ) / ( / ) E W g i C g mL A C ⎯⎯⎯→ ⎯⎯⎯→ i 过程： 样 含 稀释 已知 求 1% 1 [ / ] 100 x x cm A C g mL E = 吸收系数法：
四、操作要点1.纸色谱检查中，起始样点面积尽可能小，否则展开后斑点扩散严重，影响观察：2.氨制硝酸银实验观察到现象后立即清洗试管；3.本实验用吸光系数法测定含量，其优点是操作简便、快捷，不必用对照品。但该法受仪器精度、操作及环境因素等影响较大，因此测定前必须对紫外-可见分光光度计进行校正与检定，波长、吸光度的准确度、杂散光均应符合要求，才能保证结果的准确
四、操作要点 1.纸色谱检查中，起始样点面积尽可能小，否则展开后斑点扩散 严重，影响观察； 2.氨制硝酸银实验观察到现象后立即清洗试管； 3. 本实验用吸光系数法测定含量，其优点是操作简便、快捷， 不必用对照品。但该法受仪器精度、操作及环境因素等影响较 大，因此测定前必须对紫外-可见分光光度计进行校正与检定， 波长、吸光度的准确度、杂散光均应符合要求，才能保证结果 的准确
附录：2010版药典中肌苷的分析方法【鉴别】（1)取0.01%供试品溶液适量，加等体积的3，5-二羟基甲苯溶液（取3，5-二羟基甲苯与三氟化铁各0.1g，肌苷加盐酸使成100ml），混匀，在水浴中加热约10分钟，即显Jigan绿色。Inosine（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集605H图）一致。【检查】溶液的透光率取本品0.5g，加水50ml使溶HO-解，照紫外-可见分光光度法（附录IVA），在430nm的波长处测定透光率，不得低于98.0%（供注射用）。有关物质取本品，加水制成每1ml中含0.5mg的溶OHOH液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀CoHN,Os268.23释至刻度，摇勾，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条本品为9βD核糖次黄嘌岭。按干燥品计算，含件，取对照溶液20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主CioH2N,O应为98.0%~102.0%。成分峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液与【性状】本品为白色结晶性粉末，无臭，味微苦。对照溶液各20l，分别注人液相色谱仪，记录色谱图至主峰保本品在水中略溶，在乙醇中不溶，在稀盐酸和氢氧化钠试：留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰液中易溶。面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%）
附录：2010版药典中肌苷的分析方法
干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得【类别】细胞代谢改善药。过I.U%（附录L)。【贮藏】遗光，密闭保存。炽灼残渣不得过0.1%（供注射用），或不得过0.2%【制剂】（1)肌苷口服溶液（2）肌苷片（3）肌苷胶囊(4)肌苷注射液（5）肌苷葡萄糖注射液（6）肌苷氯化钠（供口服用）（附录通N）。注射液（7)注射用肌苷重金属取本品1.Og，依法检查（附录H第二法），含：重金属不得过百万分之十。异常毒性取本品，加氟化钠注射液制成每1ml中含10mg的溶液，依法检查（附录XIC），按静脉注射法给药，应符合规定（供注射用）。【含量测定】照高效液相色谱法（附录VD)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（10：90）为流动相；检测波长为248nm。取肌苷对照品约10mg，80℃水浴加热10分钟，放冷，加水至50ml，取20ml注入液相色谱仪，肌苷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求，理论板数按肌峰计算不小于2000。测定法取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含20ug的溶液，摇匀，精密量取20μl注人液相色谱仪，记录色谱图：另精密称取肌苷对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得
肌苷片Jigan Pian10μg的溶液，同法测定，计算每片的溶出量。限度为标示量InosineTablets的80%，应符合规定。其他应符合片剂项下有关的各项规定（附录IA）。本品含肌者（CHN.O）应为标示量的93.0%~【含量测定】取本品10片（如为糖衣片，应除去包107.0%.：衣），精密称定，研细，精密称取适量（约相当于肌苷【性状】本品为白色片或糖衣片或薄膜衣片，除去包衣：优0.1g），置100ml量瓶中，加水约70ml，充分振摇使肌苷溶后显白色。解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置【鉴别】（1）取本品2片，研细，加水10ml振摇使溶：：100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，照肌苷项下的方法测定，计算，即得。解，滤过，取滤液，照肌苷项下的鉴别（1)项试验，显相同的：【类别】同肌苷。反应。【规格】0.2g（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的：【藏】保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间-致。遮光，密封保存。【检查】溶出度取本品，照溶出度测定法（附录XC第：二法），以水900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操：作，经30分钟时，取溶液10ml，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾，照紫外-可见分光光度法（附录IVA），在248nm的波长处测定吸光度；另取肌昔对照品适盘，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含：