实验十三卵磷脂的提取及其组成鉴定、实验目的一，学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法巩固抽滤等基本操作·主讲教师：
实验十三 卵磷脂的提取及其 组成鉴定 • 一、实验目的 • 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。 • 巩固抽滤等基本操作。 • 主讲教师：
、基本原理·卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约8%。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水解液中检查出这些组分。其分离提取的流程如下：
二、基本原理 • 卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋 黄中含量较高，约8％。可根据它溶于乙醇、 氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离 得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解， 得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水 解液中检查出这些组分。其分离提取的流 程如下：
蛋黄（含蛋白质、脂肪、卵磷脂、脑磷脂等）乙醇提取提取液残渣（蛋白质、脑磷脂等弃去）乙醇溶液蒸去乙醇油状物（脂肪、卵磷脂）氯仿*氯仿溶液丙酮沉淀（卵磷脂）氯仿丙酮液（脂肪）
卵磷脂彻底水解的产物是什么？答：CH2-O-C-R1完全水解R2-C-O-C-H11CH2-O-P-CH2CH2N(CH3)31磷酸CH2-OH R1-C-OHHO-P-OHHO-C-HOHO11CH2OHR2-C-OHHOCH2CH2N(CH3)3脂肪酸甘油OH胆碱
卵磷脂彻底水解的产物是什么？ + R2 C O O C H CH2 O C O R1 CH2 O P O O CH2 CH2 N(CH3) 3 完全水解 HO C H CH2 OH CH2 OH R1 C O OH R2 C O OH + HOCH2CH2N(CH3)3 OH－ P O HO OH OH 甘油 脂肪酸 磷酸 胆碱 答：
三、仪器和药品·仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花·药品：熟鸡蛋黄20%NaOH溶液10%硫酸Pb(AC)2 1%CuSO4溶液95%乙醇氯仿 丙酮碘化铋钾溶液
三、仪器和药品 • 仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花 • 药品：熟鸡蛋黄 20％NaOH溶液 10％ Pb(AC)2 1％CuSO4溶液 硫酸 95％乙醇 氯仿 丙酮 碘化铋钾溶液
四、实验步骤1：卵磷脂的提取（1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml95%乙醇研磨，再加入10ml95%乙醇充分研磨，减压过滤（应盖满漏斗），布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加10ml95%乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。（2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。（3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解（4）在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）
四、实验步骤 • 1．卵磷脂的提取 （1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95％乙醇研磨，再加入10ml 95％乙醇充分研磨，减压过 滤(应盖满漏斗)，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后， 移入研钵中，再加10ml 95％乙醇研磨，减压过滤，滤干 后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移 入蒸发皿内。 • （2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油 状物。 • （3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。 • （4）在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出， • 搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）
2．卵磷脂的水解及其组成鉴定（1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入5ml20%氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下面检查用。（2）检查脂肪酸的检查：取棉花上沉淀（滤饼）少许，加1滴20%氢氧化钠溶液与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液以硝酸酸化后加入10%醋酸铅2滴，观察溶液的变化甘油的检查：取试管一支，加入1%硫酸铜溶液1ml(二十滴)，2滴20%氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1m水解液振摇，观察所得结果。胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成
2．卵磷脂的水解及其组成鉴定 • （1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加 入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以 搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下 面检查用。 • （2）检查 • 脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加1滴20％氢氧化钠溶液 与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液， 以硝酸酸化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化 • 甘油的检查：取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml(二十滴)，2滴 • 20％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液 • 振摇，观察所得结果。 • 胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加 入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成
[注释]1第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏漏斗（不换滤纸）反复滤清2.蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。3.黄色油状物干后，蒸发血壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中，否则会带入杂质。4.搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状。5.加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。6.加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生成，浑浊进一步增强。7.生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜，沉淀逐步溶解。8.克劳特试剂为含有KI一Bil3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀
[注释] • 1. 第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份， • 滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏 • 漏 斗（不换滤纸）反复滤清。 • 2. 蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。 • 3. 黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中， 否则会带入杂质。 • 4. 搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状。 • 5. 加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。 • 6. 加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生 成，浑浊进一步增强。 • 7. 生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜， 沉淀逐步溶解。 • 8. 克劳特试剂为含有KI－BiI3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如 胆碱生成砖红色的沉淀
思考题：1蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作何解释?3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？4．为任么实验中要进行减压过滤？操作时应注意哪些地方？
思考题： • 1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？ • 2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作 • 何解释？ • 3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？ • 4．为什么实验中要进行减压过滤？ • 操作时应注意哪些地方？
Question5卵磷脂彻R1常为饱和脂肪酸如C16，C18底水解的产物是什么R1-COO-CHR2常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸R2-COO2l*HV0(RCHOH<HO-CH2CH2-N(CH3)3 OHR=—CH,CH2-N(CH3)3 OH为：卵磷脂胆碱
R1 -COO-CH2 R2 -COO-C—H CH2 —O—P—O—R OH O 1 2 * 3 R1 常为饱和脂肪 酸如C16，C18 R2 常为不饱和脂肪 酸如花生四烯酸 R= —CH2CH2 -N(CH3 )3 OH 为： 卵磷脂 + - + - HO-CH2CH2 -N(CH3 )3 OH 胆 碱 Question 5 卵磷脂彻 底水解的产物是什么？