第17章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)
第17章 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)
概述 经典Lc与HPLC比较 经典LC HPLC 柱之内径 1~5cm ~0.4cm 长度 50~100cm 15~50cm 填充材料粒度150m-200m4m-10m 使用压力 1-10atm 50~200atm 分离时间 0.5h~天 10min HPLc:.用高压输液泵,高效微粒固定相和高灵敏度检测器 HPLC特点:高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便
概述 经典LC HPLC 柱之内径 1~5cm ~0.4cm 长度 50~100cm 15~50cm 填充材料粒度 150µm~200µm 4µm~10µm 使用压力 1~10atm 50~200atm 分离时间 0.5h~天 ~10min 经典LC与HPLC比较 HPLC特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便 HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器
与气相色谱法比较,HPLC的优点 气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物; HPLc不受样品挥发性和热稳定性的限制,适用于高沸点、热稳 定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲,几乎可以分析除永久气 体外所有的有机和无机化合物 气相色谱的流动相仅起运载作用,对组分 不产生相互作用力;HPLc的流动相对组分产生相互作用力,相 当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。 气相色谱法一般在较高温度下进行 缺点:仪器设备费用昂贵,操作严格
与气相色谱法比较，HPLC的优点 1. 分析对象广 气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物； HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳 定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气 体外所有的有机和无机化合物。 2. 流动相对分离起作用 气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分 不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相 当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。 3. 经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行 缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格
高效液相色谱法的分类 根据分离机理 液液分配色谱 化学键合相色谱 液固吸附色谱 离子交换色谱 离子色谱 离子对色谱 尺寸排阻色谱 亲和色谱
高效液相色谱法的分类 根据分离机理 • 液-液分配色谱 • 化学键合相色谱 • 液-固吸附色谱 • 离子交换色谱 • 离子色谱 • 离子对色谱 • 尺寸排阻色谱 • 亲和色谱
高效液相色谱仪 Sample ervoir Solvent sOlvent 2 pump splitter Pressure 2 gauge Degasser 1 Degasser 2 column lixing vessel Analytical High pressure pump differential detector to fraction collector 1.储液瓶(输液管入口端安装有过滤 器);2高压输液泵;3混合器和阻 尼器;4进样器(闯);5色谱柱; 6检测器;7.废液瓶;8数据处理和 控制系统
高效液相色谱仪 1.储液瓶（输液管入口端安装有过滤 器）；2.高压输液泵；3.混合器和阻 尼器；4.进样器（阀）；5.色谱柱； 6.检测器；7.废液瓶；8.数据处理和 控制系统
Agilent1100系列高效液相色谱系统
Agilent 1100系列高效液相色谱系统
高压输液系统 储液罐 高压输液泵要求:密封性好,输出流量恒定,压力平稳, 可调流量范围宽,耐腐蚀 分类:恒流泵(机械泵)机械注射泵量要求在150Lm 多用于流 范围的 HPLC或毛细管柱 活塞泵 机械往复泵 恒压泵 隔膜泵 过滤器 压力脉动阻力器
高压输液系统 • 储液罐 • 高压输液泵 要求：密封性好，输出流量恒定，压力平稳， 可调流量范围宽，耐腐蚀 分类：恒流泵（机械泵） 恒压泵 • 过滤器 • 压力脉动阻力器 机械注射泵 机械往复泵 多用于流量要求在1-50L/min 范围的微型 HPLC或毛细管柱 HPLC中 活塞泵 隔膜泵
进样系统 隔膜注射进样器 高压进样阀多采用六通阀进样
进样系统 • 隔膜注射进样器 • 高压进样阀 多采用六通阀进样
色谱柱 柱管 固定相
分离系统 • 色谱柱 柱管 固定相
溶质性检测器对被分离组分的物理或化学特性有响应 紫外检测器 荧光检测器 电化学(安培)检测器 总体检测器对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应 示差折光检测器 电导检测器
检测系统 • 溶质性检测器 对被分离组分的物理或化学特性有响应 紫外检测器 荧光检测器 电化学（安培）检测器 • 总体检测器 对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应 示差折光检测器 电导检测器