实数27大眼离体主动脉环实验 目的和原理 实验观察难拉帕米对电压门控钙通道的阻断作用及酚受拉明对化学门控钙通道的阻斯 作用： 高浓度的氯化钾液(60一1001)可使直管平滑肌细围去极化，促使电压门控钙通道 开成，引起胞外C内流，导致血管平滑肌收缩。能阻断高钾液此作用的药物则为电压门控 钙通道阻断药。 ▣受体激动药（如苯肾上膝素）激动血管平滑肌@受体，足使配体门控钙通道开放，引 起图外C:”内流而致血管环（条）收增，ū受体阻断药可阻断此作用。逐步递增▣受体董动 药的浓度（紧积浓度），引起血管环出现剂量依赖性收增，记录药物量效曲线。然后给予 受体阻断药，再重复上述实验，可使该量效曲线平衡右移，但最大效应不变，计算出受体 阻断药的结抗参数《2)以确定该阻断药的阻断效价。 材料健康的D大鼠，雄性，体重250一280克：麦氏浴槽，超货恒盟水浴，温度计， g张力换能器，微机生物信号采集处型仪。手术剪刀，鼠科剪。眼科摄，培养里，烧杯， 100ml、1n1移液墨，棉线：20%氨基甲酸乙酯，3o1氯化钾，10o1/L雀拉舶米，0.1%苯 骨上腺素，1%酚受拉明，Krebs液。90+500混合气体。 方法 1,PeLab参数设置： 记录方式：违续记录：存世方式：连续存盘：采样速率：5s:输入：C属合，放大倍 数200一500. 2.标本制备 (1)大鼠用座氢基甲酸乙酯按1/k以体重腹腔注射麻醉，尊开陶腔，迅速取出心 脏及鞠主动愁放入盛有4℃的混合气体地和的Γs营养液的培养皿中，莲续用混合气体充 气。分离出主动脉，将血管内的残存血液冲瓷干净，小心利去外围的结锋组织。将主动脉弓 以下的胸主动账剪成4国长的动账环数段备用。 (2)雷要保存内皮的血管，动作应轻柔。如需无内皮的血管环，可用棉签或牙签将血 管内皮轻轻修去
实验 27 大鼠离体主动脉环实验 目的和原理 实验观察维拉帕米对电压门控钙通道的阻断作用及酚妥拉明对化学门控钙通道的阻断 作用。 高浓度的氯化钾液（60～100mmo1）可使血管平滑肌细胞去极化，促使电压门控钙通道 开放，引起胞外 Ca2+内流，导致血管平滑肌收缩。能阻断高钾液此作用的药物则为电压门控 钙通道阻断药。 α受体激动药（如苯肾上腺素）激动血管平滑肌α受体，促使配体门控钙通道开放，引 起胞外 Ca2+内流而致血管环（条）收缩，α受体阻断药可阻断此作用。逐步递增α受体激动 药的浓度（累积浓度），引起血管环出现剂量依赖性收缩，记录药物量效曲线。然后给予α 受体阻断药，再重复上述实验，可使该量效曲线平衡右移，但最大效应不变，计算出α受体 阻断药的拮抗参数（pA2）以确定该阻断药的阻断效价。 材料 健康的 SD 大鼠，雄性，体重 250～280 克；麦氏浴槽，超级恒温水浴，温度计， 5g 张力换能器，微机生物信号采集处理仪，手术剪刀，眼科剪，眼科镊，培养皿，烧杯， 100ml、1m1 移液器，棉线；20%氨基甲酸乙酯，3mo1 氯化钾，10-5 mo1/L 维拉帕米，0.1％苯 肾上腺素，1％酚妥拉明，Krebs 液，95%O2+5%CO2 混合气体。 方法 1．PcLab 参数设置： 记录方式：连续记录；存盘方式：连续存盘；采样速率：5ms；输入：DC 耦合，放大倍 数 200～500。 2．标本制备 （1）大鼠用 20%氨基甲酸乙酯按 1g/kg 体重腹腔注射麻醉 ，剪开胸腔，迅速取出心 脏及胸主动脉放入盛有 4℃的混合气体饱和的 Krebs 营养液的培养皿中，连续用混合气体充 气。分离出主动脉，将血管内的残存血液冲洗干净，小心剥去外围的结缔组织，将主动脉弓 以下的胸主动脉剪成 4mm 长的动脉环数段备用。 （2）需要保存内皮的血管，动作应轻柔。如需无内皮的血管环，可用棉签或牙签将血 管内皮轻轻檫去
(3)将国定杆上的不锈钢钩轻轻穿入血管环。并将另一连有细线的三角形不锈钢挂钩 也轻轻穿入，将其定悬挂于盛有5 ml Krebs液的麦氏浴槽内（图11-27-1），通入混合气 体，调竹通气量至一个一个小气泡途出为好。浴槽内置度应保持37±0,5℃， (4)血管环的初始张力前15分钟为1g,15分钟后调至2g,并以此张力平衔45分钟。 每隔15分钟换液一次。 (5)用锋浓度0】CL(3olC.1001)收缩血管环，传收缩稳定后用顶热的 rbs洗税，反复冲洗直至张力恢复到初始值为止：重复加入同一浓度CL,连线3次，用 黑rbs液反复脱洗不本使其张力目复初的值. (6)用10o1的苯肾上像素50加1（终浓度10o1)诱发血管收缩达稳是后，加入10ol 的乙酰肌碱50■l(终浓度10)，观察血管的松地效应是否超过1信，如果≥10件则为内皮 完整，否则为内皮受损或无内皮。本实验用内皮受损或无内皮血管环， 图11-27-1血管灌流示意图 用bs液反复脱洗标本使其素力回复初始值，间隔3刘分钟进行下一项目，每隔15 分钟换液一次。 观素项目 核以下懒序把药物加于活槽中： 1,加入1001/L推拉帕米200加1,15ain后再加入3o1氯化钾100ml,记录动账环 收缩，在收缩达高峰后用Xbs液反复殿洗标本使其张力国复初始值。 2,加入0,1%茶肾上象素2001，记柔动脉环的收缩，在反应达高峰时用K中s液反复 观洗标本使其张力目复初始值 3,20mn后，加入1酚爱拉明100ml,10mm后再重复观察项目2，记录动脉环的收 绵。 4.再加入o】/L氧化钾100加l,观察并记录动脉环的收缩。 5.把主动脉环取出，用滤纸吸去其表雨水分，称重。 结果 记录测定每次加西前后血管环的张力，计算出每次给药后每克动脉环收缩张 力，分析实验结果
（3）将固定杆上的不锈钢钩轻轻穿入血管环，并将另一连有细线的三角形不锈钢挂钩 也轻轻穿入，将其固定悬挂于盛有 5ml Krebs 液的麦氏浴槽内（图 11-27-1），通入混合气 体，调节通气量至一个一个小气泡逸出为好。浴槽内温度应保持 37±0.5℃。 （4）血管环的初始张力前 15 分钟为 1g，15 分钟后调至 2g，并以此张力平衡 45 分钟。 每隔 15 分钟换液一次。 （5）用终浓度 60mmol KCL（3mol KCL 100ml）收缩血管环，待收缩稳定后用预热的 Krebs 洗脱，反复冲洗直至张力恢复到初始值为止；重复加入同一浓度 KCL，连续 3 次，用 Krebs 液反复脱洗标本使其张力回复初始值。 （6）用 10-4 mol 的苯肾上腺素 50ml（终浓度 10-6 mol）诱发血管收缩达稳定后，加入 10-4 mol 的乙酰胆碱 50ml（终浓度 10-6 M），观察血管的松弛效应是否超过 10%，如果≥10%则为内皮 完整，否则为内皮受损或无内皮。本实验用内皮受损或无内皮血管环。 图 11-27-1 血管灌流示意图 用 Krebs 液反复脱洗标本使其张力回复初始值，间隔 30 分钟进行下一项目，每隔 15 分钟换液一次。 观察项目 按以下顺序把药物加于浴槽中： 1．加入 10-5 mo1／L 维拉帕米 200m1，15min 后再加入 3mo1 氯化钾 100ml。记录动脉环 收缩，在收缩达高峰后用 Krebs 液反复脱洗标本使其张力回复初始值。 2．加入 0.1％苯肾上腺素 200m1，记录动脉环的收缩，在反应达高峰时用 Krebs 液反复 脱洗标本使其张力回复初始值 3．20min 后，加入 1%酚妥拉明 100mml，10min 后再重复观察项目 2，记录动脉环的收 缩。 4．再加入 4mo1／L 氯化钾 100m1，观察并记录动脉环的收缩。 5．把主动脉环取出，用滤纸吸去其表面水分，称重。 结果 记录测定每次加药前后血管环的张力，计算出每次给药后每克动脉环收缩张 力，分析实验结果
注意事项 (1)Kbs必须临用时用新鲜燕销水配制， 思考题 用苯肾上腺素诱发血管收第后，加入乙酰胆碱，为什么内皮完整血管的松范效应大，而 内皮受损域无内皮血管环松驰效应小？
注意事项 （1）Krebs 必须临用时用新鲜蒸馏水配制。 思考题 用苯肾上腺素诱发血管收缩后，加入乙酰胆碱，为什么内皮完整血管的松弛效应大，而 内皮受损或无内皮血管环松弛效应小？