实验4神经干动作电位及其传导速度的测定 目的 运用电生理实验技术测定蛙类坐骨神经干的单相.双相动作电位和其中A类纤 准冲动的传导速度，并观神经损伤、药物的影南。 材料蟑蜂成蛙，娃类手术器一套，标本屏蔽盒，带电极的接线若干，任氏液，1一 3四1/LCL溶液，瓷碗，培养团，微机生物信号采集处理仪。 方法和步骤 1,制备情蜂坐骨神经干标本 (1)级脑脊筒：按实验1介绍的方法，毁脑脊简 (2)除露干上部及内脏：用粗剪刀在候骨后方剪断脊柱。左手据住蟑除脊柱，右手 将相剪刀沿两侧（避开坐骨神经）舅开服量。此时g干上部及内脏即全部下垂。剪除全都繁干 上部及内脏组织，弃于瓷豌内。 (3)剥皮，避开神经，用左手持圆头摄子夹住脊柱，右手捏住其上的边缘皮肤，逐步 向下牵拉剩离皮肤。拉至大圆时，如阻力较大，可先利下一留。再剩另一锡。将全部皮肤利 除后，将标本置于盛有任氏液的培养里中。 ()洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤： 将上述利皮的标本鹅卧位，用尖头极子夹住密骨尾端稍向上是，使版部向上隆起，用相 剪刀水平位剪除解骨。将标本仰卧，用玻璃分针分离膏柱两侧的坐骨神经，穿线，紧靠膏柱 根富结扎，近中《端明断神经干，用尖头摄子夹结扎线将神经干从骶剪口处穿出。将标本 俯卧位，用三根大头针钉在蛙板上，使充分伸直成人字形，然后再用玻璃分针循股二头肌和 半顾肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经至大号部分，直至分离至围窝胫册神经分 义处，再将排浅神经、胫神经与排肠肌和轻前肌分离开后将胖肠肌剪除。 最后，将坐骨神经紧靠脊柱根部剪下，用手轻提这侧结扎神经的线头，辨清坐骨神经走 向，然后置剪刀于神经与组织之间，剪刀与下肢成30”角。紧贴股骨。罪高。顺神经走向， 臂直至跟健，在此处亦穿线结扎，然后闻断神经。一根坐骨神经干标本便制备完成。 应注意： (1)神经干应尽可能分离得长一些，要求上自脊椎附近的主干，下沿排总神经与胫神 经一直分离至限关节附近止
实验 4 神经干动作电位及其传导速度的测定 目的 运用电生理实验技术测定蛙类坐骨神经干的单相、双相动作电位和其中Ａ类纤 维冲动的传导速度，并观察神经损伤、药物的影响。 材料 蟾蜍或蛙，蛙类手术器一套，标本屏蔽盒，带电极的接线若干，任氏液，1～ 3mol/L KCL 溶液，瓷碗，培养皿，微机生物信号采集处理仪。 方法和步骤 1．制备蟾蜍坐骨神经干标本 （1）毁脑脊髓：按实验 1 介绍的方法，毁脑脊髓。 （2）剪除躯干上部及内脏：用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。左手握住蟾蜍脊柱，右手 将粗剪刀沿两侧(避开坐骨神经)剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。剪除全部躯干 上部及内脏组织，弃于瓷碗内。 （3）剥皮：避开神经，用左手持圆头镊子夹住脊柱，右手捏住其上的边缘皮肤，逐步 向下牵拉剥离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一腿，再剥另一腿。将全部皮肤剥 除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。 （4）洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤： 将上述剥皮的标本俯卧位，用尖头镊子夹住骶骨尾端稍向上提，使骶部向上隆起，用粗 剪刀水平位剪除骶骨。将标本仰卧，用玻璃分针分离脊柱两侧的坐骨神经，穿线，紧靠脊柱 根部结扎，近中枢端剪断神经干，用尖头镊子夹结扎线将神经干从骶部剪口处穿出。将标本 俯卧位，用三根大头针钉在蛙板上，使充分伸直成人字形，然后再用玻璃分针循股二头肌和 半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经至大腿部分，直至分离至腘窝胫腓神经分 叉处，再将腓浅神经、胫神经与腓肠肌和胫前肌分离开后将腓肠肌剪除。 最后，将坐骨神经紧靠脊柱根部剪下，用手轻提这侧结扎神经的线头，辨清坐骨神经走 向，然后置剪刀于神经与组织之间，剪刀与下肢成 30°角，紧贴股骨，腘窝，顺神经走向， 剪直至跟腱，在此处亦穿线结扎，然后剪断神经。一根坐骨神经干标本便制备完成。 应注意： （1）神经干应尽可能分离得长一些，要求上自脊椎附近的主干，下沿腓总神经与胫神 经一直分离至踝关节附近止
(2)神经干分离过程中慎勿损物神经组炽，以免影响实验效果。 (3)神经干两端要用细线扎住，然后浸于任氏液中备用. 2,连按实验装置 按图1041所示，用导线联接生物信号果集处理系统与标本盒，筑道免联接错误或接 触不良。标本盘内村以浸混任氏液的滤纸，以增加盒内空气湿度，防止神经干迅速干燥。 图10-4-1 观察神经干动作电位和测定神经冲动传导速度装置图 S+,S-剩微电极。接地电极，，'引导电极与P山生物信号采集处理系饶输 入通道2相连，，'引导电极与b生物信号采集处理系统输入通道4相连 3.PLab参数设置 记录方式：记忆示波：输入方式：2、4通道C,采样速率：10-25口s 放大倍数：200. 刺撒波宽：0.6一0.1■s:刺激强度：0.1一3T:刻激方式：连续或单次 4,观察坐骨神经干动作电位 (1)按围10一小-1将神经干置于标本屏板盒内，使神经干与刺激电极、接地电极、引导 电极均接触良好。取神经干时须用慑子夹特两端扎线，切不可直接夹特或用手触摸神经干。 (2)开始采样，点击“刻激”按钮。系统开始工作，适当调整放大倍数，X,Y轴压缩 比，使整个动作电位在屏幕上早现适当的宽度以便仔细规察双相动作电位波形。 (3)实时调节制藏强度。当强度从小到大时。当超过某一侧激强度数值时，可出现动 作电位波形， 5,观察和测定双相动作电位波形 (1)观察神经干动作电位的幅度在一定范围内随刺潘强度变化面变化的晟象 (2)读出波宽为某一数值时阀创激和最大刺潘数值，读出最大刺蛋时双相动作电位上 下相的畅度和整个动作电位特续时间数值。 6,测定动作电位传导速度 (1)给予神经干最大强度料懂，在通道2和通道4的采样窗中，可观察到先后形成的 两个双相动作电位被形
（2）神经干分离过程中慎勿损伤神经组织，以免影响实验效果。 （3）神经干两端要用细线扎住，然后浸于任氏液中备用。 2．连接实验装置 按图 10-4-1 所示，用导线联接生物信号采集处理系统与标本盒。须避免联接错误或接 触不良。标本盒内衬以浸湿任氏液的滤纸，以增加盒内空气湿度，防止神经干迅速干燥。 图 10-4-1 观察神经干动作电位和测定神经冲动传导速度装置图 S+、S-刺激电极，r3 接地电极，r1、r1′引导电极与 PcLab 生物信号采集处理系统输 入通道 2 相连，r2、r2′引导电极与 PcLab 生物信号采集处理系统输入通道 4 相连 3．PcLab 参数设置 记录方式：记忆示波；输入方式：2、4 通道 AC；采样速率：10～25μs； 放大倍数：200。 刺激波宽：0.05～0.1ms；刺激强度：0.1～3V；刺激方式：连续或单次 4．观察坐骨神经干动作电位 （1）按图 10-4-1 将神经干置于标本屏蔽盒内，使神经干与刺激电极、接地电极、引导 电极均接触良好。取神经干时须用镊子夹持两端扎线，切不可直接夹持或用手触摸神经干。 （2）开始采样，点击“刺激”按钮，系统开始工作，适当调整放大倍数，X、Y 轴压缩 比，使整个动作电位在屏幕上呈现适当的宽度以便仔细观察双相动作电位波形。 （3）实时调节刺激强度。当强度从小到大时，当超过某一刺激强度数值时，可出现动 作电位波形。 5．观察和测定双相动作电位波形 （1）观察神经干动作电位的幅度在一定范围内随刺激强度变化而变化的现象。 （2）读出波宽为某一数值时阈刺激和最大刺激数值，读出最大刺激时双相动作电位上 下相的幅度和整个动作电位持续时间数值。 6．测定动作电位传导速度 （1）给予神经干最大强度刺激，在通道 2 和通道 4 的采样窗中，可观察到先后形成的 两个双相动作电位波形
(2)分别测量两个动作电位起始点的时间，设通道2为t1,通道4为12（或可直接测 量两个动作电位起点的问隔时间)求出2一11的时间差值。 (3)测量标本屏蔽盒中两对明导电极之间的距离S(应测一的阿距)， 7,观察和测定单相动作电位波形 (1)把神经干标本政置方向倒置，记录例置前后、'电极引导的双相动作电位振 解和时程. (2)用摄子将二个记录电极之间的神经夹伤。荧屏上呈现单相动作电位。 《3)读出最大制徽时单相动作电位的显幅值和整个动作电位持续时间数值。 ()比较单相动作电位的上升时间或下降时间的长短，并分析与双相动作电位被形的 关系。 (5)按一定步长。刺澄强度从阀下刺藏增加至最大制激，记录动作电位最幅与制藏电 压对应数据。 如果用自动阁强度测定方法，设定起始度Q.1V,结来强度2T。步长0.05。 (6)换一神经干。用一小块浸有高浓度C1溶液的滤纸片贴附在记景电极：'处的神 经干上。记录C1作用前后、’电极引导的动作电位振幅和时程： (T)用一小块浸有3路procaine溶液的滤纸片贴用在记录电极r,'处的神经干上，记 录procaine作用前后r、r'电极引导的动作电位振幅和时程 结果 【,获得双相与单相动作电位波形结果图，测出测量正相、负相振幅及持续时问。 2.记录被宽为0.1■s时的阀上刺最和最大刺激的数值。 3,计算神经冲动的传导速度 4.对上述数据遗行统计处理. 5,绘铜激强度与动作电位振幅的关系图 6,神经干倒置前后，五”电极引导的双相动作电位探幅和时程，C1作用前后， 电极引导的动作电位叛幅和时程，rocaine f作用输后r,,'电极引导的动作电位银屬和时 程。 思考题 1.什么叫刺微伪迹？应怎样鉴？如何发生？
（2）分别测量两个动作电位起始点的时间，设通道 2 为 t1，通道 4 为 t2(或可直接测 量两个动作电位起点的间隔时间)求出 t2－t1 的时间差值。 （3）测量标本屏蔽盒中两对引导电极之间的距离 S(应测 r1－r2 的间距)。 7．观察和测定单相动作电位波形 （1）把神经干标本放置方向倒置，记录倒置前后 r1、r1′电极引导的双相动作电位振 幅和时程。 （2）用镊子将二个记录电极之间的神经夹伤，荧屏上呈现单相动作电位。 （3）读出最大刺激时单相动作电位的振幅值和整个动作电位持续时间数值。 （4）比较单相动作电位的上升时间或下降时间的长短，并分析与双相动作电位波形的 关系。 （5）按一定步长，刺激强度从阈下刺激增加至最大刺激，记录动作电位振幅与刺激电 压对应数据。 如采用自动阈强度测定方法，设定起始强度 0.1V，结束强度 2V，步长 0.05V。 （6）换一神经干，用一小块浸有高浓度 KCl 溶液的滤纸片贴附在记录电极 r2′处的神 经干上。记录 KCl 作用前后 r2、r2′电极引导的动作电位振幅和时程。 （7）用一小块浸有 3% procaine 溶液的滤纸片贴附在记录电极 r1′处的神经干上。记 录 procaine 作用前后 r1、r1′电极引导的动作电位振幅和时程。 结果 1．获得双相与单相动作电位波形结果图，测出测量正相、负相振幅及持续时间。 2．记录波宽为 0.1 ms 时的阈上刺激和最大刺激的数值。 3．计算神经冲动的传导速度 4．对上述数据进行统计处理。 5．绘制刺激强度与动作电位振幅的关系图 6．神经干倒置前后 r1、r1′电极引导的双相动作电位振幅和时程，KCl 作用前后 r2、r2′ 电极引导的动作电位振幅和时程，procaine 作用前后 r1、r1′电极引导的动作电位振幅和时 程。 思考题 1．什么叫刺激伪迹?应怎样鉴别?如何发生?
2,神经干动作电位的幅度在一定范围内面着侧激强度的变化而变化，这是否与神经纤 推动作电位的“全或无”性质相矛盾？ 3,倒换神经干标本的放置方向的目的是什么？ 4,如果在实验中发现采样窗中两个动作电位相距太近以致兴奋传导速度的测定有困难 时，应采取何种捐随？ 5,双相动作电位的上，下两相的幅值为问不等？ 6.如果单用一对记录电极能否测出神经干动作电位的传导速度？为什么？
2．神经干动作电位的幅度在一定范围内随着刺激强度的变化而变化，这是否与神经纤 维动作电位的“全或无”性质相矛盾? 3．倒换神经干标本的放置方向的目的是什么? 4．如果在实验中发现采样窗中两个动作电位相距太近以致兴奋传导速度的测定有困难 时，应采取何种措施? 5．双相动作电位的上、下两相的幅值为何不等? 6．如果单用一对记录电极能否测出神经干动作电位的传导速度?为什么?