实验35普鲁卡因半数致死量D50)的测定和计算 目的 通过实验了解测定药物1D的方法、步骤和计算过程。 材料 小鼠（体重17克，雄均可。应注明性别）：鼠笼，天平，1注墨： %生酸普鲁卡因溶液，苦味酸溶液。 方法和物骤 1.探素剂量范围：取小鼠810只，以2只为一组，分成45组，选择剂量间距较大的 一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液。观察出现的症状并记录死亡数，找出 引起作及100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在105150g/范围内），本步爱可由实 验室预先进行。 2.正式试验：在预试验所获得的0%和100八致死量的范围内，选用几个剂量《一最用5 个剂量。按等比级数增减，相邻剂量之问比刷为1：0.7或1：0.8)。各剂量组动物数为10 只，分别用苦味酸标记。动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物分组和剂量计算后按 组腹粒注射给药。最好先从中剂量组开始。以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断 两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在0%上下，死亡半为 0作线100时.不能用于计算。 实险以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组(10贝小鼠)，或每组各作每一剂 量组的2只小佩，务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，澄免非药物所致的死 亡，得到较理想的结果。 3,观察试验结果，给药后即观察小鼠活动改变情况和死亡数，存活者一般都在1520 分钟内族复常态，故观黎30分钟内的死亡率。 4,计算L及其95M可信限： 几。计算方法有多种，这里介绍最常用的加权直线回归法（®1ss法》。此法虽计算步理 稍繁，结果较精确，实标应用时可件助于计算机。 首先，用较大的剂量间距确定政死剂量的范围，进而在此范围内设定若干剂量组，剂量 按等比方式设计，相邻两个剂量间距比例在0.65广0,85之间，给药后观察714天内动物一 般情况和死亡数，根据死亡率计算L·请注意：若死亡率为100件和停的数据，其机率单 位为和一，数据可列于表格中，但不便用于计算。现用下述例子具体说明计算万法
实验 35 普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算 目的 通过实验了解测定药物 LD50 的方法、步骤和计算过程。 材料 小鼠（体重 17~25 克，雌雄均可，应注明性别）；鼠笼，天平，1ml 注射器； 2%盐酸普鲁卡因溶液，苦味酸溶液。 方法和步骤 1．探索剂量范围：取小鼠 8~10 只，以 2 只为一组，分成 4~5 组，选择剂量间距较大的 一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出 引起 0%及 100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在 105~150mg/kg 范围内）。本步骤可由实 验室预先进行。 2．正式试验：在预试验所获得的 0%和 100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用 5 个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为 1:0.7 或 1:0.8），各剂量组动物数为 10 只，分别用苦味酸标记。动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物分组和剂量计算后按 组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断 两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在 50%上下，死亡率为 0%或 100%时，不能用于计算。 实验以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组(10 只小鼠)，或每组各作每一剂 量组的 2 只小鼠。务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，避免非药物所致的死 亡，得到较理想的结果。 3．观察试验结果：给药后即观察小鼠活动改变情况和死亡数，存活者一般都在 15~20 分钟内恢复常态，故观察 30 分钟内的死亡率。 4．计算 LD50 及其 95%可信限： LD50 计算方法有多种，这里介绍最常用的加权直线回归法(Bliss 法)。此法虽计算步骤 稍繁，但结果较精确，实际应用时可借助于计算机。 首先，用较大的剂量间距确定致死剂量的范围，进而在此范围内设定若干剂量组，剂量 按等比方式设计，相邻两个剂量间距比例在 0.65~0.85 之间，给药后观察 7~14 天内动物一 般情况和死亡数，根据死亡率计算 LD50。请注意：若死亡率为 100%和 0%的数据，其机率单 位为+∞和-∞，数据可列于表格中，但不能用于计算。现用下述例子具体说明计算方法
例：将某批中药厚朴注射液腹注射于小鼠，三天内的死亡率如下 剂量 (g/ke》: 425 5.31 664 ,30 死亡率死亡数/试验动物数)： 1/10 3/10 5/10 9/10 求及其M可信限。计算步置如下： (1)列计算用表 将各项数据填入表116，机率单位和权重系数分别查附表A和附表B。 表11-6 小服腹腔注射厚朴注财液计算表 剂量agD 死亡率机率单位权重 权重 0 0 是 WX wa 系数 W 4.250.62840.39491010 3.72 0.343 3.43 2.15541.3545 5.31 072510.52581030 4.48 0.576 5.76 4.1766 3.0284 6.45082220.676010 50 5.00 0,637 6.37 5.2374 4.3067 830 0.91910.84471090 6.28 0.343 3.43 3.1525 28975 EW ΣWX WX2 18.99 14.7219115866 权重=权重系数×各组动物数() (2)计算D 1OgD与机率单位之同有线性关系，因此将10gD作为X,机率单位作为Y,用计算器作 直线目归.D。的对数值与机率单位5相对应，故输入5Y值)，连续按“sIFT”和“…)]” 健后曼示的X值，即为的对数（称为，取其反对数，就是在此例，结果为 F10gLD=0.7891 LDo-logm-6.1532g/kg (3)计算D的98路可信限 由于实验求得的D存在抽样误差，因此须按统计学方法确定1D值95路可能出现的范 围(95飞可信限)。在此例，由子■数相等，计算方法如下： a士1,96sa(S.为n的标准谈) F10gL几=07891《见上述i计算步 S=1/[m-X)/E-)2+1/E]
例：将某批中药厚朴注射液腹注射于小鼠，三天内的死亡率如下： 剂量 (g/kg)： 4.25 5.31 6.64 8 .30 死亡率(死亡数/试验动物数)： 1/10 3/10 5/10 9/10 求 LD50 及其 95%可信限，计算步骤如下： （1）列计算用表 将各项数据填入表 11-6，机率单位和权重系数分别查附表Ａ和附表Ｂ。 表 11-6 小鼠腹腔注射厚朴注射液 LD50 计算表 剂量 D logD X X2 n 死亡率 % 机率单位 Y 权重 系数 权重* Ｗ WX WX2 4.25 0.6284 0.3949 10 10 3.72 0.343 3.43 2.1554 1.3545 5.31 0.7251 0.5258 10 30 4.48 0.576 5.76 4.1766 3.0284 6.46 0.8222 0.6760 10 50 5.00 0.637 6.37 5.2374 4.3062 8.30 0.9191 0.8447 10 90 6.28 0.343 3.43 3.1525 2.8975 ΣW ΣWX ΣWX2 18.99 14.7219 11.5866 * 权重＝权重系数×各组动物数(n) （2）计算 LD50 logD 与机率单位之间有线性关系，因此将 logD 作为 X，机率单位作为 Y，用计算器作 直线回归。LD50 的对数值与机率单位 5 相对应，故输入 5(Y 值)，连续按“SHIFT”和“…)]” 键后显示的 X 值，即为 LD50 的对数(称为 m)，取其反对数，就是 LD50。在此例，结果为： m=logLD50=0.7891 LD50=log-1 m=6.1532g/kg （3）计算 LD50 的 95%可信限 由于实验求得的 LD50 存在抽样误差，因此须按统计学方法确定 LD50 值 95%可能出现的范 围(95%可信限)。在此例，由于 n 数相等，计算方法如下： m±1.96Sm(Sm 为 m 的标准误) m=logLD50=0.7891(见上述计算步骤) Sm 2 =1/b2 [(m-X) 2 /∑W(X-`X) 2 +1/∑W]
其中EC-0=E-(E)/工=0.1735.b-8.4806(从直线回归计算中得出)，`x= 工X/工-0.7752，因面 5=0.01397×【(0.7891-0.7752)/0.1735+0.03296]=0.0007512 国 a±1.965-0.7891±0.05372-0.73538-0.8282 分别取反对数，取D的95M可信限：5.4373-69634g/Λg (4)L及其93A可信限：&1532g/kg(5.4373-&934w/八k 结果 1.报告实验日期，药品批号，生产厂名，小限的性别和体重意围，给药途径，给药后的 中毒症状：并将剂量（单位体重所用药量，聪/kg),死亡率等D。的计算数据归钠简明的表 格（参照表11-书》，报告及其可信限主要计算过程和计算结果。 2。如实验失败或结果不理塑，可按同样要求对下述练习愿中的一个进行计算和报告。 陈习题 1,将某种中药制剂给小白鼠灌胃后，8小时内各剂量组的死亡数如下，求该药的几 及其95%可信限。 灌胃剂量(g/kg): 5126.408.0010.012.5 死亡数/实验动物数： 1/102/104/107/109/10 2.小鼠皮下注射有机精剂对晚磷(1605)1.8眼/kx,立即園粒注射不同剂量的氯横定 进行地收，观黎生存率（即氟磷定的有效率）如下： 氨磷定剂量(/kg):128 16.0 200 生存数/实验动物数： 1/10 6/10 9/10 求氧黄定的团。及其95%可信限：如果氧磷定的几。为173.6g/kg,郑么它的治疗指数 (T1)为多少？
其中∑W(X-`X) 2 =∑WX 2 -(∑WX) 2 /∑W=0.1735、b=8.4605(从直线回归计算中得出)、`X＝ ∑WX/∑W=0.7752,因而 Sm 2 =0.01397×[(0.7891-0.7752)2 /0.1735+0.05266]=0.0007512 m±1.96Sm=0.7891±0.05372=0.73538－0.84282 分别取反对数，取 LD50 的 95%可信限：5.4373－6.9634g/kg （4）LD50 及其 95%可信限：6.1532g/kg(5.4373－6.9634g/kg) 结果 1．报告实验日期，药品批号，生产厂名，小鼠的性别和体重范围，给药途径,给药后的 中毒症状；并将剂量(单位体重所用药量，mg/kg)，死亡率等 LD50 的计算数据归纳简明的表 格（参照表 11-6），报告 LD50 及其 95%可信限主要计算过程和计算结果。 2．如实验失败或结果不理想，可按同样要求对下述练习题中的一个进行计算和报告。 练习题 1．将某种中药制剂给小白鼠灌胃后，48 小时内各剂量组的死亡数如下，求该药的 LD50 及其 95%可信限。 灌胃剂量（g/kg）： 5.12 6.40 8.00 10.0 12.5 死亡数/实验动物数： 1/10 2/10 4/10 7/10 9/10 2．小鼠皮下注射有机磷制剂对硫磷(1605) 1.8mg/kg，立即腹腔注射不同剂量的氯磷定 进行抢救，观察生存率（即氯磷定的有效率）如下： 氯磷定剂量（mg/kg）: 12.8 16.0 20.0 生存数/实验动物数： 1/10 6/10 9/10 求氯磷定的 ED50 及其 95%可信限；如果氯磷定的 LD50 为 173.6mg/kg,那么它的治疗指数 （TI）为多少？