实验20药动学实险 药动学研究药物在生物体内的转运、代谢变化过程和药物浓度随时间变化的规律。其基 本的过程是药物的吸收、分布、代谢、排准。本实验包括三部分内容： 1,通过测定血，肝、脂防组织中确依类药物浓度，以了解药物的吸收及分布：2通过 测定正及骨功能受损家免血浆中P5P(酚确做)浓度分别求得PSP的血裘半衰期，以了解肾 功能提害对药物消隐的影响：及观察四氯化强损伤小鼠肝功能对药物作用的影响以间接了解 药物在体内轻肝脏代的情况。通过实数初步了解药动学的研究方法。 一、药物在体内的分布 目的观察小白鼠口服sodiun s细lfadiazine后一定时间血液、肝脏，新肪组织中药 物的浓度，以了解药物在体内分布的情况。 材料雄性小白鼠（体重25克以上：1l注射墨，灌胃忍，天平，外科算刀。限科 剪刀，离心管（含肝素）1只，10m1试管10只，试管架，1n1,2l、10a1吸管，80-2离心机， 漏斗，滤纸，组织匀家器，T200型数字式分光光度仪或721分光光度计，鼠笼。酸式及碱 式滴定管（供如试剂用），培养皿一只.10ml量简一只.l5横腹啼安钠sodiunsulfadiazine, SD-a)溶液，5跳三氯醋酸溶液，Q5跳瑞香草酚溶液，05M亚硝酸的溶液。 方法和岁骤 1,测定血中0浓度： (1)取小白鼠一只，用SD-溶液1.5g/kg15SD-物Q1l/10g》灌胃，记录给药 时间，于给药后5一60分钟剪断股动味或取眼球成血，将血滴入含有肝素或构牌酸钠的离 心管中。 (2)取血0.21置另一试管内，加%三氯醋酸溶液9.81，充分振离后放置10分钟， 过滤. (3)取花液6m1,加入0.5器亚丽酸销溶液0.5a1,充分摇匀后再知入0.5%购香草粉溶液 (以20库氢氧化钠溶液配切1,0m1,摇匀.做置10分钟后，用7200型分光光度计测定(460m■ 波长)，记录所得光密度，从标准由线查得磺胺嘴定浓度，所得数即为血中SD-:浓度。 2.测定肝、稻防中罐按密啶浓度：
实验 20 药动学实验 药动学研究药物在生物体内的转运、代谢变化过程和药物浓度随时间变化的规律。其基 本的过程是药物的吸收、分布、代谢、排泄。本实验包括三部分内容： 1．通过测定血、肝、脂肪组织中磺胺类药物浓度，以了解药物的吸收及分布；2.通过 测定正常及肾功能受损家兔血浆中 PSP(酚磺酞)浓度分别求得 PSP 的血浆半衰期，以了解肾 功能损害对药物消除的影响；3.观察四氯化碳损伤小鼠肝功能对药物作用的影响以间接了解 药物在体内经肝脏代谢的情况。通过实验初步了解药动学的研究方法。 一、药物在体内的分布 目的 观察小白鼠口服 sodium sulfadiazine 后一定时间血液、肝脏、脂肪组织中药 物的浓度，以了解药物在体内分布的情况。 材料 雌性小白鼠(体重 25 克以上)；1ml 注射器，灌胃器，天平，外科剪刀，眼科 剪刀，离心管(含肝素)1 只，10ml 试管 10 只，试管架，1ml、2ml、10ml 吸管，80-2 离心机， 漏斗，滤纸，组织匀浆器，7200 型数字式分光光度仪或 721 分光光度计，鼠笼。酸式及碱 式滴定管(供加试剂用)，培养皿一只。10ml 量筒一只。15%磺胺嘧啶钠（sodium sulfadiazine， SD-Na）溶液，5%三氯醋酸溶液，0.5%麝香草酚溶液，0.5%亚硝酸钠溶液。 方法和步骤 1．测定血中 SD 浓度： （1）取小白鼠一只，用 SD-Na 溶液 1.5g/kg(15%SD-Na 0.1ml/10g) 灌胃，记录给药 时间，于给药后 45－60 分钟剪断股动脉或取眼球放血，将血滴入含有肝素或枸橼酸钠的离 心管中。 （2）取血 0.2ml 置另一试管内，加 5%三氯醋酸溶液 9.8ml，充分振荡后放置 10 分钟， 过滤。 （3）取滤液 6ml,加入 0.5%亚硝酸钠溶液 0.5ml,充分摇匀后再加入 0.5%麝香草酚溶液 (以 20%氢氧化钠溶液配制)1.0ml，摇匀，放置 10 分钟后，用 7200 型分光光度计测定(460nm 波长)，记录所得光密度，从标准曲线查得磺胺嘧啶浓度，所得数即为血中 SD-Na 浓度。 2．测定肝、脂肪中磺胺嘧啶浓度：
(1)小鼠放血后，打开葡腔取肝脏及脂防组织（裹丸或明果附近处脂防组织较多，此外 两腹股沟处皮下亦有一定数量脂防组织供取用)于培养里中。肝脏和脂斯组织分别剪碎， (2)种取05克肝组织置于婆落三氯醋酸溶液201之匀浆器中研绵，将匀浆倒入另 一中试管，再加5⅓三氯量酸201研磨一次，匀浆也倒入上述试管中，然后以三氯醋酸 溶液流涤匀浆器，溶液也倒入上述试管中，总容积达10如1为止，充分拟摇，静置10分钟， 过滤， (3取就液6al,加入0.5跳亚硝酸钠溶液0.5a1,充分品匀后再如入0.5选麝香草酚溶液 1.0■l,摇匀后静置10分钟，川7200型分光光度计测定(460如■波长)，记录所得充密度， 从标准曲线上查得碳胺嘧呢钠浓度，将此数植乘以2/5（因所取组织量为Q5g)即为肝中 SD-a浓度。 (4)依同法测定脂肪组织中-备浓度。 3,标准曲线的制备：于一系列试管中，分别加入0.1s,008%.0.0绕、0.04书、002路. 0.01%、0.005的SD-Na溶液Q21,再分别加入5第三氯留酸溶液9.8阳1，摇匀，取6和1再 债次加入Q5%亚硝酸钠溶液0.5l,0.5%香草酚液11，摇匀后静置10分钟，以720 或721型分光光度计(460m被长)，记录各管的光密度。以光密度为飙座标，SD-Na浓度 (g/1001)为横隆标，在座标派上绘一标准曲线。 结果 表10-1。小鼠口服S-a后不再组织的含量比较 组织 sD浓度(g/100ml) 血 肝 脂防 注意点 1,标准曲线由实验室制备提供 2.空白管配制：以5殊三氯图酚酸溶液代替滤液，将5%三氯醋酸溶液6,0■1、05洗亚硝酸 销溶液0.5a1、0.5跳霸香草酚溶液1.0a1溶液混匀即可。 3直中sD浓度以g/100加1表示，而肝、脂防组织中SD含量以/100g湿重表示
（1）小鼠放血后，打开腹腔取肝脏及脂肪组织(睾丸或卵巢附近处脂肪组织较多，此外 两腹股沟处皮下亦有一定数量脂肪组织供取用)于培养皿中，肝脏和脂肪组织分别剪碎。 （2）秤取 0.5 克肝组织置于盛 5%三氯醋酸溶液 2.0ml 之匀浆器中研碎,将匀浆倒入另 一中试管,再加 5％三氯醋酸 2.0ml 研磨一次，匀浆也倒入上述试管中，然后以 5%三氯醋酸 溶液洗涤匀浆器，溶液也倒入上述试管中，总容积达 10ml 为止，充分振摇，静置 10 分钟， 过滤。 （3）取滤液 6ml,加入 0.5%亚硝酸钠溶液 0.5ml,充分摇匀后再加入 0.5%麝香草酚溶液 1.0ml，摇匀后静置 10 分钟，用 7200 型分光光度计测定(460nm 波长)，记录所得光密度， 从标准曲线上查得磺胺嘧啶钠浓度，将此数值乘以 2/5(因所取组织量为 0.5g)即为肝中 SD-Na 浓度。 （4）依同法测定脂肪组织中 SD-Na 浓度。 3．标准曲线的制备：于一系列试管中，分别加入 0.1%、0.08%、0.06%、0.04%、0.02%、 0.01%、0.005%的 SD-Na 溶液 0.2ml，再分别加入 5%三氯醋酸溶液 9.8ml，摇匀，取 6ml 再 依次加入 0.5% 亚硝酸钠溶液 0.5ml，0.5%麝香草酚液 1ml，摇匀后静置 10 分钟，以 7200 或 721 型分光光度计(460nm 波长)，记录各管的光密度。以光密度为纵座标，SD-Na 浓度 (mg/100ml)为横座标，在座标纸上绘一标准曲线。 结果 表 1 0 - 1 . 小鼠口服 SD-Na 后不同组织的含量比较 组织 SD 浓度(mg/100ml) 血 肝 脂肪 注意点 1．标准曲线由实验室制备提供 2．空白管配制：以 5%三氯醋酸溶液代替滤液，将 5%三氯醋酸溶液 6.0ml、0.5%亚硝酸 钠溶液 0.5ml、0.5%麝香草酚溶液 1.0ml 溶液混匀即可。 3.血中 SD 浓度以 mg/100ml 表示，而肝、脂肪组织中 SD 含量以 mg/100g 湿重表示
二、静脉注射形磺耻)的药动学参数计算 目的 观察药物静磺酞PS)在家兔体内随时同变化的代谢规律，拿据药动学参数的 计算方法，并比较正常家兔和肾功能受餐家兔药动学特点。 原理即静账注射后迅速分布全身，其血案浓度与各粗织器官的浓度之间保持动 态平衡，此时整个机体可视作单一房式，即一家模型。在给药后不同时何取血测定血药浓度， 依血药浓度与时间关系计算如下药动学参数： 1,血药浓度：血药浓度(C》随时间(t》变化的关系常用C一t曲线表示，0时刻的血 药浓度用C表示，1时刻的血药浓度用C表示等。 2.消除速半常数(k):指单位时阿内药物被消除的比率。P在体内的消除道循一缓 动力学规律，血药消除速度与血浆药物浓度成正比： 国 (20-1) 式中，C、,k分别为血药浓度、时阿和一级消除速率常数：负号表示药物浓度随时间 下降。201式积分后得： (20-2) 式中，C,C、e分别表示经t时间后的血药浓度、初始血药浓度和自然对数。0-1式 两侧取自然对数后得： InC=InC- kt (20-3) 20-3式中1C,与t之间的星线形关系，若已知几个时属点的血药浓度，则可计算出k 与C(利用直线回归分析法》。令1C=y,1n=a(a为成距》、-k=动(b为斜率》，1=%： 则20-3式可表示为直线方程：ybx+a. 3,消除半衰期(t):血浆S浓度下降一半所需要的时间。即PS的血浆半袭期 按20-3式，当C-0.5C时得
二、静脉注射酚磺酞(PSP)的药动学参数计算 目的 观察药物酚磺酞(PSP)在家兔体内随时间变化的代谢规律，掌握药动学参数的 计算方法，并比较正常家兔和肾功能受损家兔药动学特点。 原理 PSP 静脉注射后迅速分布全身，其血浆浓度与各组织器官的浓度之间保持动 态平衡，此时整个机体可视作单一房式，即一室模型。在给药后不同时间取血测定血药浓度， 依血药浓度与时间关系计算如下药动学参数。 1．血药浓度：血药浓度（C）随时间（t）变化的关系常用 C—t 曲线表示，0 时刻的血 药浓度用 C0 表示、t 时刻的血药浓度用 Ct 表示等。 2．消除速率常数（k）：指单位时间内药物被消除的比率。PSP 在体内的消除遵循一级 动力学规律，血药消除速度与血浆药物浓度成正比： （20-1） 式中，C、t、k 分别为血药浓度、时间和一级消除速率常数；负号表示药物浓度随时间 下降。20-1 式积分后得： （20-2） 式中，Ct、C0、e 分别表示经 t 时间后的血药浓度、初始血药浓度和自然对数。20-1 式 两侧取自然对数后得： lnCt=lnC0 – kt （20-3） 20-3 式中 lnCt 与 t 之间的呈线形关系，若已知几个时间点的血药浓度，则可计算出 k 与 C0（利用直线回归分析法）。令 lnCt=y、lnC0=a（a 为截距）、–k=b（b 为斜率），t=x， 则 20-3 式可表示为直线方程：y=bx+a。 3．消除半衰期(t1/2)：血浆 PSP 浓度下降一半所需要的时间，即 PSP 的血浆半衰期 t1/2。 按 20-3 式，当 C=0.5C0 时得
(20-4) 4,清除率(L)。指单位时问内有多少体液容积内的药量被清除，与消除速率常数的 关系为L《×Vd. 5,表观分布容积(Vd):PSP的表观分布容积(Vd》是按照其血浆药物浓度(C)推算 体内药物总量(A)在理论上应占有的体液容积，反映S在体内的分布广窄程度，计算公 式见下。 (20-5) A一般取0时刻（静脉注射后瞬间）的体内药量，C一胶取C(0时刻的血浆浓度。或 称初始浓度)。 5P主要经肾脏排准，家兔肾功能受损后，SP的排注速率减慢，与清除有关的常数(1a K,L)就会发生改变. 材料家兔两只：手术尊，眼科手术剪各1把直止血钳2把。动脉夹1个，动脉插 管1支，20l、5al、1n1注射墨各1副，7号及5号针头各1只，千洁刻度试管12支，5 吸管1支，200μ1移液器1把，丝线，干棉球，擦镜纸：80-2离心机，7200数字型分光 光度计：0.6PSP溶液，6M升求溶液，2O氨基甲酸乙脂或13 sodiun pentobarbital,稻 释液0,9%NC129加l+1NN0H1n1D,1肝素。 方法和步骤 1,肾功能受损家兔：实验前48小时给家兔皮下注财6%升表溶液Q,21八g,至实验 开如时该兔的骨功能已受相当损害，此即骨功能受损兔。 2.取肾功能正常的家兔及肾功能受枫的兔各1只，称重后用2%氨基甲酸乙酯作静脉 麻醉(1/kg体重)，肾功能受损家兔麻药剂量减至2/3。兔麻醇后青位固定于兔板，切开预 部皮肤。分离肌层，暴露颈动林，并游离钓3-4c■长，结扎运心端，用动称夹夹住近心端
（20-4） 4．清除率（CL）：指单位时间内有多少体液容积内的药量被清除，与消除速率常数的 关系为 CL=K×Vd。 5．表观分布容积（Vd）：PSP 的表观分布容积（Vd）是按照其血浆药物浓度（C）推算 体内药物总量（A）在理论上应占有的体液容积，反映 PSP 在体内的分布广窄程度，计算公 式见下。 （20-5） A 一般取 0 时刻（静脉注射后瞬间）的体内药量。C 一般取 C0（0 时刻的血浆浓度，或 称初始浓度）。 PSP 主要经肾脏排泄，家兔肾功能受损后，PSP 的排泄速率减慢，与消除有关的常数（t1/2， K，CL）就会发生改变。 材料 家兔两只；手术剪，眼科手术剪各１把，直止血钳２把，动脉夹１个，动脉插 管１支，20ml、5ml、1ml 注射器各 1 副，７号及５号针头各１只，干洁刻度试管 12 支，5ml 吸管 1 支，200 μl 移液器 1 把，丝线，干棉球，擦镜纸；80-2 离心机，7200 数字型分光 光度计；0.6%PSP 溶液，6%升汞溶液，20%氨基甲酸乙酯或 1% sodium pentobarbital，稀 释液(0.9% NaCl 29ml+1N NaOH 1ml)，1%肝素。 方法和步骤 1．肾功能受损家兔：实验前 48 小时给家兔皮下注射６％升汞溶液 0.2ml/kg，至实验 开始时该兔的肾功能已受相当损害，此即肾功能受损兔。 2．取肾功能正常的家兔及肾功能受损的兔各１只，称重后用 20%氨基甲酸乙酯作静脉 麻醉(1g/kg 体重)，肾功能受损家兔麻药剂量减至 2/3。兔麻醉后背位固定于兔板，切开颈 部皮肤，分离肌层，暴露颈动脉，并游离约３-４cm 长，结扎远心端，用动脉夹夹住近心端
在靠近结扎的部位用眼科手术醇在动账蚕上尊1形小切口，拓入动脉插管，结扎固定。取血 时松开动脉夹即可， 3.从耳锋静体注射1肝素1l/g,在另一测耳缘静林注射0,6PS溶液02l/八kg体 重)。注射后2,5,10,15,20,25分钟分别从项动账取血，每次取直21（注意每次取直 前应将导管内的陈血放去)，置于刻度试管内，离心10分钟2000转/分)后取血浆0.2l,置 于另一试管，加稀释液3细1摇匀待测定。 4.P血浆浓度计算：以7200分光光度计在被长520mn处测定5P含量。先用稀释浅 调零，然后测定释释后血浆的吸光度。将测到的吸光度乘以R13(实验室已利用不同浓度的 PSP标准液计算吸光度与PSP浓度的线性关系，得到吸光系数=8.13)，再乘稀释倍数16， 即为5P的血浆浓度。 5.药动学参数计算 将不同时间点的PSP直浆浓度(O记入表1-2，然后换算成1Ct,将时间t作为x,1nCt 作为y用直线回归分析法（方法见本实验用录》求得候距(=1C,》及解率(b=k)，再计 算C,k,tu,Vd,CL 表10-2 家鱼静脉注射S后不同时间血浆浓度 取直时间 10 15 20 25 (nin)(x) 吸光度 PSP浓度 (ng/ml) InCt (y) 药动学参数计算方法： InCt "KXt+lnCe C.(ng/al)=In"a K(min")=-b Tv:(min)=0.693/k Yd(ml/kg)=A(mz/kg)/C.(ml/L)
在靠近结扎的部位用眼科手术剪在动脉壁上剪１形小切口，插入动脉插管，结扎固定。取血 时松开动脉夹即可。 3．从耳缘静脉注射 1%肝素 1ml/kg，在另一侧耳缘静脉注射 0.6%PSP 溶液(0.2ml/kg 体 重)。注射后 2，5，10，15，20，25 分钟分别从颈动脉取血,每次取血 2ml（注意每次取血 前应将导管内的陈血放去）,置于刻度试管内,离心 10 分钟(2000 转/分)后取血浆 0.2ml，置 于另一试管，加稀释液 3ml 摇匀待测定。 4．PSP 血浆浓度计算：以 7200 分光光度计在波长 520nm 处测定 PSP 含量。先用稀释液 调零，然后测定释释后血浆的吸光度。将测到的吸光度乘以 8.13(实验室已利用不同浓度的 PSP 标准液计算吸光度与 PSP 浓度的线性关系，得到吸光系数 D=8.13)，再乘稀释倍数 16， 即为 PSP 的血浆浓度。 5．药动学参数计算 将不同时间点的 PSP 血浆浓度(C)记入表 10-2，然后换算成 1nCt。将时间 t 作为 x，1nCt 作为 y，用直线回归分析法(方法见本实验附录)求得截距（a=1nC0）及斜率（b=-k），再计 算 C0，k，t1/2，Vd，CL。 表 10-2 家兔静脉注射 PSP 后不同时间血浆浓度 取血时间 (min)(x) 2 5 10 15 20 25 吸光度 PSP 浓度 (mg/ml) 1nCt(y) 药动学参数计算方法： 1nCt =K×t+1nC0 C0(mg/ml)＝ln-1 a K(min-1 )＝-b T1/2(min)＝0.693/k Vd(ml/kg)＝A(mg/kg)/C0(ml/L)
Cl.(al/kz/min)=K.Vd 姑暴 将本组正常家兔与肾功能受损家兔的药动学参数计算结果填入表10-3，将全 班的数据进行统计处理。并作1加Ct图（见图10201）·对结果进行分析讨论， 表10-3 正常家兔与肾功能受提家免的药动孕参数 参 数 正常家兔 肾损家兔 K(nin) tua(ain） Vd(ml/kg) CL(nl/kg/n in) 往意点 1。供测定用的血样应严格避免污染，尤其不能被S即药液污染。 2.取血和处理血样本时应尽量注意道免溶血，明显溶血的血浆不能用于SP含量测定。 三、肝功能对药物作用的影有 目的 观察小白候肝功能损伤对sodiun thiopes■tal的作用的影响。 材料 小白鼠：天平，lnl注射器，鼠笼：0.4格sodiun thiopental溶液，10%四氧化 成，苦味酸溶液。 方法和抄骤 1,试验前24小时用四氯化碳规伤小白鼠肝功能。即以10优四氯化碳0,21/10g皮下注 射（由教研组预先注射好》
CL(ml/kg/min)＝K·Vd 结果 将本组正常家兔与肾功能受损家兔的药动学参数计算结果填入表 10-3，将全 班的数据进行统计处理。并作 lnCt-t 图（见图 10-20-1）。对结果进行分析讨论。 表 10-3 正常家兔与肾功能受损家兔的药动学参数 参 数 正常家兔 肾损家兔 K(min-1 ) t1/2(min) Vd(ml/kg) CL(ml/kg/m in) 注意点 1．供测定用的血样应严格避免污染，尤其不能被 PSP 药液污染。 2．取血和处理血样本时应尽量注意避免溶血，明显溶血的血浆不能用于 PSP 含量测定。 三、肝功能对药物作用的影响 目的 观察小白鼠肝功能损伤对 sodium thiopental 的作用的影响。 材料 小白鼠；天平，1ml 注射器，鼠笼；0.4%sodium thiopental 溶液，10%四氯化 碳，苦味酸溶液。 方法和步骤 1．试验前 24 小时用四氯化碳损伤小白鼠肝功能。即以 10%四氯化碳 0.2ml/10g 皮下注 射（由教研组预先注射好）
2.取体重相近的正常小自限及肝功能已损伤小自假各一贝，称体重，以苦味酸溶液作 好标记。异试其翻正反射是否存在。（将小白鼠仰卧试验台上，若能恢复正常体位，为翻正 反射存在，否则为翻正反射消失)。 3.分别由腹腔注射(ip)0.%sodiun thiopental溶液，Q.1ml/10g(40mg/kg)记录并比 较两组小鼠麻醉作用隆持时间有何差别？麻醉作用以盟正反射消失为番标，麻醉作用维持时 间即从翻正反射消失到恢复所持续的时间。 4,将小白鼠处死（用骥裤脱日法），剂税肝鞋观察形态改变，并注意肝脏形态改变与麻 醇作用维持时间的关系。 结果 记录实验各项试验结果。并进行分析讨论 注意点 如果已下课，小白鼠仍未从麻脖状老转为清醒，其麻醉作用排持时间测记作大于多少分 钟
2．取体重相近的正常小白鼠及肝功能已损伤小白鼠各一只，称体重，以苦味酸溶液作 好标记。并试其翻正反射是否存在。(将小白鼠仰卧试验台上，若能恢复正常体位，为翻正 反射存在，否则为翻正反射消失)。 3．分别由腹腔注射(ip)0.4% sodium thiopental 溶液，0.1ml/10g(40mg/kg)记录并比 较两组小鼠麻醉作用维持时间有何差别？麻醉作用以翻正反射消失为指标。麻醉作用维持时 间即从翻正反射消失到恢复所持续的时间。 4．将小白鼠处死(用颈椎脱臼法)，剖视肝脏观察形态改变，并注意肝脏形态改变与麻 醉作用维持时间的关系。 结果 记录实验各项试验结果，并进行分析讨论。 注意点 如果已下课，小白鼠仍未从麻醉状态转为清醒，其麻醉作用维持时间则记作大于多少分 钟