实验32合性骨功能不金 目的 学习用氯化高汞复制急性中毒性肾功能不全的动物慎型：观察急性肾功能不全 时保沉渣，尿蛋白，血尿素氯，肾酚红排液率的变化及肾形态学的改变，并根据实验结果分 析和讨论急性骨功能不全的发病机理。 材料家兔：7200分光光度计，光学显微镜，离心机，计滴器，相温水浴，手术器 械，清精灯，试管架。试管，试管夹，吸管，滴管，量筒，玻片，1%氯化高来(C:)溶 液，20序氢基甲酸乙酯，0,5酚红，100H,醋酸，酸性温合试剂，2路二乙酰一肟，尿素 氨标准液(0.02g/1),生理盐水。 方法和岁骤 1.免2只，实验前二天，一只按1.21/kg体重剂量皮下或肌肉挂射1氯化高汞迹成 急性骨功能不全备用。另一贝则在相同部位注射同容机的生理盐水作为对照。 2,作氢基甲酸乙脂按1/kg体重剂量耳锋静脉麻醉。兔麻醉后，特卧固定，按30如1/k 体重剂量静林缓没注射5韩葡萄，溶液，以利尿的生成。 3,分离一侧现总动脉。结扎现总动脉远心端。用动账夹夹住运心瑞，以备抽血用。 4.下腹部剪毛，从耻骨联合向上沿中线作长约■的切口，沿腹自线打开覆腔，暴露 膀酰，将膀酰轻拉到腹壁外。在膀酰度部认请并仔细分离两侧输尿管。用粗线结扎两侧输尿 管的近榜酰处，以阻断尿流。在两侧输尿管离结扎处等距离上用围科剪各剪一小口，分别朝 骨方向插入一根细导尿管：用线将输尿管和导尿管结扎固定，使尿液能从导尿管中流出面不 渗漏。将两侧导尿管外璃用线扎并在一起，并接入计滴器破管内。手术完毕后，用黑热的生 理盐水纱布履盖颈部和腹部的创口。 观察项目 1,直清尿素氨(N)测定： (1)原理：血清保素氮在酸性条件下与二乙酰一肟共热后缩合生成的红色化合物（二 嗪粉生物》，其颜色的深浅与N的含量成正比， (2)从颈总动林抽血3`4l,拔出针头，轻轻注入干燥试管，试管斜置5■m:特凝后 离心(1500a)10加in,将分离出的直清移入小试管中备用
实验 32 急性肾功能不全 目的 学习用氯化高汞复制急性中毒性肾功能不全的动物模型；观察急性肾功能不全 时尿沉渣、尿蛋白、血尿素氮、肾酚红排泄率的变化及肾形态学的改变，并根据实验结果分 析和讨论急性肾功能不全的发病机理。 材料 家兔；7200 分光光度计，光学显微镜，离心机，计滴器，恒温水浴，手术器 械，酒精灯，试管架，试管，试管夹，吸管，滴管，量筒，玻片，1%氯化高汞（HgCl2）溶 液，20%氨基甲酸乙酯，0.5%酚红，10%NaOH，5%醋酸，酸性混合试剂，2%二乙酰一肟，尿素 氮标准液（0.02mg/ml），生理盐水。 方法和步骤 1．兔 2 只，实验前二天，一只按 1.2ml/kg 体重剂量皮下或肌肉注射 1%氯化高汞造成 急性肾功能不全备用，另一只则在相同部位注射同容积的生理盐水作为对照。 2．20%氨基甲酸乙酯按 1g/kg 体重剂量耳缘静脉麻醉。兔麻醉后，仰卧固定。按 30ml/kg 体重剂量静脉缓慢注射 5%葡萄糖溶液，以利尿的生成。 3．分离一侧颈总动脉。结扎颈总动脉远心端，用动脉夹夹住远心端，以备抽血用。 4．下腹部剪毛，从耻骨联合向上沿中线作长约 4cm 的切口，沿腹白线打开腹腔，暴露 膀胱，将膀胱轻拉到腹壁外。在膀胱底部认清并仔细分离两侧输尿管。用粗线结扎两侧输尿 管的近膀胱处，以阻断尿流。在两侧输尿管离结扎处等距离上用眼科剪各剪一小口，分别朝 肾方向插入一根细导尿管。用线将输尿管和导尿管结扎固定，使尿液能从导尿管中流出而不 渗漏。将两侧导尿管外端用线扎并在一起，并接入计滴器玻管内。手术完毕后，用温热的生 理盐水纱布覆盖颈部和腹部的创口。 观察项目 1．血清尿素氮（BUN）测定： （1）原理：血清尿素氮在酸性条件下与二乙酰一肟共热后缩合生成的红色化合物（二 嗪衍生物），其颜色的深浅与 BUN 的含量成正比。 （2）从颈总动脉抽血 3~4ml，拔出针头，轻轻注入干燥试管，试管斜置 5min，待凝后 离心（1500rpm）10min，将分离出的血清移入小试管中备用
(3)取硬质试管3支编号，分别为空白管、标准管及测定管。按表112分别加入各成 分 表11-2 血尿尿素氨测定 试剂 空白管 标准管 测定管 燕第水《a]) 0.1 尿素氯标准液(1) 0.1 1:4稀释血清(1) 0,1 酸性混合试剂《1) 5.0 5.0 5.0 二乙酰一矜液(a1) 0.5 0.5 0.5 总容量(al) 5.6 5.6 5.6 《4)将上述各管摇匀，1`2min内置沸水中加热10ain,立即用冷水冷却5ain,用绿色 滤光板(520a波长)在比色计中比色. 计算 国 2.肠红(PSP)排潘试验： (1)从耳缘静休快速注入Q6俏酚红0.5阳l,记下时间. (2)记录30如in尿量，并算出每分钟尿量值. (3)将30mn尿液移入250ml的量筒内，加入10Na0阳5al,使之显色。加蒸馏水至 250ml,搅排均匀. (4)从量简中吸出尿液5l,置于试管中，与标准管比色，求出尿液中的排淮率。 3.尿蛋白定性试险： 取尿液35l,如到试管的2/3处。用试管夹夹住试管底部，使试管向上倾解。用清精 灯火焰在尿斜面下12©■处加热至煮沸。观察尿液，如有白色混浊。加入雅醋酸35滴后 再煮沸。若尿液变清是展内无机盐所致。若混浊加重，表示尿中有蛋白。根据尿液混渔程度 进行蛋白含量判定 表11-3 尿蛋白判断标准
（3）取硬质试管 3 支编号，分别为空白管、标准管及测定管，按表 11-2 分别加入各成 分。 表 11-2 血尿尿素氮测定 试剂 空白管 标准管 测定管 蒸馏水（ml） 0.1 － － 尿素氮标准液（ml） － 0.1 － 1:4 稀释血清（ml） － － 0.1 酸性混合试剂（ml） 5.0 5.0 5.0 二乙酰一肟液（ml） 0.5 0.5 0.5 总容量（ml） 5.6 5.6 5.6 （4）将上述各管摇匀，1~2min 内置沸水中加热 10min，立即用冷水冷却 5min，用绿色 滤光板（520nm 波长）在比色计中比色。 计算： 2．酚红（PSP）排泄试验： （1）从耳缘静脉快速注入 0.6%酚红 0.5ml，记下时间。 （2）记录 30min 尿量，并算出每分钟尿量值。 （3）将 30min 尿液移入 250ml 的量筒内，加入 10%NaOH 5ml，使之显色。加蒸馏水至 250ml，搅拌均匀。 （4）从量筒中吸出尿液 5ml，置于试管中，与标准管比色，求出尿液中的排泄率。 3．尿蛋白定性试验： 取尿液 3~5ml，加到试管的 2/3 处。用试管夹夹住试管底部，使试管向上倾斜。用酒精 灯火焰在尿斜面下 1~2cm 处加热至煮沸。观察尿液，如有白色混浊，加入 5%醋酸 3~5 滴后 再煮沸。若尿液变清是尿内无机盐所致。若混浊加重，表示尿中有蛋白。根据尿液混浊程度 进行蛋白含量判定： 表 11-3 尿蛋白判断标准
无藏浊轻度混浊稀薄乳样混浊顾粒及絮状混浊凝集成块 程度 # +特 中中中 含蛋白量) 0.010.050050.2 0.20.5 20.5 4.尿液镜检 《1)取保液一滴于玻片上，显微镜高倍视野下计爱细胞和低修视野下计数管型，用10 个视野的结果，以最低数至最高数报告， (2)取一定量的候液置于离心管中离心(1500rpm)5ain,取候沉渣涂片，同样用10 个视野的观察值计算细围及管型平均值。 5.于耳锋静林注射10■1空气处死家兔，解制取出骨脏，称重，测肾脏与体重之比（最 好用去肠道体重)，并观察肾外形、质地及肾纵切面（但括包展、皮、精质分界、皮质条纹 及色泽)。 注意点 1,每项观察项目均以正常家兔为对理记录。 2.血清、标准液等试剂用量应准确。 3.掌挥好煮沸、冷却时间，香则颜色反应不准确。 结果 列表或用文字记录各项观察指标，并分析说明这些指标改变的机制： 思考题 1,试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性肾功能不全的主要发病机制是什么： 2.哪些实验结果可说明骨血流量减少也参与升汞中毒性得衰的发生机制？为什么肾血 液量会诚少？ 3,血尿素氢计算公式是如可推导来的？ 4。试分析保中出现管型和上皮细围的成因，并设明其在鉴别功隆性和器质性肾衰中的 意义。 附录 试料的配刺
无混浊 轻度混浊 稀薄乳样混浊 颗粒及絮状混浊 凝集成块 程度 － + ++ +++ ++++ 含蛋白量(g%) 0.01~0.05 0.05~0.2 0.2~0.5 >0.5 4．尿液镜检 （1）取尿液一滴于玻片上，显微镜高倍视野下计数细胞和低倍视野下计数管型，用 10 个视野的结果，以最低数至最高数报告。 （2）取一定量的尿液置于离心管中离心（1500rpm）5min，取尿沉渣涂片，同样用 10 个视野的观察值计算细胞及管型平均值。 5．于耳缘静脉注射 10ml 空气处死家兔，解剖取出肾脏，称重，测肾脏与体重之比（最 好用去肠道体重），并观察肾外形、质地及肾纵切面（包括包膜、皮、髓质分界、皮质条纹 及色泽）。 注意点 1．每项观察项目均以正常家兔为对照记录。 2．血清、标准液等试剂用量应准确。 3．掌握好煮沸、冷却时间，否则颜色反应不准确。 结果 列表或用文字记录各项观察指标，并分析说明这些指标改变的机制。 思考题 1．试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性肾功能不全的主要发病机制是什么？ 2．哪些实验结果可说明肾血流量减少也参与升汞中毒性肾衰的发生机制？为什么肾血 液量会减少？ 3．血尿素氮计算公式是如何推导来的？ 4．试分析尿中出现管型和上皮细胞的成因，并说明其在鉴别功能性和器质性肾衰中的 意义。 附录 试剂的配制
1,尿素氨标准贮备液（含氨200w/L),称取地聚4286g,用容量瓶加水至1000加1. 特溶解后倒入棕色瓶内，贮冰箱备用， 2.尿素氨标准应用液（含氨Q02/1),监用前将尿素氯标准液用蒸馆水稀释10倍 即成。 3.酸性复合试剂，将昆S0《AR)44m1,0,(R)66l轻经倒入800加】水中。再加氨 基硫聚50感。硫酸辐2g。持溶解后移入1000ml容量瓶中加水至刻度
1．尿素氮标准贮备液（含氮 200mg/L）：称取纯脲 428.6g，用容量瓶加水至 1000ml， 待溶解后倒入棕色瓶内，贮冰箱备用。 2．尿素氮标准应用液（含氮 0.02mg/ml），临用前将尿素氮标准液用蒸馏水稀释 10 倍 即成。 3．酸性混合试剂，将 H2SO4（AR）44ml，H3PO4（AR）66ml 轻轻倒入 800ml 水中，再加氨 基硫脲 50mg，硫酸镉 2mg，待溶解后移入 1000ml 容量瓶中加水至刻度