ICS65.120 B46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1258-2007 饲料中苏丹红染料的测定 高效液相色谱法 Determination of sudandyes in feed High-performance liquid chromatography 中国 WWw. 2007-01-19发布 2007-01-19实施 中华人民共和国农业部发布 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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NY/T1258-2007 前 言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）。 本标准主要起草人：李兰、杨曙明、索德成、闫惠文、刘庆生。 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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NY/T1258-2007 饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中的苏丹红染料，方法定量限为0.05g/kg。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红V 的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 3原理 试样中苏丹红染料经乙腈振荡提取后，氨气吹干浓缩，注人高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分 离，用紫外检测器和二极管矩阵检测器进行定性、定量测定。 4试剂和溶液 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2乙腈：分析纯。 4.3流动相：溶剂A一乙腈；溶剂B一水。 4.4苏丹红染料标准品：苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的纯度均应大于95%。 4.5苏丹红染料标准溶液 45.1苏丹红染料标准贮备液：分别准确称取已知纯度的苏丹红标准品苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红 Ⅲ、苏丹红N各10mg,精确至0.0001g,分别置于100mL棕色容量瓶中，加乙腈(4.1)超声使之完全溶 解，并定容至刻度，摇匀。该溶液中苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红V浓度均为100g/L,于 4℃保存可使用3个月。 4.5.2苏丹红染料标准中间液：分别准确移取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红V标准贮备液 (4.5.1)各5mL,置于50mL棕色容量瓶中，用乙腈(4.1)定容至刻度。该溶液中苏丹红染料浓度为10 g/mL,于4℃保存可使用1个月。 4.5.3苏丹红染料标准工作液：准确移取苏丹红染料标准中间液(4.5.2)0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0 mL、10.0mL于50mL棕色容量瓶中，用乙腈(4.1)定容至刻度。此时，溶液中苏丹红染料的浓度分别 为0.1g/mL、0.2g/mL、0.5g/mL、1.0g/mL、2.0g/mL,于4℃保存可使用一周。 5仪器和设备 除实验室常用仪器和设备外，还包括： 5.1电子天平：精度为万分之一和千分之一各1台。 1 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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NY/T1258-2007 5.2振荡器。 5.3高效液相色谱仪：紫外检测器（多波长）和二极管矩阵检测器。 5.4针头过滤器：备孔径为0.45m有机微孔滤膜。 5.5离心机：5000r/mina 5.6氯吹仪：50℃。 5.7涡轮混合器：2500r/min。 6试样的选取和制备 6.1按GB/T14699.1采样。 6.2选取有代表性饲料样品至少500g,四分法缩减至100g,粉碎，全部通过孔径为0.42mm的试验 筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存，备用。 7分析步骤 7.1试液的制备 7.1.1提取 称取配合饲料10g;浓缩饲料、添加剂预混合饲料样品5g(精确至0.001g),置于150mL具塞锥形 瓶中，加入50mL的乙腈(4.2)，于振荡器(5.2)振荡提取30min,离心，上清液备用。 7.1.2准确吸取试液(7.1.1)中配合饲料提取液10mL,氮气吹干，加入2mL乙腈(4.1)涡轮混合器 (5.7)混合30s,过孔径为0.45m的有机滤膜，滤液上机测定。 7.1.3浓缩饲料、添加剂预混合饲料提取液直接上液相色谱仪测定。 7.2色谱条件 7.2.1色谱柱 具有C18填料的柱子（粒度为5m):柱长250mm,内径4.6mm。 7.2.2流动相(4.3) 以1.0mL/min流速梯度洗脱。梯度条件见表1。 表1洗脱梯度表 时间(min) 溶剂(A%) 溶剂(B%) 0.00 95 5 8.00 100 0 8.50 100 0 28.0 100 0 29.0 95 5 35.0 95 5 7.2.3进样量 50L。 7.2.4检测器 紫外检测器和二极管矩阵检测器，检测波长苏丹红I为478nm;苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红V均 为520nm. 7.3测定 2 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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NY/T1258-2007 7.3.1定性测定 二极管矩阵检测器定性。样品峰只有满足下述条件，才能证实是苏丹红染料： )样品峰的保留时间与标准峰的保留时间相同（差异≤±5%）。如有怀疑，需做标准物添加（即 将标准物加到样品中)实验。 b)波长大于220nm、样品的光谱图应与标准品光谱图无明显差别，样品峰与标准峰的最大吸收 波长相同，即其差异不大于检测系统分辨率决定的范围（一般是2nm~4nm)。 7.3.2定量测定 7.3.2.1按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注入待测定苏丹红染料标准 液(4.5.3)及试液(7.1)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。 7.3.2.2结果计算 试样中每种苏丹红染料的含量按式(1)分别计算： W=PXVXCx V Pt×mXV …(1） 式中： 资游 W:一试样中每种苏丹红的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); P:—试样溶液峰面积值； V—样品的总稀释体积，单位为毫升(mL); C:—标准溶液浓度，单位为微克每毫升(g/mL)； V.一标准溶液进样体积，单位为微升(L); P.—标准溶液峰面积平均值； —试样质量，单位为克(g)； org.( m V一试样溶液进样体积，单位为微升(L)。 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。 8重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。 3 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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NY/T1258-2007 附录A (资料性附录) 苏丹红标准色谱图 DAD1B,Sig=520,4Ref=off20061218SU00.0006.D) mAu 苏丹红I 苏丹红Ⅱ 苏丹红Ⅲ 苏丹红N 6 4 2 0 源网 0 中国食文全 10 30 min www.fsr.org. 4 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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L/XN 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn 中华人民共和国 农业行业标准 饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法 NY/T1258-2007 中国农业出版社出版 (北京市朝阳区麦子店街18号楼) (邮政综码：100026网址：www.ccap,com.cn) 中国农业出版社印刷厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 开本880mm×1230mm1/16印张0.75 字数7千字 2007年1月第1版2007年1月北京第1次印刷 书号：16109·1090印数：1~500册 版权专有侵权必究 举报电话：(010)65005894 中国食品安全资源网 www.fsr.org.cn
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