实验六 负荷尿中核黄素的测定 （荧光法） （一）目的意义 尿中核黄素排出量测定是评价人体核黄素营养状况的一种方法，包括负荷试 验和核黄素肌酐比值测定。 （二）原理 含有核黄素的溶液在紫外线下发黄绿色荧光，在稀溶液中荧光强度与核黄素 浓度成正比。核黄素又可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光 强度可去除干扰性荧光物质的影响。 （三）仪器与试剂 1．荧光光度计 2．酸性水 取浓硫酸 0.3ml，加蒸馏水至 200ml。 3．核黄素标准储备液 精密称取 25mg 核黄素于 1000ml 容量瓶中，用酸性 水稀释至刻度，移至棕色瓶内，冷藏备用。 4．核黄素标准应用液 吸取上液 4ml，用酸性水稀释至 100ml。临用时配 制。 5．低亚硫酸钠（Na2S2O4） （四）操作步骤 1．样品 取尿样 lml 加酸性水 19ml 于一具塞试管内，混匀，在激发波长 420nm 和发射波长 530nm 处测定荧光强度。记下读数（A）后，取 10mg 低亚硫 酸钠直接加人比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度并读数（B）。 2．内标准 取尿样 1.0ml 加核黄素标准应用液 1.5ml，加酸性水 17.5ml，混 匀，在同样情况下测定荧光强度，记下读数（C），取 10mg 低亚硫酸钠直接加入 比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度并读数（D）。 （五）结果计算 （六）说明
实验六 负荷尿中核黄素的测定 （荧光法） （一）目的意义 尿中核黄素排出量测定是评价人体核黄素营养状况的一种方法，包括负荷试 验和核黄素肌酐比值测定。 （二）原理 含有核黄素的溶液在紫外线下发黄绿色荧光，在稀溶液中荧光强度与核黄素 浓度成正比。核黄素又可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光 强度可去除干扰性荧光物质的影响。 （三）仪器与试剂 1．荧光光度计 2．酸性水 取浓硫酸 0.3ml，加蒸馏水至 200ml。 3．核黄素标准储备液 精密称取 25mg 核黄素于 1000ml 容量瓶中，用酸性 水稀释至刻度，移至棕色瓶内，冷藏备用。 4．核黄素标准应用液 吸取上液 4ml，用酸性水稀释至 100ml。临用时配 制。 5．低亚硫酸钠（Na2S2O4） （四）操作步骤 1．样品 取尿样 lml 加酸性水 19ml 于一具塞试管内，混匀，在激发波长 420nm 和发射波长 530nm 处测定荧光强度。记下读数（A）后，取 10mg 低亚硫 酸钠直接加人比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度并读数（B）。 2．内标准 取尿样 1.0ml 加核黄素标准应用液 1.5ml，加酸性水 17.5ml，混 匀，在同样情况下测定荧光强度，记下读数（C），取 10mg 低亚硫酸钠直接加入 比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度并读数（D）。 （五）结果计算 （六）说明
1．所有操作需在暗室内进行。 2．作内标准的目的是除去尿样中可能存在的有荧光的物质。 3．使用荧光光度计是需用荧光红钠校正。 荧光红钠溶液的配制：溶解 25.0mg 荧光红钠（sodium fluorescein）于少量 水中，搅拌使其溶解后加水至 250ml，此液为储备液。取储备液 0.25ml 加水稀 释成 250ml，为工作液。 校正步骤：现选择所需激发波长和发射波长，校正仪器零点，然后以荧光红 钠工作液校正荧光计使指针在某一刻度，在测定样品的荧光强度。 4. 如遇尿样混浊，难以直接读数，可将尿液按食品中核黄素测定方法稀释 后，过硅镁层析柱再进行测定
1．所有操作需在暗室内进行。 2．作内标准的目的是除去尿样中可能存在的有荧光的物质。 3．使用荧光光度计是需用荧光红钠校正。 荧光红钠溶液的配制：溶解 25.0mg 荧光红钠（sodium fluorescein）于少量 水中，搅拌使其溶解后加水至 250ml，此液为储备液。取储备液 0.25ml 加水稀 释成 250ml，为工作液。 校正步骤：现选择所需激发波长和发射波长，校正仪器零点，然后以荧光红 钠工作液校正荧光计使指针在某一刻度，在测定样品的荧光强度。 4. 如遇尿样混浊，难以直接读数，可将尿液按食品中核黄素测定方法稀释 后，过硅镁层析柱再进行测定