1 实训十四 可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量 一、实训目的 1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量的原理及方法。 2、熟悉可见分光光度计的使用方法。 二、实训原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有 机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有 4-羰基，3-或 5-羟基和邻二酚羟基的结构，可与铝盐、铅盐、 镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用分光光度法测定其含量。本实验利用 黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与 Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物(λ max＝ 5l0nm)，从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。 三、仪器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。 2、乙醇（A.R）、5％亚硝酸钠溶液、10％硝酸铝溶液、lmol/L 氢氧化钠溶液。 3、槲皮素（中国药品生物制品检定所）。 4、大山楂丸（市售品）。 四、实训操作 1、对照品溶液的配制 精密称取槲皮素对照品 20mg，置 100mL 容量瓶中，加 95％乙醇 50mL 使溶解，然后 加 50％乙醇稀释至刻度，即得 0.2mg／mL 的对照品溶液。 2、标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于 10mL 容量瓶中， 各加 50％乙醇溶液使成 5mL，精密加入 5％亚硝酸钠溶液 0.3mL，摇匀，放置 6 分钟， 加入 l0％硝酸铝溶液 0.3mL，摇匀，再放置 6 分钟，加入 1％氢氧化钠溶液 4mL，分别 用 50％乙醇稀释至刻度，摇匀，放置 15 分钟。以第一瓶作空白，用分光光度计在 510nm 处测其吸收度，作 A—C 标准曲线（或计算其回归方程）。 3、样品溶液的制备 精密称取 120℃干燥 2 小时的大山楂丸 0.65g，两份，分别置索氏提取器中，用 95% 乙醇回流提取 1.5 小时（至提取液无色），将提取液分别移至 50mL 容量瓶中，补加 95% 乙醇至刻度，摇匀即得。 4、含量测定 精密量取提取液 lmL，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方 程计算样品中总黄酮的含量和回收率。 五、注意事项 1、实验证明，提取 1.5 小时，基本能提尽样品中黄酮
1 实训十四 可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量 一、实训目的 1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量的原理及方法。 2、熟悉可见分光光度计的使用方法。 二、实训原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有 机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有 4-羰基，3-或 5-羟基和邻二酚羟基的结构，可与铝盐、铅盐、 镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用分光光度法测定其含量。本实验利用 黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与 Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物(λ max＝ 5l0nm)，从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。 三、仪器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。 2、乙醇（A.R）、5％亚硝酸钠溶液、10％硝酸铝溶液、lmol/L 氢氧化钠溶液。 3、槲皮素（中国药品生物制品检定所）。 4、大山楂丸（市售品）。 四、实训操作 1、对照品溶液的配制 精密称取槲皮素对照品 20mg，置 100mL 容量瓶中，加 95％乙醇 50mL 使溶解，然后 加 50％乙醇稀释至刻度，即得 0.2mg／mL 的对照品溶液。 2、标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于 10mL 容量瓶中， 各加 50％乙醇溶液使成 5mL，精密加入 5％亚硝酸钠溶液 0.3mL，摇匀，放置 6 分钟， 加入 l0％硝酸铝溶液 0.3mL，摇匀，再放置 6 分钟，加入 1％氢氧化钠溶液 4mL，分别 用 50％乙醇稀释至刻度，摇匀，放置 15 分钟。以第一瓶作空白，用分光光度计在 510nm 处测其吸收度，作 A—C 标准曲线（或计算其回归方程）。 3、样品溶液的制备 精密称取 120℃干燥 2 小时的大山楂丸 0.65g，两份，分别置索氏提取器中，用 95% 乙醇回流提取 1.5 小时（至提取液无色），将提取液分别移至 50mL 容量瓶中，补加 95% 乙醇至刻度，摇匀即得。 4、含量测定 精密量取提取液 lmL，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方 程计算样品中总黄酮的含量和回收率。 五、注意事项 1、实验证明，提取 1.5 小时，基本能提尽样品中黄酮
2 2、实验证明，样品显色后，在 30 分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过 30 分 钟，含量有所改变。 六、思考题 1、比色法操作的注意事项是什么? 2、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同?
2 2、实验证明，样品显色后，在 30 分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过 30 分 钟，含量有所改变。 六、思考题 1、比色法操作的注意事项是什么? 2、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同?