目录 目录… .1 一、综合性实验 实验一阿斯匹林片体外溶出速度的测定 2 实验二阿斯匹林的体内血药浓度测定 ..4 实验三尿药法测定核黄素的生物利用度 .6 二、设计性试验 实验四水杨酸不同基质经皮渗透动力学试验… 附录：一、ZRS-8G型智能溶出实验仪 .15
1 目 录 目 录...........................................................................................................................1 一、综合性实验 实验一 阿斯匹林片体外溶出速度的测定.......................................................................2 实验二 阿斯匹林的体内血药浓度测定..........................................................................4 实验三 尿药法测定核黄素的生物利用度.......................................................................6 二、设计性试验 实验四 水杨酸不同基质经皮渗透动力学试验.......................................................... 11 附录：一、ZRS-8G 型智能溶出实验仪 ......................................................................... 15
实验一阿斯匹林片体外溶出速度的测定 一、目的要求： 通过阿斯匹林片体外溶出速度的测定，了解制剂生物制度的体外测定方法。 二、实验指导： 片剂服用后，在消化道中需要经过崩解和淀解两个过程，然后才为机体所吸收，崩 解后的粒子还不能直接被机体吸收。故崩解时限的检查只能控制整个释放过程的最初阶 段。特别在加入挡板的情况下测得的崩解度，不太符合实际的生理现象。故对难溶性药物 只用崩解度作为片剂吸收性能的指标就不能完全反映制剂的内在质量。为了更有效地控制 固体制剂的内在质量，除了测定体内血液或药浓度（最能真实反映吸收情况外，目前一些 国家的药典收载了一种与体内结果相关的体外测定方法一溶出速度测定)。 片剂溶出速度测定是指药片在适当的介质中崩解后，主药的溶出速度和程度，近代 生物药剂学研究指出，一般溶解度小于0.1一1mg100mL的药物，其体内吸收受溶出速 度的控制。故目前都用溶出速度来控制难溶性药物固体制剂的质量。本实验测定阿斯匹林 片的溶出速度。乙酰水杨酸微溶于水(25℃时溶解度为0.33g100mL)。 测定溶出速度的仪器种类较多，本实验采用转蓝法。（参看美国药典19版，20版和 NE14版)。 三、实验内容： 1、测定比较值E: 取样品20片，精密称定，计算平均片重W将片研细，再精密称取相当于W的量， 置于1000mL定量瓶中，加入人工胃液(1：100HCL)适量，37℃水溶上使全溶，冷至室 温加人工胃液至刻度，摇匀。过滤，取滤液5mL至50mL容量瓶中，加蒸馏水25mL用 0.1moL/LNaOH调PH9-10,沸水浴中煮沸5'，取出放冷，用0.1 moL/LNaOH调PH3-5,加硫酸 铁铵指示剂5滴，蒸馏水稀释至刻度，于540m处测定吸收值(E) 2、样品测定： 最取1000mL人工胃液为释放介质，调节恒温水浴温度为37℃±0.5℃，转兰转速 100min。取样品一片称量后放入转兰中，从溶媒接触药片开始计时，定时取样测定含量
2 实验一 阿斯匹林片体外溶出速度的测定 一、目的要求： 通过阿斯匹林片体外溶出速度的测定，了解制剂生物制度的体外测定方法。 二、实验指导： 片剂服用后，在消化道中需要经过崩解和淀解两个过程，然后才为机体所吸收，崩 解后的粒子还不能直接被机体吸收。故崩解时限的检查只能控制整个释放过程的最初阶 段。特别在加入挡板的情况下测得的崩解度，不太符合实际的生理现象。故对难溶性药物 只用崩解度作为片剂吸收性能的指标就不能完全反映制剂的内在质量。为了更有效地控制 固体制剂的内在质量，除了测定体内血液或药浓度（最能真实反映吸收情况外，目前一些 国家的药典收载了一种与体内结果相关的体外测定方法—溶出速度测定）。 片剂溶出速度测定是指药片在适当的介质中崩解后，主药的溶出速度和程度，近代 生物药剂学研究指出，一般溶解度小于 0.1—1mg/100 mＬ 的药物，其体内吸收受溶出速 度的控制。故目前都用溶出速度来控制难溶性药物固体制剂的质量。本实验测定阿斯匹林 片的溶出速度。乙酰水杨酸微溶于水（25℃时溶解度为 0.33g/100mL ）。 测定溶出速度的仪器种类较多，本实验采用转蓝法。（参看美国药典 19 版，20 版和 NF14 版）。 三、实验内容： 1、测定比较值 E： 取样品 20 片，精密称定，计算平均片重 W 将片研细，再精密称取相当于 W 的量， 置于 1000mL 定量瓶中，加入人工胃液（1：100HCL）适量，37℃水溶上使全溶，冷至室 温加人工胃液至刻度，摇匀。过滤，取滤液 5mL 至 50mL 容量瓶中，加蒸馏水 25mL 用 0.1moL/LNaOH 调 PH9-10,沸水浴中煮沸 5’,取出放冷,用 0.1 moL/LNaOH 调 PH3-5,加硫酸 铁铵指示剂 5 滴,蒸馏水稀释至刻度,于 540nm 处测定吸收值(E). 2、样品测定: 最取 1000mL 人工胃液为释放介质,调节恒温水浴温度为 37℃±0.5℃，转兰转速 100r/min。取样品一片称量后放入转兰中，从溶媒接触药片开始计时，定时取样测定含量
每次吸取10mL介质，同时补入己预热至37℃的介质100mL,将样品过滤吸取5mL 置50mL容量瓶中…（方法同上），测得样品吸收值为(Ei)。 3、数据处理： a计算累积溶出百分率 取样时间（分） 5'10'15'20'30'40'50'60 取样量(ml) 5 555555 Ei W'XE=E' Ei×100%=% E' 100%一溶出% W平均片重 E平均片重的吸光度 W'样品片重E'样品经换算的吸光度 100%-溶出%=残留待溶量E′样品在各时间吸光度 b.作累积溶出百分率-时间曲线 c.作N残留待容量时间曲线 求溶出速率常数 InC1InC2 Kf-- 一（斜率） ta-t a用威布尔分布概率纸，求出T0.T:及m。 四、讨论： 为什么需要做溶出速率试验？参数的物理意义？
3 每次吸取 10mL 介质，同时补入已预热至 37℃的介质 100mL，将样品过滤吸取 5mL 置 50mL 容量瓶中……（方法同上），测得样品吸收值为（Ei）。 3、数据处理： a.计算累积溶出百分率 取样时间（分） 取样量（ml） Ei W′×E=E′ W Ei×100%=% E′ 100%一溶出% 5′ 10′ 15′ 20′30′40′ 50′60′ 5 5 5 5 5 5 5 5 W 平均片重 E 平均片重的吸光度 W′样品片重 E′样品经换算的吸光度 100%-溶出%=残留待溶量 E′样品在各时间吸光度 b.作累积溶出百分率-时间曲线 c.作 IN 残留待容量-时间曲线 求溶出速率常数 InC1-InC2 Kf=—————(斜率) t2-t1 α用威布尔分布概率纸，求出 T50.Td 及 m。 四、讨论： 为什么需要做溶出速率试验？参数的物理意义？
实验二阿斯匹林的体内血药浓度测定 一、目的要求： 1、熟悉药动学实验中最重要的实验方法一一血药法的技术及应用。 2、考察阿斯匹林片的体内外相关性。 二、实验内容： 1、标准曲线制备： 配制500μgmL水杨酸标准液，分别取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mL分别加蒸 馏水至1mL,各加血清1mL和混合试剂4mL,混合均匀离心10分钟，以蒸馏水加血清混和 试剂做空白，取上溶液于540nm处测定吸收度，绘制标准曲线。 (混合试剂：取氯化高汞20g,加蒸馏水425mL,加热溶解后加入1mol/LHCL60mL 及硝酸铁20g,溶解后加蒸馏水至500mL即得)。 2、血样收集： 取体重2.5-3.0kg健康家兔，停食过夜，取空白血4mL后，以开口器撬开兔口，用长 摄子将完整药片送到咽喉部，用水冲服，于不同时间耳缘静脉取血4mL测定。 3、血样测定： 将血样置37℃水浴约2小时，离心10'(3000转/分)，取1.0mL血清，加入5ml 混合试剂用玻棒搅匀，离心10'，取上溶液于540m处，测定光密度，以空白血清和混 合试剂做空白，据标准曲线计算血清中药物浓度。 三、实验记录及结果处理： 1、原始记录： 试管号 23456789 取样时间 10°20°30°1h2h3h4h6h8h E C (ug/mL) 2、绘制血浓一一时间曲线，求出峰值、峰时及峰面积。 3、考察体内外相关性 以峰值、峰时和峰面积分别与阿斯匹林片的体外溶出百分率作相关性检验，确定
4 实验二 阿斯匹林的体内血药浓度测定 一、目的要求： 1、熟悉药动学实验中最重要的实验方法——血药法的技术及应用。 2、考察阿斯匹林片的体内外相关性。 二、实验内容： 1、标准曲线制备： 配制 500μg/mL 水杨酸标准液，分别取 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 和 1.0mL 分别加蒸 馏水至 1mL，各加血清 1mL 和混合试剂 4mL,混合均匀离心 10 分钟,以蒸馏水加血清混和 试剂做空白，取上溶液于 540nm 处测定吸收度，绘制标准曲线。 (混合试剂：取氯化高汞 20g，加蒸馏水 425mL，加热溶解后加入 1mol/LHCL60mL 及硝酸铁 20g，溶解后加蒸馏水至 500mL 即得)。 2、血样收集： 取体重 2.5-3.0kg 健康家兔，停食过夜，取空白血 4mL 后，以开口器撬开兔口，用长 摄子将完整药片送到咽喉部，用水冲服，于不同时间耳缘静脉取血 4mL 测定。 3、血样测定： 将血样置 37℃水浴约 2 小时，离心 10′（3000 转/分），取 1.0mL 血清，加入 5mL 混合试剂用玻棒搅匀，离心 10′，取上溶液于 540nm 处，测定光密度，以空白血清和混 合试剂做空白，据标准曲线计算血清中药物浓度。 三、实验记录及结果处理： 1、原始记录： 试管号 取样时间 E C（ug/mL） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10’ 20’ 30’ 1h 2h 3h 4h 6h 8h 2、绘制血浓——时间曲线，求出峰值、峰时及峰面积。 3、考察体内外相关性 以峰值、峰时和峰面积分别与阿斯匹林片的体外溶出百分率作相关性检验，确定
体内外参数的相关性，以体外溶出情况说明体内血浓情况。（最少取4片应4只家兔数据 计算)
5 体内外参数的相关性，以体外溶出情况说明体内血浓情况。（最少取 4 片应 4 只家兔数据 计算）
实验三尿药法测定核黄素的生物利用度 一、实验目的 1.熟悉尿药法实验的取样方法及注意事项。 2.掌握尿药法计算消除速度常数及生物利用度的方法。 二、实验原理 药物的体内过程是由吸收、分布、代谢、排泄等过程组成的，大多数药物均有部分的 原形经尿排除，常可用血药法和尿药法来估测药物在体内的速度过程变化规律及生物利用 度。 采用血药法测定药物在体内的速度过程变化规律及生物利用度时，由于多次采血，不 易接受，对于药物大部分以原形从尿中排除的情况下，尿药浓度高于血药浓度，测定方法 易建立，取样方便，本实验采用尿药法测定核黄素的生物利用度。 单室模型单剂量口服给药的尿排泄速率法基本公式为 =k,X=xo0-。 k。一北 ka>k,t较大时，cKat一0。以曲线后项dxu/dt的对数对t回归可得一条直线。 h=hY-对 t k。一k 由公式可见，若以In dxu/d t对t作图，可得到一条二项指数曲线，从其后段直线的斜 率可求出一级消除速度常数k。 由于尿中原形药物排泄速度的瞬时变化率是不可能用实验方法求算的，通过实验可求出 平均排泄速度，设在一时间△t内药物的排泄量为△Xu,则平均排泄速度记为△XW△t, 这样上式可改写如下 血签=h整- k。-k 集尿经历的时间通常只需半衰期的3~4倍即可。 由于实验中采用平均排泄速度代替瞬时排泄速度，求得的消除速度常数K会出现一些 误差。但若以恒定的时间间隔集尿，其时间间隔不大于一个药物的半衰期，则仅发生2% 以内的偏差。 6
6 实验三 尿药法测定核黄素的生物利用度 一、实验目的 1.熟悉尿药法实验的取样方法及注意事项。 2.掌握尿药法计算消除速度常数及生物利用度的方法。 二、实验原理 药物的体内过程是由吸收、分布、代谢、排泄等过程组成的，大多数药物均有部分的 原形经尿排除，常可用血药法和尿药法来估测药物在体内的速度过程变化规律及生物利用 度。 采用血药法测定药物在体内的速度过程变化规律及生物利用度时，由于多次采血，不 易接受，对于药物大部分以原形从尿中排除的情况下，尿药浓度高于血药浓度，测定方法 易建立，取样方便，本实验采用尿药法测定核黄素的生物利用度。 单室模型单剂量口服给药的尿排泄速率法基本公式为 ka>>k, t 较大时，e-Kat → 0。以曲线后项 dxu/d t 的对数对 t 回归可得一条直线。 由公式可见，若以 ln dxu/d t 对 t 作图，可得到一条二项指数曲线，从其后段直线的斜 率可求出一级消除速度常数 k。 由于尿中原形药物排泄速度的瞬时变化率是不可能用实验方法求算的。通过实验可求出 平均排泄速度，设在一时间Δt 内药物的排泄量为ΔXu，则平均排泄速度记为ΔXu/Δt， 这样上式可改写如下： 集尿经历的时间通常只需半衰期的 3~4 倍即可。 由于实验中采用平均排泄速度代替瞬时排泄速度，求得的消除速度常数 K 会出现一些 误差。但若以恒定的时间间隔集尿，其时间间隔不大于一个药物的半衰期，则仅发生 2% 以内的偏差
生物利用度是生物药剂学的一个重要参数，它反映药物在体内吸收的程度与吸收速率。 可分为相对生物利用度与绝对利用度。当药物的口服制剂与静脉注射剂相比，则可得到绝 对生物利用度。 测定生物利用度常用方法除用血药法外还可用尿药法，尿药法即从累积尿药量来计算 生物利用度。 生物利用度是指服药后药物吸收进入大循环的速度和程度，以静脉注射为参考标准得 到是绝对生物利用度用其他制剂为参考标准得到的是相对生物利用度。 核黄素的异咯嗪环上具有活波的双键，能接受和放出氢原子，在连二硫酸钠（保险粉） 的作用下，能还原为无色的双氢核黄素，利用这一性质，可由加入保险粉的前后测得吸收 度的差值，计算尿中核黄素的含量(444nm)。 CH(CHOH);CH.OH CH:(CHOH)CH2OH 气中 氧化型（费色） 还原型（无色） 三、仪器与材料 1.仪器 721分光光度计 2.材料 核黄素及片剂、保险粉、冰醋酸 四、实验内容 (一)尿样收集 1.服药前一天收集24小时尿液。 2.早餐后立即吞服核黄素片(5mg片)3片，记录服药时间。服药前排空小便。 3.服药后，在第2、4、6、8、10、12、14、16小时取尿样，用量筒量取并记录尿样体积 留20mL 倒入盛有0.2mL冰醋酸的刻度试管内，摇匀，于阴凉处保存
7 生物利用度是生物药剂学的一个重要参数，它反映药物在体内吸收的程度与吸收速率。 可分为相对生物利用度与绝对利用度。当药物的口服制剂与静脉注射剂相比，则可得到绝 对生物利用度。 测定生物利用度常用方法除用血药法外还可用尿药法，尿药法即从累积尿药量来计算 生物利用度。 生物利用度是指服药后药物吸收进入大循环的速度和程度，以静脉注射为参考标准得 到是绝对生物利用度用其他制剂为参考标准得到的是相对生物利用度。 核黄素的异咯嗪环上具有活波的双键，能接受和放出氢原子，在连二硫酸钠（保险粉） 的作用下，能还原为无色的双氢核黄素，利用这一性质，可由加入保险粉的前后测得吸收 度的差值，计算尿中核黄素的含量（444 nm）。 三、仪器与材料 1.仪器 721 分光光度计 2.材料 核黄素及片剂、保险粉、冰醋酸 四、实验内容 （一）尿样收集 1.服药前一天收集 24 小时尿液。 2.早餐后立即吞服核黄素片（5 mg/片）3 片，记录服药时间。服药前排空小便。 3.服药后，在第 2、4、6、8、10、12、14、16 小时取尿样，用量筒量取并记录尿样体积， 留 20 mL 倒入盛有 0.2 mL 冰醋酸的刻度试管内，摇匀，于阴凉处保存
(二)标准曲线制备 精密称取核黄素10mg于100mL容量瓶中，加0.02molL的醋酸液稀释至刻度，摇 匀。精密吸取标准溶液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0mL，分别置于10mL的容量瓶中， 用酸化蒸馏水（每100mL蒸馏水中含1mL冰醋酸）稀释至刻度，摇匀，以酸化蒸馏水作 为空白，在444m测定吸收度。然后在每管中加保险粉约3mg,摇匀，在一分钟内测定 吸收度，两次吸收度差值即为核黄素吸收度，以A对C进行回归，求出标准曲线。 (三)尿液中核黄素含量的测定 取尿样20mL,测定照标准曲线项下方法，“以酸化蒸馏水作为空白”起，依法测定 根据标准曲线计算尿药浓度。 五、试验结果与讨论 1.原始记录 受试者：服药时间： 药物：批号：剂量 服药前一天空白尿液总体积： 表1.空白尿液测定数据 Al A2 △A Cu(μgmL) 样品号 24小时空白尿液中排泄核黄素的总量： 平均2小时排泄核黄素的量为： 表2.服药后尿样的原始记录 试管号 集尿时间 集尿间隔(h)尿量(mL) 1 2 3
8 （二）标准曲线制备 精密称取核黄素 10 mg 于 100 mL 容量瓶中，加 0.02 mol/L 的醋酸液稀释至刻度，摇 匀。精密吸取标准溶液 0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mL ，分别置于 10 mL 的容量瓶中， 用酸化蒸馏水（每 100 mL 蒸馏水中含 1 mL 冰醋酸）稀释至刻度，摇匀，以酸化蒸馏水作 为空白，在 444 nm 测定吸收度。然后在每管中加保险粉约 3 mg，摇匀，在一分钟内测定 吸收度，两次吸收度差值即为核黄素吸收度，以 A 对 C 进行回归，求出标准曲线。 （三）尿液中核黄素含量的测定 取尿样 20 mL，测定照标准曲线项下方法，“以酸化蒸馏水作为空白”起，依法测定， 根据标准曲线计算尿药浓度。 五、试验结果与讨论 1.原始记录 受试者： 服药时间： 药物： 批号： 剂量： 服药前一天空白尿液总体积： 表 1.空白尿液测定数据 样品号 A1 A2 ΔA Cu(μg/mL) 24 小时空白尿液中排泄核黄素的总量： 平均 2 小时排泄核黄素的量为： 表 2. 服药后尿样的原始记录 试管号 集尿时间 集尿间隔（h） 尿量(mL) 1 2 3 4 5
6 7 8 表3.尿药测定结果 试管号 Al AA Cu Xu △Xu (μgml) μg) (μg) 1 2 3 4 6 7 8 表4.尿药法数据分析 t(h) △t(h) t中(h) Xu(mg)△XW△t In A Xu/At 2.绘制尿药排泄速率-时间半对数图。 3.以曲线后段直线部分计算斜率，从而计算消除速率常数k及生物利用度。 4.计算Xu∞及尿排泄百分率。 5计算核黄素片的绝对生物利用度.据文献报道，核黄素静脉注射后尿中总排泄量为 给药剂量的97%。 9
9 6 7 8 表 3.尿药测定结果 试管号 A1 A2 ΔA Cu (μg/ml) Xu (μg) ΔXu (μg) 1 2 3 4 5 6 7 8 表 4.尿药法数据分析 t (h) Δt (h) t 中 (h) Xu (mg) ΔXu/Δt lnΔXu/Δt 2.绘制尿药排泄速率-时间半对数图。 3.以曲线后段直线部分计算斜率,从而计算消除速率常数 k 及生物利用度 t1/2。 4.计算 Xu∞及尿排泄百分率。 5.计算核黄素片的绝对生物利用度.据文献报道,核黄素静脉注射后尿中总排泄量为 给药剂量的 97%
六.思考题 1.以尿药速率法计算动力学参数和生物利用度与血药浓度法相比，有何优缺点？ 2.尿药速率法计算生物利用度误差的主要来源有哪些？ 七.实验注意事项 1.每次收集尿液后饮200ml水以维持一定尿量。 2服药前一天至实验结束应控制食谱，不吃富含核黄素的食物，如蛋类、牛奶、奶糖等， 不得服用含B族维生素的药品！ 0
10 六.思考题 1.以尿药速率法计算动力学参数和生物利用度与血药浓度法相比,有何优缺点？ 2.尿药速率法计算生物利用度误差的主要来源有哪些？ 七.实验注意事项 1.每次收集尿液后饮 200 ml 水以维持一定尿量。 2.服药前一天至实验结束应控制食谱，不吃富含核黄素的食物，如蛋类、牛奶、奶糖等， 不得服用含 B 族维生素的药品
