第1-2章 复习题 上世纪40-70年代初分子生物学领域理论上和技 术上的哪些重大突破对于基因工程的诞生起到 了决定性的作用？ 2.在你的脑海中，基因工程的基本流程是怎样的 3.基因工程的概念？
第1-2 章 复习题 1. 上世纪40-70年代初分子生物学领域理论上和技 术上的哪些重大突破对于基因工程的诞生起到 了决定性的作用？ 2. 在你的脑海中，基因工程的基本流程是怎样的 ？ 3. 基因工程的概念?
如何理解gene及其产物的共线性和 非共线性？ 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。 当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时，则表 明它们是共线性的。 在原核生物中，基因及其产物是共线性的。 70年代以来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断 基因在真核生物中普遍存在，也就是后来所说的基因间存在着内含子。 内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的DNA片断，但可被转 录，当两侧序列的转录RNA被剪接在一起时，就将内含子转录的 NA从整个转录物中除去。外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断 的基因片段，一个基因可有多个外显子。内含子并不是一成不变的， 具有相对性，对一个DNA片断来说，在某个基因中是内含子，但在另 一个基因中却可以作为外显子
如何理解 gene 及其产物的共线性和 非共线性？ 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。 当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时，则表 明它们是共线性的。 在原核生物中，基因及其产物是共线性的。 70 年代以来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断 基因在真核生物中普遍存在，也就是后来所说的基因间存在着内含子。 内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的DNA片断，但可被转 录，当两侧序列的转录RNA被剪接在一起时，就将内含子转录的 RNA从整个转录物中除去。外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断 的基因片段，一个基因可有多个外显子。内含子并不是一成不变的， 具有相对性，对一个DNA片断来说，在某个基因中是内含子，但在另 一个基因中却可以作为外显子
假如从一个原核生物中cloning某基 因（1-2kb),请谈谈它的基本步骤？ ①对原核生物染色体DNA进行不完全酶切，纯化所得到的DNA片断， 并与载体连接，转化大肠杆菌； ②得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序列设计探针，杂交，筛选 转化子； ③所得到的转化子中含有目标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标 基因逼近，最后可得到目标基因
假如从一个原核生物中 cloning 某基 因（1-2kb），请谈谈它的基本步骤？ ①对原核生物染色体 DNA 进行不完全酶切，纯化所得到的 DNA 片断， 并与载体连接，转化大肠杆菌； ②得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序列设计探针，杂交，筛选 转化子； ③所得到的转化子中含有目标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标 基因逼近，最后可得到目标基因
什么叫基因工程(Gene Engineering).为 什么说基因工程是生物学和遗传学发展 的必然产物？ 基因工程(Gene Engineering)又称基因操作(Gene Manipulation)、 重组DNA。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微 生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DA分子)，按预先 设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生 物原先的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构 和功能。 1、基因概念的提出和基因与DNA关系的建立为基因重组打下了物质基 础。 2、DNA结构的阐明和DNA在生命活动中的作用的认识，为基因操作 打下了理论基础。 3、基因操作技术的发展则直接导致基因工程的诞生和发展
什么叫基因工程（Gene Engineering）为 什么说基因工程是生物学和遗传学发展 的必然产物？ 基因工程（Gene Engineering ）又称基因操作（Gene Manipulation）、 重组 DNA 。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微 生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因（DNA 分子），按预先 设计的蓝图，在体外构建杂种 DNA 分子，然后导入活细胞，以改变生 物原先的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构 和功能。 1、基因概念的提出和基因与DNA关系的建立为基因重组打下了物质基 础。 2、DNA结构的阐明和DNA在生命活动中的作用的认识，为基因操作 打下了理论基础。 3、基因操作技术的发展则直接导致基因工程的诞生和发展
工具酶 功 能 限制性核酸内切酶 识别特异序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA中相邻的5'磷酸基和3'羟基末端之间形成磷酸二 酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶I ①合成双链cDNA分子或片段连接 ②缺口平移制作高比活探针 ③DNA序列分析 ④填补3末端 Klenow)片段 具有完整DNA聚合酶的5'→3'聚合、3'-→5'外切活性，而无 5'→3'外切活性。常用于cDNA第二链合成，双链DNA3'末 端标记等 反转录酶 ①合成cDNA ②替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸5'羟基末端磷酸化 末端转移酶 在3'羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基
工 具 酶 功 能 限制性核酸内切酶 识别特异序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二 酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶Ⅰ ①合成双链cDNA分子或片段连接 ②缺口平移制作高比活探针 ③DNA序列分析 ④填补3´末端 Klenow片段 具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而无 53外切活性。常用于cDNA第二链合成，双链DNA 3末 端标记等 反转录酶 ①合成cDNA ②替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化 末端转移酶 在3´羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基
Matched ends 匹配末端。 识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后 产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即 粘性末端(cohensive end)
Matched ends 匹配末端。 识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后 ，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即 粘性末端（cohensive end）
限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease )的命名是按属名和种名相结合的原则，通 常第一个大写字母取自()，第二、三个字 母取自()，第四个字母则用()表示。 属名的第一个字母；种名的前两个字母；菌株名
限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease ）的命名是按属名和种名相结合的原则，通 常第一个大写字母取自（），第二、三个字 母取自（），第四个字母则用（）表示。 属名的第一个字母；种名的前两个字母；菌株名
PPi(from ATP) a NH时+R-0-P-0Rboe Adenine Riboee Adenine or 0 NMN (from NAD*) 0 DNA ligase AMP from ATP (R PP Enzyme-AMP or NAD*(R NMN) Ribose Adenine It b Tt LLOH 0 0山山000山 Enzyme-AMP 001 0 0 Nick in DNA 0 0 Ribose Adenine 0 DNA ligase TTTTTT O+0-P-0-Ribose Adenine 山o-0山 0 0 AMP Sealed DNA 0 O-Ribose Adenine Figure 24-15 The mechanism of the DNA ligase
限制性内切酶一般保存在（)浓度的甘 油溶液中。 ■A.10% ■B.20% ■C.50% ■D.60%
n A. 10% n B.20% n C.50% n D.60% 限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘 油溶液中。 C
迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于() A、既可以作用于双链DNA,又可以作用于 单链DNA B.只能作用于单链DNA C.只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA
迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（） n A、既可以作用于双链 DNA ，又可以作用于 单链 DNA n B.只能作用于单链 DNA n C.只能作用于双链 DNA n D.只能作用于 RNA A