*50%感染量或50%组织细胞感染量(ID50或 TCID50)测定法 用半数感染量可估计病毒感染性的强弱及含 量,但不能准确测定感染性病毒颗粒的数量。方 法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的 最小量。一般是将病毒悬液作10陪的系列稀释, 分别接种细胞,经一定时间后观察CPE、血细胞吸 附等指标,以最高稀释度能感染50%细胞的量为终 点。最后用统计方法计算出50%感染量(ID0)或50% 组织细胞感染量(TCID50或TCD5O)
* 50%感染量或50%组织细胞感染量(ID50或 TCID50)测定法 用半数感染量可估计病毒感染性的强弱及含 量,但不能准确测定感染性病毒颗粒的数量。方 法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的 最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释, 分别接种细胞,经一定时间后观察CPE、血细胞吸 附等指标,以最高稀释度能感染50%细胞的量为终 点。最后用统计方法计算出50%感染量(ID50)或50% 组织细胞感染量 (TCID50或TCD50)
二 病毒的增殖 (一)病毒的增殖方式 病毒的增殖方式是复制。因病毒不具有能独 立进行代谢的酶系统,因此在细胞外是处于无活 性或静止状态。只有进入活的易感宿主细胞,由 宿主细胞供给合成病毒核酸与蛋白质的原料,如 低分子量前体成分、能量、必要的酶和细胞器等 ,病毒才能增殖
二 病毒的增殖 (一)病毒的增殖方式 病毒的增殖方式是复制。因病毒不具有能独 立进行代谢的酶系统,因此在细胞外是处于无活 性或静止状态。只有进入活的易感宿主细胞,由 宿主细胞供给合成病毒核酸与蛋白质的原料,如 低分子量前体成分、能量、必要的酶和细胞器等 ,病毒才能增殖
(二) 病毒复制周期 1吸附与穿入 病毒的增殖首先吸附在 宿主细胞后方可穿入 (1)吸附有两种:①病毒与细胞的静电结 合病毒和细胞在生理H条件下均带阴电荷, 因而可互相排斥,除随机的碰撞外,一般较少 相互吸引。如有阳离子存在,则可促进结合。 但这种结合是非特异的和可逆的;②宿主细胞 表面受体与病毒表面结构成分的特异结合,这 是真正的结合
(二) 病毒复制周期 1 吸附与穿入 病毒的增殖首先吸附在 宿主细胞后方可穿入 (1)吸附有两种:①病毒与细胞的静电结 合 病毒和细胞在生理pH条件下均带阴电荷, 因而可互相排斥,除随机的碰撞外,一般较少 相互吸引。如有阳离子存在,则可促进结合。 但这种结合是非特异的和可逆的;②宿主细胞 表面受体与病毒表面结构成分的特异结合,这 是真正的结合
(2)病毒的穿入 病毒可通过数种方式穿入细胞膜,即吞 饮、融合和转位:①吞饮即病毒与细胞表面 结合后内凹入细胞,细胞膜内陷形式类以吞噬 泡,病毒原封不动地进入细胞浆内。无包膜的 病毒多以吞饮形式进入易感动物细胞内;②融 合是指病毒包膜与细胞膜融合,而将病毒的 核衣壳释放至细胞浆内 病毒体级附细胞的过程可在几分钟到几十分钟 内完成
(2)病毒的穿入 病毒可通过数种方式穿入细胞膜 ,即吞 饮、融合和转位:①吞饮 即病毒与细胞表面 结合后内凹入细胞,细胞膜内陷形式类似吞噬 泡,病毒原封不动地进入细胞浆内。无包膜的 病毒多以吞饮形式进入易感动物细胞内;②融 合 是指病毒包膜与细胞膜融合,而将病毒的 核衣壳释放至细胞浆内 病毒体吸附细胞的过程可在几分钟到几十分钟 内完成
2脱壳 病毒脱去蛋白衣壳后,核酸才能发挥作用。 多数病毒穿入细胞之后,随即由细胞溶酶体酶 的作用,使衣壳蛋白质水解,露出病毒核酸。但 痘病毒特殊,分为两步脱壳。先由溶酶体酶作 用脱去外壳蛋白质,病毒核心(含有内层衣壳和 核酸)释放于细胞浆中,然后再经病毒编码产生 一种脱壳酶,脱去内层衣壳方能释放出核酸
2 脱壳 病毒脱去蛋白衣壳后,核酸才能发挥作用。 多数病毒穿入细胞之后,随即由细胞溶酶体酶 的作用,使衣壳蛋白质水解,露出病毒核酸。但 痘病毒特殊,分为两步脱壳。先由溶酶体酶作 用脱去外壳蛋白质,病毒核心(含有内层衣壳和 核酸)释放于细胞浆中,然后再经病毒编码产生 一种脱壳酶,脱去内层衣壳方能释放出核酸
3生物合成 病毒脱壳之后,接着就进入病毒复制的生物合成阶段, 即病毒利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量病毒核 酸和结构蛋白。 生物合成阶段用血清学方法和电镜检 查在细胞内找不到病毒颗粒,故称其为隐蔽期。各病毒 的隐蔽期长短不一,如脊髓灰质炎病毒是3-4h,正粘病 毒7-8h,副粘病毒11-12h,腺病毒16-17h。 隐蔽期实则是在病毒基因控制下进行病毒核酸和蛋 白质合成的阶段。病毒核酸复制部位因核酸类型不同而 异。DNA病毒除痘病毒外,都在细胞核内复制;NA病毒 除正粘病毒和逆转录病毒在细胞核内复制外,其余都在 细胞浆内复制
3 生物合成 病毒脱壳之后,接着就进入病毒复制的生物合成阶段, 即病毒利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量病毒核 酸和结构蛋白。 查在细胞内找不到病毒颗粒,故称其为隐蔽期。各病毒 的隐蔽期长短不一,如脊髓灰质炎病毒是3-4h,正粘病 毒7-8h,副粘病毒11-12h,腺病毒16-17h。 隐蔽期实则是在病毒基因控制下进行病毒核酸和蛋 白质合成的阶段。病毒核酸复制部位因核酸类型不同而 异。DNA病毒除痘病毒外,都在细胞核内复制;RNA病毒 除正粘病毒和逆转录病毒在细胞核内复制外,其余都在 细胞浆内复制
由于病毒核酸类型不同,病毒的生物 合成过程基本归为6类,DNA病毒包括双链 DNA病毒和单链DNA病毒;RNA病毒包括单正 链RNA病毒、单负链RNA病毒、双链RNA病 毒及逆转录病毒
由于病毒核酸类型不同,病毒的生物 合成过程基本归为6类,DNA病毒包括双链 DNA病毒和单链DNA病毒;RNA病毒包括单正 链RNA 病毒、单负链RNA 病毒、双链RNA病 毒及逆转录病毒
双链DNA病毒 首先利用宿主核内的依赖DNA的RNA多聚酶, 转录早期RNA,再于胞浆内的核糖体转译成早 期蛋白。早期蛋白主要包括依赖DNA的DNA多聚 酶及脱氧胸腺嘧啶激酶,以利用其合成子代DNA 分子。再以子代DNA分子为模板转录多聚成大量 晚期RNA,继而在胞浆核糖体上转译出病毒结 构蛋白,主要为衣壳蛋白
(1) 双链DNA病毒 首先利用宿主核内的依赖DNA的RNA多聚酶, 转录早期mRNA,再于胞浆内的核糖体转译成早 期蛋白。早期蛋白主要包括依赖DNA的DNA多聚 酶及脱氧胸腺嘧啶激酶,以利用其合成子代DNA 分子。再以子代DNA分子为模板转录多聚成大量 晚期mRNA,继而在胞浆核糖体上转译出病毒结 构蛋白,主要为衣壳蛋白
双链DNA复制为半保留复制形式。即亲代 DNA的双链在解链酶作用下,解开成为正、负两 个DNA单链。再分别以这两条单链为模板,在 DNA酶的作用下,按照核苷酸碱基配对的规律, 分别合成互补的DNA(负链或者正链),为新合 成的双链DNA,即为子代DNA。通过此复制过程 生成大量与亲代结构完全相同的子代DNA
双链DNA复制为半保留复制形式。即亲代 DNA的双链在解链酶作用下,解开成为正、负两 个DNA单链。再分别以这两条单链为模板,在 DNA酶的作用下,按照核苷酸碱基配对的规律, 分别合成互补的DNA (负链或者正链),为新合 成的双链DNA,即为子代DNA。通过此复制过程, 生成大量与亲代结构完全相同的子代DNA
(2)单链DNA病毒是以亲代DNA作模板,在 DNA多聚酶的作用下,产生互补链,并与亲代 DNA链形成土dsDNA,作为复制中间型,即DNA RI。然后再以半保留形式进行复制
(2)单链DNA病毒 是以亲代DNA作模板,在 DNA多聚酶的作用下,产生互补链,并与亲代 DNA链形成±dsDNA,作为复制中间型 ,即DNA RI。然后再以半保留形式进行复制