石河子大学医学院 实验教学大纲汇编 使用教材：诊断学第七版 石河子大学医学院 二00八年十月
石河子大学医学院 实验教学大纲汇编 使用教材：诊断学第七版 石河子大学医学院 二 00 八年十月
石河子大学医学院一附院临床见习大纲 实验诊断 教研室 撰写人签名：段玮 见习名称 实验诊断学 英文名称 Laboratory diagnostics 见习总学时 14 见习项目总数 本大纲属 1、统编2、自编 见习指导书 1、统编2、自编 见习者类别 、本科2、专科3、研究生4、其他 见习占课程比例 30.4% 面向专业 临床及预防医学专业 见习项目名称 序号 见习项目名称 见习类型 学时 1 血液标本的采集、白细胞计数 仪器操作 2 2 血涂片制备与染色、白细胞分类计数 仪器操作 2 3 尿液检测及干化学法检查 仪器操作 2 4 血浆凝血酶原时间测定(PT) 仪器操作 2 活化部分凝血活酶时间测定(APTT 5 肝脏疾病的病历分析 仪器操作 2 6 肾脏疾病的病历分析 仪器操作 2 7 双缩脲法测定血浆总蛋白 仪器操作 萄萄糖氧化酶法测定血浆葡萄糖 学院意见 院领导签名： 年月日
2 石河子大学医学院一附院临床见习大纲 实验诊断 教研室 撰写人签名 : 段玮 见习名称 实验诊断学 英文名称 Laboratory diagnostics 见习总学时 14 见习项目总数 7 本大纲属 1、统编 2、自编 见习指导书 1、统编 2、自编 见习者类别 1、本科 2、专科 3、研究生 4、其他 见习占课程比例 30.4% 面向专业 临床及预防医学专业 见习项目名称 序号 见习项目名称 见习类型 学时 1 血液标本的采集、白细胞计数 仪器操作 2 2 血涂片制备与染色、白细胞分类计数 仪器操作 2 3 尿液检测及干化学法检查 仪器操作 2 4 血浆凝血酶原时间测定（PT） 活化部分凝血活酶时间测定（APTT） 仪器操作 2 5 肝脏疾病的病历分析 仪器操作 2 6 肾脏疾病的病历分析 仪器操作 2 7 双缩脲法测定血浆总蛋白 葡萄糖氧化酶法测定血浆葡萄糖 仪器操作 2 学院意见 院领导签名： 年 月 日
1、血液标本的采集、白细胞计数见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 掌握毛细血管采血法和静脉采血法，掌握血细胞计数板的应用方法。 见习内容： (一)毛细血管采血法 1. 采血部位按摩和消毒皮肤2.针刺3擦去第一滴血4.吸血5.释放血液 (二)静脉采血法1选择静脉2.消毒3.扎止血带4.穿刺抽血5.放血与混匀 (三)示教：多媒体白细胞计数规范操作： 1.试剂：白细胞稀释液， 红细胞稀释液。 2.标本：抗凝血。 操作：(1)稀释血液(2)准备计数板(3)充池(4)静置(5)显微镜计数 见习要点及注意事项： (一)毛细血管采血法 1.采血部位应皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。 2。婴幼儿可自拇指、脚指或足跟内、外侧缘采血。 3.多项目检查时，采标本的顺序是血小板计数（不擦第一滴血）、红细胞计数、 血红蛋白测定、白细胞测定与分类： (二)静脉采血法 1.采血部位一般选择肘前静脉，幼儿可采用颈外静脉。 2.严格按无菌技术操作，抽血时切忌回推。 3.止血带捆扎时间不应超过半分钟。 (三)白细胞计数原方法. 1.示教：演示多媒体白细胞计数规范操作；教师在显微细胞分析系统上操作讲 解，学生在微机屏幕上观察计数池白细胞，掌握其形态特点。 2.试剂：白细胞稀释液。 3.标本，取外周血。 4.操作：①加稀释液②加血③溶血④充池⑤计数⑥计算 5.辨认观察白细胞形态：报告方式：WBC:X.X×101。 WBC=四大方格内白细胞数÷4×10×20×10=N÷20×10L (四)示教注意： 计数板和盖玻片用后应依次用95%洒精、蒸馏水棉球擦拭，最后用清洁绸布揩 净。操作中勿用手指接触计数池表面。 2.病理情况下外周血出现大量有核RBC可使WBC计数结果偏高，应校正
3 1、 血液标本的采集、白细胞计数 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 掌握毛细血管采血法和静脉采血法，掌握血细胞计数板的应用方法。 见习内容： （一）毛细血管采血法 1．采血部位按摩和消毒皮肤 2.针刺 3.擦去第一滴血 4.吸血 5.释放血液 （二）静脉采血法 1.选择静脉 2.消毒 3.扎止血带 4.穿刺抽血 5.放血与混匀 （三）示教：多媒体白细胞计数规范操作； 1．试剂：白细胞稀释液，红细胞稀释液。 2．标本：抗凝血。 操作：（1）稀释血液（2）准备计数板（3）充池（4）静置（5）显微镜计数 见习要点及注意事项： （一）毛细血管采血法 1. 采血部位应皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。 2. 婴幼儿可自拇指、脚指或足跟内、外侧缘采血。 3. 多项目检查时，采标本的顺序是血小板计数（不擦第一滴血）、红细胞计数、 血红蛋白测定、白细胞测定与分类； （二）静脉采血法 1. 采血部位一般选择肘前静脉，幼儿可采用颈外静脉。 2. 严格按无菌技术操作，抽血时切忌回推。 3. 止血带捆扎时间不应超过半分钟。 （三）白细胞计数原方法. 1. 示教：演示多媒体白细胞计数规范操作；教师在显微细胞分析系统上操作讲 解，学生在微机屏幕上观察计数池白细胞，掌握其形态特点。 2. 试剂：白细胞稀释液。 3. 标本：取外周血。 4. 操作：①加稀释液②加血③溶血④充池⑤计数⑥计算 5. 辨认观察白细胞形态：报告方式：WBC：X.X×109 /。 WBC=四大方格内白细胞数÷4×10×20×106=N÷20×109 /L （四）示教注意： 1. 计数板和盖玻片用后应依次用 95%洒精、蒸馏水棉球擦拭，最后用清洁绸布揩 净。操作中勿用手指接触计数池表面。 2. 病理情况下外周血出现大量有核 RBC 可使 WBC 计数结果偏高，应校正
2、血涂片制备与染色、白细胞分类计数见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 1.掌握血涂片的制备和瑞特吉姆萨染色的方法 2.掌握显微镜法计数原理及方法， 见习内容： (一)染色的方法 1.试剂：瑞特吉姆萨染色液 2.操作：(1)制备血涂片①推片②干燥③标记 (2)染色①准备②加I液③加IⅡ液④染色效果评价 (3)冲洗 (4)干燥 (二)白细胞分类计数方法 1.辨认观察各种白细胞形态，用低倍镜检视全片，选择细胞分布均匀着色良好处 加香柏油，用油镜沿弓字形轨道向尾部检视，油镜镜下计数100个白细胞，计 算并报告各种白细胞所占百分比。 2.报告方式：WBC:XX×10/。L:XXX:M:X.XX;N:XXX:E:X.Xx;B:X.XX 见习要点及注意事项： 1.注意推片的角度和速度。 2.注意缓冲液的pH。 3.掌握合适的染色时间。 4.分类时避免主观选择视野，要按次序地连续进行.分类中如见幼红细胞，不计入 100个细胞内
4 2、血涂片制备与染色、白细胞分类计数 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 1. 掌握血涂片的制备和瑞特-吉姆萨染色的方法 2. 掌握显微镜法计数原理及方法. 见习内容： (一) 染色的方法 1. 试剂：瑞特-吉姆萨染色液 2. 操作：（1）制备血涂片①推片②干燥③标记 （2）染色①准备②加Ⅰ液③加Ⅱ液④染色效果评价 （3）冲洗 （4）干燥 (二) 白细胞分类计数方法. 1. 辨认观察各种白细胞形态，用低倍镜检视全片，选择细胞分布均匀着色良好处 加香柏油，用油镜沿弓字形轨道向尾部检视，油镜镜下计数 100 个白细胞，计 算并报告各种白细胞所占百分比。 2. 报告方式：WBC：X.X×109 /。L：X.XX; M:X.XX; N:X.XX; E:X.XX; B:X.XX 见习要点及注意事项： 1. 注意推片的角度和速度。 2. 注意缓冲液的 pH。 3. 掌握合适的染色时间。 4. 分类时避免主观选择视野,要按次序地连续进行.分类中如见幼红细胞,不计入 100 个细胞内
3、尿液检测及王化学法检查见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 4 现有每组人数 见习目的： 1.三种不同尿蛋白定性实验方法的敏感性及干扰因素。 2.尿糖定性实验 3.尿液的干化学试纸条检查 见习内容： 1.磺基水杨酸法：取不同程度的蛋白尿标本，加尿液（调PH为5左右），加磺 基水杨酸2滴并混匀，1分钟时与空白对照尿液比较并判断结果。 2。加热醋酸法：取尿液于试管的23处，煮沸观察结果；加5%冰醋酸2滴，再 煮沸观察结果。 3.干化学试带法：简介原理，仪器操作步骤，说明干扰因素。 4.学握葡萄糖定性的班氏法：葡萄糖或其它还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能 将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原为黄色的氧化亚铜，进而形成红色氧化亚铜沉 淀。 5.临床常用的十项指标检查包括：SG、pH、LEU、NIT、PRO、GLU、 KET、URO、BIL、ERY 见习要点及注意事项： 1.加热法应不断转动，防止尿液沸藏。 2.三种方法对白蛋白、球蛋白敏感度不同。 3.磺基水杨酸法碱性尿可出现假阳性。 4.假性糖尿：尿中有很多物质具有还原性，如VC、尿酸、葡萄糖醛酸等，可使 benedict定性试验出现假阳性
5 3、尿液检测及干化学法检查 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 4 现有每组人数 见习目的： 1. 三种不同尿蛋白定性实验方法的敏感性及干扰因素。 2. 尿糖定性实验 3. 尿液的干化学试纸条检查 见习内容： 1. 磺基水杨酸法：取不同程度的蛋白尿标本，加尿液（调 PH 为 5 左右），加磺 基水杨酸 2 滴并混匀，1 分钟时与空白对照尿液比较并判断结果。 2. 加热醋酸法：取尿液于试管的 2/3 处，煮沸观察结果；加 5%冰醋酸 2 滴，再 煮沸观察结果。 3. 干化学试带法：简介原理，仪器操作步骤，说明干扰因素。 4. 掌握葡萄糖定性的班氏法：葡萄糖或其它还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能 将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原为黄色的氧化亚铜，进而形成红色氧化亚铜沉 淀。 5. 临床常用的十项指标检查包括：SG、pH、LEU、NIT、PRO、GLU、 KET、URO、BIL、ERY 见习要点及注意事项： 1. 加热法应不断转动，防止尿液沸溅。 2. 三种方法对白蛋白、球蛋白敏感度不同。 3. 磺基水杨酸法碱性尿可出现假阳性。 4. 假性糖尿：尿中有很多物质具有还原性，如 VC、尿酸、葡萄糖醛酸等，可使 benedict 定性试验出现假阳性
4、凝血试验PT、APTT测定 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 4 现有每组人数 见习目的： 熟悉凝血酶原时间(PT、APTT)的测定方法及原理。 见习内容： 1.标本：静脉血 2.试剂：①109mmol/L枸橼酸钠溶液②25mmoL氯化钙凝血活酶制剂③正常人 混合冻干血浆 3.操作：①采血②分离血浆③溶解试剂④预温⑤测定⑥取待检血浆重复④-⑤的 操作步骤，测定待检血浆的PT、APTT秒数。 4.报告方式：PTxx秒，正常人血浆xx秒 PTR:x.X INR:x.x 见习要点及注意事项： 1.采血一针见血，抗凝剂与血液比例(1：9)应准确，取血后4小时内完成测定。 2.凝血活酶必须标有国际敏感指数(ISI),ISI越小(55%：抗凝剂ml=(100%-Hct)×血液ml0.00185 6.测定前应先测定正常人混合血浆，其APTT值在允许范围内方可测定样本
6 4、凝血试验 PT、APTT 测定 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 4 现有每组人数 见习目的： 熟悉凝血酶原时间（PT、APTT）的测定方法及原理。 见习内容： 1． 标本；静脉血 2． 试剂：①109mmol/L 枸橼酸钠溶液②25mmol/L 氯化钙凝血活酶制剂③正常人 混合冻干血浆 3． 操作：①采血②分离血浆③溶解试剂④预温⑤测定⑥取待检血浆重复④-⑤的 操作步骤，测定待检血浆的 PT、APTT 秒数。 4．报告方式：PT:x.x 秒，正常人血浆 x.x 秒 PTR：x.x INR：x.x 见习要点及注意事项： 1. 采血一针见血，抗凝剂与血液比例（1∶9）应准确，取血后 4 小时内完成测定。 2. 凝血活酶必须标有国际敏感指数（ISI）, ISI 越小(55%：抗凝剂 ml=(100%-Hct) ×血液 ml×0.00185 6. 测定前应先测定正常人混合血浆，其 APTT 值在允许范围内方可测定样本
5、肝脏疾病的病历分析见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 提供病例资料结合实验检测数据熟悉肝脏疾病的特点。 见习内容： 1.提供病例资料。根据以上病史摘要，请将诊断及诊断依据、鉴别诊 断、进一步检查与治疗原则写在纸上。时间：20分钟 2.组织学生分组进行讨论。 3.提问几名同学，让其阐述对本病例的分析。 4.课堂总结分析本次病例的相关知识点，解决问题 见习要点及注意事项： 1.掌握肝脏疾病的病毒标志物的特点及其结果的判断。 2.掌握肝脏疾病诊断的诊断步骤及实验室项目的选择原则。 3.ALT、AST在肝炎病人的表现特点？ 4.血浆蛋白检测的临床意义？
7 5、肝脏疾病的病历分析 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 提供病例资料结合实验检测数据熟悉肝脏疾病的特点。 见习内容： 1. 提供病例资料。根据以上病史摘要，请将诊断及诊断依据、鉴别诊 断、进一步检查与治疗原则写在纸上。 时间：20 分钟 2. 组织学生分组进行讨论。 3. 提问几名同学，让其阐述对本病例的分析。 4. 课堂总结分析本次病例的相关知识点，解决问题 见习要点及注意事项： 1. 掌握肝脏疾病的病毒标志物的特点及其结果的判断。 2. 掌握肝脏疾病诊断的诊断步骤及实验室项目的选择原则。 3. ALT、AST 在肝炎病人的表现特点？ 4. 血浆蛋白检测的临床意义？
6、肾脏疾病的病历分析一见习 见习类型 仪器操作 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 提供病例资料结合实验检测数据熟悉肾脏疾病的特点。 见习内容： 1.提供病例资料。根据以上病史摘要，请将诊断及诊断依据、鉴别诊 断、进一步检查与治疗原则写在纸上。时间：20分钟 2.组织学生分组进行讨论。 3.提问几名同学，让其阐述对本病例的分析。 4.课堂总结分析本次病例的相关知识点，解决问题。 见习要点及注意事项： 1.了解血浆BUN、Cr、CCr的检测方法及实验原理。 2.依据BUN、Cr、CCr对肾脏功能进行分期。 3.掌握肾脏疾病诊断的诊断步骤及实验室项目的选择原则。 4.掌握肾小球肾炎和肾病综合症的实验室检查特点
8 6、肾脏疾病的病历分析 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 2 现有每组人数 见习目的： 提供病例资料结合实验检测数据熟悉肾脏疾病的特点。 见习内容： 1. 提供病例资料。根据以上病史摘要，请将诊断及诊断依据、鉴别诊 断、进一步检查与治疗原则写在纸上。 时间：20 分钟 2. 组织学生分组进行讨论。 3. 提问几名同学，让其阐述对本病例的分析。 4. 课堂总结分析本次病例的相关知识点，解决问题。 见习要点及注意事项： 1. 了解血浆 BUN、Cr、CCr 的检测方法及实验原理。 2. 依据 BUN、Cr、CCr 对肾脏功能进行分期。 3. 掌握肾脏疾病诊断的诊断步骤及实验室项目的选择原则。 4. 掌握肾小球肾炎和肾病综合症的实验室检查特点
乙、血清总蛋白和葡萄糖测定见习 见习类型 仪器操作 学时 2 计划每组人数 4 现有每组人数 见习目的： 熟悉双缩脲法测定血浆总蛋白和葡萄糖氧化酶法测定血浆葡萄糖的原 理及操作方法。 见习内容： L.葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,.GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并 释放过氧化氢。过氧化酶(perosidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化物分 解为水和氢，并使色原性氧受体4氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醒类化合 物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 2.葡萄糖校准液：5.55mmol/几(100mg/d1)。取空白、标准、测定管三支，酶酚混 合试剂3ml:样品量：20ul:混匀，置37℃水浴中，保温15mim,在波长505nm (副波长660nm)处比色，以空白管调零，读取标准管及测定吸光度。 3.在碱性环境中，二价铜离子与蛋白质中的多肽键反应生成有色的络合物，总蛋 白的含量与颜色的深浅成正比。 4.手工操作法：终点法，60-70gL蛋白标准液。取试管4支，标明测定管(U)、 标准管(S)、标本空白管(B)、试剂空白管(RB)。样品量：37.5ul:双缩脲 试剂量：3ml:混匀，反应时间：30mim:在波长540nm处比色，用蒸馏水调 零，测定各管吸光度 见习要点及注意事项： 1.朗伯-比尔定律(lamber-beer):单色光通过溶液，吸收光能，光强度减弱。吸 光度与液层厚度及溶液浓度的乘积成正比，即：A=Kb*c 2。黄疸血清、严重溶血、葡聚糖、酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本 空白管来消除
9 7、血清总蛋白和葡萄糖测定 见习 见习类型 仪器操作 学 时 2 计划每组人数 4 现有每组人数 见习目的： 熟悉双缩脲法测定血浆总蛋白和葡萄糖氧化酶法测定血浆葡萄糖的原 理及操作方法。 见习内容： 1. 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并 释放过氧化氢。过氧化酶(perosidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化物分 解为水和氢，并使色原性氧受体 4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合 物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 2. 葡萄糖校准液：5.55mmol/L(100mg/dl)。取空白、标准、测定管三支，酶酚混 合试剂 3ml；样品量：20ul；混匀，置 37℃水浴中，保温 15min，在波长 505nm （副波长 660nm）处比色，以空白管调零，读取标准管及测定吸光度。 3. 在碱性环境中，二价铜离子与蛋白质中的多肽键反应生成有色的络合物，总蛋 白的含量与颜色的深浅成正比。 4. 手工操作法：终点法，60~70g/L 蛋白标准液。取试管 4 支，标明测定管（U）、 标准管（S）、标本空白管（B）、试剂空白管（RB）。样品量：37.5ul；双缩脲 试剂量：3ml；混匀，反应时间：30min ；在波长 540nm 处比色，用蒸馏水调 零，测定各管吸光度。 见习要点及注意事项： 1. 朗伯-比尔定律（lamber-beer）：单色光通过溶液，吸收光能，光强度减弱。吸 光度与液层厚度及溶液浓度的乘积成正比，即：A=K*b*c 2. 黄疸血清、严重溶血、葡聚糖、酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本 空白管来消除
10
