项目5微生物生长现象及常见控制菌的 生长特征 重庆医药高等专科学校
项目5 微生物生长现象及常见控制菌的 生长特征 重庆医药高等专科学校
一、微生物的生长现象 生长→ 生物个体由小到大的增长，即表现 为细胞组分与结构在量方面的增加 繁殖 指生物个体数目的增加 在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而 且两者始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难 以划清，因此实际上常群体生长作为衡量微生物 生长的指标。 群体生长的实质是包含着个体细胞生长与繁 殖交替进行的过程
一、微生物的生长现象 生物个体由小到大的增长，即表现 为细胞组分与结构在量方面的增加 生长 繁殖 指生物个体数目的增加 在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而 且两者始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难 以划清，因此实际上常群体生长作为衡量微生物 生长的指标。 群体生长的实质是包含着个体细胞生长与繁 殖交替进行的过程
微生物生长的测定 评价培养条件、营养物质 等对微生物生长的影响； 生 评价不同的抗菌物质对微生物产 生长 生抑制（或杀死）作用的效果； 客观地反映微生物生长的规律；
微生物生长的测定 评价不同的抗菌物质对微生物产 生抑制(或杀死)作用的效果； 客观地反映微生物生长的规律； 评价培养条件、营养物质 等对微生物生长的影响； 微 生 物 生 长
二、药品主要控制菌在鉴别 培养基中的生长现象 (一)大肠杆菌检查法 1简述 ·大肠杆菌即大肠埃希菌(Escherichia coli),为肠杆 菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外，还有 蟑螂埃希菌等四个种 。大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出 体外。在药品中检出大肠杆菌，表明该样品受到人和温血 动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。为保证人体健 康，口服药品必须检查大肠杆菌 。大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌、产毒 性大肠杆菌、溶血性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌等，可引 起婴幼儿、成人爆发性腹泻、结膜炎等病症
二、药品主要控制菌在鉴别 培养基中的生长现象 （一）大肠杆菌检查法 1 简述 大肠杆菌即大肠埃希菌（Escherichia coli），为肠杆 菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外，还有 蟑螂埃希菌等四个种 大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出 体外。在药品中检出大肠杆菌，表明该样品受到人和温血 动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。为保证人体健 康，口服药品必须检查大肠杆菌 大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌、产毒 性大肠杆菌、溶血性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌等，可引 起婴幼儿、成人爆发性腹泻、结膜炎等病症
2对照用菌液 菌种为大肠杆菌[CMCC(B)44102] 对照菌液加入量含菌50~100cfu(一般用量 为0.1m1) 制作方法：营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml 营养肉汤培养基内，36±1℃培养18~24h后，用 0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1：106 其用途： 做阳性对照 检查培养基灵敏度
2 对照用菌液 菌种为大肠杆菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）44102］ 对照菌液加入量含菌50～100cfu（一般用量 为0.1ml） 制作方法：营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml 营养肉汤培养基内，36±1℃培养18～24h后，用 0.9％无菌氯化钠溶液稀释至1：106 其用途： 做阳性对照 检查培养基灵敏度
3操作步骤 3.1增菌培养 取胆盐乳糖(BL)培养基3瓶，每瓶各 100m1 2瓶分别加入规定量的供试液，其中1瓶加 入含对照菌50~100个菌落形成单位的控 制菌菌液作阳性对照，第3瓶加入与供试 液等量的稀释剂作阴性对照 37℃培养18~24h（必要时可延至48h)。 阴性对照应无菌生长。摇匀上述BL增菌培 养液
3.1 增菌培养 取胆盐乳糖（ＢＬ）培养基3瓶，每瓶各 100ml 2瓶分别加入规定量的供试液，其中1瓶加 入含对照菌50～100个菌落形成单位的控 制菌菌液作阳性对照，第3瓶加入与供试 液等量的稀释剂作阴性对照 37℃培养18～24h（必要时可延至48h）。 阴性对照应无菌生长。摇匀上述BL增菌培 养液 3 操作步骤
3.2MUG试验原理 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)试验的原理MUG被B-葡糖 苷酸酶(GUD)水解，产生荧光 实验证明96%的大肠杆菌含GUD,,约10%的沙门菌属些 菌种也含有此酶。单二的M心G鉴别大肠杆菌其漏检率达6 %,鉴于98%的大肠杆菌靛基质试验为阳性，故将MUG, 靛基质试验结合，用EMB琼脂平板分离，辅以IMViC试验 ，在理论上可使大肠杆菌的检出率达99% 由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察 ,.没有主观性，因而用MUG鉴定大肠杆菌己被广泛应用于 临床、食品、饮永、污水等的检测 MUG阳性（有荧光）、靛基质阳性（玫瑰红色），MUG阴性 (无荧光)、靛基质阴性（无色） 如MUG、I试验为阳性或阴性即可报告结果，如MUG与I试 验不二致时，则需分离培养、革兰染色、镜检及生化试 姦鉴别
3.2 MUG试验原理 4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）试验的原理MUG被β-葡糖 苷酸酶（GUD）水解，产生荧光 实验证明96％的大肠杆菌含GUD，约10％的沙门菌属一些 菌种也含有此酶。单一的MUG鉴别大肠杆菌其漏检率达6 ％，鉴于98％的大肠杆菌靛基质试验为阳性，故将MUG， 靛基质试验结合，用EMB琼脂平板分离，辅以IMViC试验 ，在理论上可使大肠杆菌的检出率达99％ 由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察 ，没有主观性，因而用MUG鉴定大肠杆菌已被广泛应用于 临床、食品、饮水、污水等的检测 MUG阳性（有荧光）、靛基质阳性（玫瑰红色）,MUG阴性 （无荧光）、靛基质阴性（无色） 如MUG、I试验为阳性或阴性即可报告结果，如MUG与I试 验不一致时，则需分离培养、革兰染色、镜检及生化试 验鉴别
3.2MUG试验操作 以灭菌吸管取供试品胆盐乳糖增菌培养液 、供试品阳性对照培养液、阴性对照培养 液各0.2ml,分别加入MUG一蛋白胨培养基 (培养基5.7)管，37℃培养4、24h后，将 各管置366nm紫外灯下观察有无蓝白色荧光 ,然后加欧波试液4~5滴于上述MUG管内， 观察液面颜色
3.2 MUG试验操作 以灭菌吸管取供试品胆盐乳糖增菌培养液 、供试品阳性对照培养液、阴性对照培养 液各0.2ml，分别加入MUG－蛋白胨培养基 （培养基5.7）管，37℃培养4、24h后，将 各管置366nm紫外灯下观察有无蓝白色荧光 ，然后加欧波试液4～5滴于上述MUG管内， 观察液面颜色
3.2.1MUG法不必分离单个菌落 除大肠埃希菌外，尚有部分志贺菌属、沙门 菌属的菌株；以及少数革兰阳性球菌、杆菌 和芽孢菌，其MUG为阳性 在MUG培养基成分中增加了去氧胆酸钠，可排 除革兰阳性菌的干扰 志贺菌、沙门菌在胆盐乳糖培养基中较难生 长，即使有生长，本法能检出。并且既然药 品中不得检出大肠杆菌，更不允许检出志贺 菌、沙门菌
3.2.1 MUG法不必分离单个菌落 除大肠埃希菌外，尚有部分志贺菌属、沙门 菌属的菌株；以及少数革兰阳性球菌、杆菌 和芽孢菌，其MUG为阳性 在MUG培养基成分中增加了去氧胆酸钠，可排 除革兰阳性菌的干扰 志贺菌、沙门菌在胆盐乳糖培养基中较难生 长，即使有生长，本法能检出。并且既然药 品中不得检出大肠杆菌，更不允许检出志贺
3.2.2试验耗材要求 配制MUG培养基时，务必校正pH值，灭 菌后pH不得过7.4，否则pH值偏高， MUG分解，本身则显荧光 分装MUG培养基的试管应挑选，试管、 蛋白胨不得显荧光
3.2.2 试验耗材要求 配制MUG培养基时，务必校正pH值，灭 菌后pH不得过7.4，否则pH值偏高， MUG分解，本身则显荧光 分装MUG培养基的试管应挑选，试管、 蛋白胨不得显荧光