运城学院：《食品分析》课程教学资源（电子教案）第六章碳水化合物的测定.doc_大学文库

磨碎、浸渍成溶液（提取液），经过滤后再测定。 (一)提取 1、常用的提取剂 (1)水温度控制在40-50℃，提取效果好，若温度过高，可提取出相当量的可溶性淀粉和糊精。水提取液中，可能含有色素、蛋白质、可溶性果胶、可溶性淀粉、有机酸等干扰物质，应采用相应的方法除去。为防止蔗糖等低聚糖在加热时被部分水解，提取液应调为中性。 (2)乙醇溶液用70%-75%的乙醇溶液，糖类可以溶解，蛋白质、淀粉和糊精等都不能溶解。若样品中含水量较高时，混合后乙醇的最终浓度应控制在上述范围之内。 2、提取液制备的原则 (1)取样量与稀释倍数的确定使0.5一3.5mgmL。取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的分析方法的检测范围。一般提取经净化和可能的转化后，每毫升含糖量应在 0.5-3.5g之间，提取10克含糖2%的样品可在100毫升容量瓶中进行；而对于含糖较高的食品，可取5~10克样品于250毫升容量瓶中进行提取。 (②)含脂肪的食品，须经脱脂后再用水提取。含脂肪的食品，如乳酪，巧克力，蛋黄酱及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分层不好，可以进行离心分离），然后用水提取。 (3)含有大量淀粉、糊精及蛋白质的食品，用乙醇溶液提取。含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出，影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶液提取。乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精沉淀，通常用70~75%的乙醇溶液。若样品含水量较高，混合后的最终浓度应控制在上述范围内。提取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液，如此提取2~3次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为蛋白质不会溶解出来 (4)含酒精和二氧化碳的液体样品，应先除酒精、CO2。含酒精和二氧化碳的液体样品，通常蒸发至原体积1/3~1/4，以除去酒精和二氧化碳。但酸性食，在加热前应预先用氢氧化钠调节样品溶液至中性，以防止低聚糖被部分水解。 (5)提取固体样品时，为提高提取效果，有时需加热，加热温度一般控制在。40-50 ℃，一般不超过80℃，温度过高时水溶性多糖溶出，增加下步澄清工作的负担，用乙醇做提取剂，加热时应安装回流装置。 (二)提取液的澄清 1、常用澄清剂要符合三点要求(p64) (1)能较完全地除去干扰物质： (2)不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质： (3)过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作，易于除掉。 2、常用澄清剂种类 (1)中性醋酸铅【Pb(CH,C00)z·3H20】 4

4 磨碎、浸渍成溶液（提取液），经过滤后再测定。（一）提取 1、常用的提取剂（1）水温度控制在 40-50℃，提取效果好，若温度过高，可提取出相当量的可溶性淀粉和糊精。水提取液中，可能含有色素、蛋白质、可溶性果胶、可溶性淀粉、有机酸等干扰物质，应采用相应的方法除去。为防止蔗糖等低聚糖在加热时被部分水解，提取液应调为中性。（2）乙醇溶液用 70%-75%的乙醇溶液，糖类可以溶解，蛋白质、淀粉和糊精等都不能溶解。若样品中含水量较高时，混合后乙醇的最终浓度应控制在上述范围之内。 2、提取液制备的原则 ⑴ 取样量与稀释倍数的确定,使 0.5—3.5mg/mL。取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的分析方法的检测范围。一般提取经净化和可能的转化后，每毫升含糖量应在 0.5-3.5mg 之间，提取 10 克含糖 2%的样品可在 100 毫升容量瓶中进行；而对于含糖较高的食品，可取 5~10 克样品于 250 毫升容量瓶中进行提取。 ⑵ 含脂肪的食品，须经脱脂后再用水提取。含脂肪的食品，如乳酪，巧克力，蛋黄酱及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分层不好，可以进行离心分离），然后用水提取。 ⑶ 含有大量淀粉、糊精及蛋白质的食品，用乙醇溶液提取。含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出，影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶液提取。乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精沉淀，通常用 70~75%的乙醇溶液。若样品含水量较高，混合后的最终浓度应控制在上述范围内。提取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液，如此提取 2~3 次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为蛋白质不会溶解出来 ⑷ 含酒精和二氧化碳的液体样品，应先除酒精、CO2。含酒精和二氧化碳的液体样品，通常蒸发至原体积 1/3~1/4，以除去酒精和二氧化碳。但酸性食，在加热前应预先用氢氧化钠调节样品溶液至中性，以防止低聚糖被部分水解。（5）提取固体样品时，为提高提取效果，有时需加热，加热温度一般控制在。40-50 ℃，一般不超过 80℃，温度过高时水溶性多糖溶出，增加下步澄清工作的负担，用乙醇做提取剂，加热时应安装回流装置。（二）提取液的澄清 1、常用澄清剂要符合三点要求（p64）（1）能较完全地除去干扰物质；（2）不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质；（3）过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作，易于除掉。 2、常用澄清剂种类（1）中性醋酸铅【Pb(CH3COO)2·3H2O】

作用机理：铅离子能与很多离子结合，生成难溶沉淀物，同时吸附除去部分杂质。除去蛋白质、果胶、有机酸、单宁等杂质。适用范围：测定还原糖样液的澄清，但它的脱色能力较差，不能用于深色样液的澄清，适用于浅色的糖及糖浆制品、果蔬制品、焙烤制品等。注意：铅盐有毒，使用时应注意。 (2)乙酸锌和亚铁氢化钾溶液作用机理：乙酸锌和亚铁氢化钾反应生成的氰亚铁酸锌沉淀带走或吸附干扰物质。适用范围：除蛋白质能力强，但脱色能力差，适用于色泽较浅蛋白质含量较高的样液的澄清，如乳制品、豆制品等。 (3)硫酸铜和氢氧化钠溶液作用机理：在碱性条件下，铜离子可使蛋白质沉淀。适用范围：富含蛋白质的样品。 (4)碱性醋酸铅：深色糖液 (5)氢氧化铝溶液（铝乳）：凝聚胶体，对于非胶态杂质的澄清效果不好。用于浅色糖液的澄清，或作为附加澄清剂。 (6)活性炭：除去色素，但能吸附糖类。 3、澄清剂的用量用量必须适当：太少，达不到澄清的目的，太多，会使分析结果产生误差。使用：（以中性乙酸铅为例：当样品在测定过程中进行加热时，铅将与糖特别是果糖结合生成铅糖化合物，使测得的糖含量降低。) 为使误差为最小，必须使用最少量的澄清剂。一般先向样液中加入1~3m1澄清剂，充分混合后静置。在上层清液中加入几滴澄清剂，若无新的沉淀生成，说明杂质己沉淀完全，若有新的沉淀生成，就再加入几滴，混匀并静置几分钟，如此重复直至无沉淀形成。或者加入除铅剂避免铅糖化合物生成。常用的除铅剂有草酸钠、草酸钾、硫酸钠、磷酸氢二钠等。固态：将样液定容到一定体积后再加入：液态：加入除铅剂后再定容。除铅剂的用量也要适当，在保证使铅完全沉淀的情况下，使用量尽量减少。二、还原糖的测定根据糖分的还原性进行测定的方法叫还原糖法。还原糖的测定是糖类定量的基础。 (一)碱性铜盐法碱性铜盐指碱性酒石酸铜溶液，由碱性酒石酸铜甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为酒石酸钾钠。根据反应过程中定量方法不同，该法分为直接滴定法、高锰酸钾法萨氏法、蓝-爱农法等。 1、直接滴定法（是GB法） (1)原理：将一定量的减性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀：这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀： 5

5 作用机理：铅离子能与很多离子结合，生成难溶沉淀物，同时吸附除去部分杂质。除去蛋白质、果胶、有机酸、单宁等杂质。适用范围：测定还原糖样液的澄清，但它的脱色能力较差，不能用于深色样液的澄清，适用于浅色的糖及糖浆制品、果蔬制品、焙烤制品等。注意：铅盐有毒，使用时应注意。（2）乙酸锌和亚铁氢化钾溶液作用机理：乙酸锌和亚铁氢化钾反应生成的氰亚铁酸锌沉淀带走或吸附干扰物质。适用范围：除蛋白质能力强，但脱色能力差，适用于色泽较浅蛋白质含量较高的样液的澄清，如乳制品、豆制品等。（3）硫酸铜和氢氧化钠溶液作用机理：在碱性条件下，铜离子可使蛋白质沉淀。适用范围：富含蛋白质的样品。（4）碱性醋酸铅：深色糖液（5）氢氧化铝溶液（铝乳）：凝聚胶体，对于非胶态杂质的澄清效果不好。用于浅色糖液的澄清，或作为附加澄清剂。（6）活性炭：除去色素，但能吸附糖类。 3、澄清剂的用量用量必须适当：太少，达不到澄清的目的，太多，会使分析结果产生误差。使用：（以中性乙酸铅为例：当样品在测定过程中进行加热时，铅将与糖特别是果糖结合生成铅糖化合物，使测得的糖含量降低。）为使误差为最小，必须使用最少量的澄清剂。一般先向样液中加入1～3 ml 澄清剂，充分混合后静置。在上层清液中加入几滴澄清剂，若无新的沉淀生成，说明杂质已沉淀完全，若有新的沉淀生成，就再加入几滴，混匀并静置几分钟，如此重复直至无沉淀形成。或者加入除铅剂避免铅糖化合物生成。常用的除铅剂有草酸钠、草酸钾、硫酸钠、磷酸氢二钠等。固态：将样液定容到一定体积后再加入；液态：加入除铅剂后再定容。除铅剂的用量也要适当，在保证使铅完全沉淀的情况下，，使用量尽量减少。二、还原糖的测定根据糖分的还原性进行测定的方法叫还原糖法。还原糖的测定是糖类定量的基础。（一）碱性铜盐法碱性铜盐指碱性酒石酸铜溶液，由碱性酒石酸铜甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为酒石酸钾钠。根据反应过程中定量方法不同，该法分为直接滴定法、高锰酸钾法、萨氏法、蓝-爱农法等。 1、直接滴定法（是GB法）（1）原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀；这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀；

这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点：根据样液消耗量可计算出还原糖含量。 Cu2”+还原糖 Cu" 计算还原糖的量有两种方法： 1)用己知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方法。 2)利用通过实验编制出的还原糖检索表来计算。（附表8-12）在测定过程中要严格遵守标定或制表时所规定的操作条件，如热源强度（电炉功率）、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度等。 (2)适用范围及特点本法又称快速法，它是在蓝一爱农容量法基础上发展起来的，其特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。 (3)试剂 ①碱性酒石酸铜甲液：硫酸铜+次甲基蓝。 ②碱性酒石酸铜乙液：酒石酸钾钠+NaOH+亚铁氰化钾。 ③乙酸锌溶液澄清剂 ④亚铁氰化钾溶液 ⑤葡萄糖标准溶液：准确称取经98~100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后移入1000m1容量瓶中，加入5m1盐酸（防止微生物生长）。 (4)测定方法 1)样品处理取适量样品，按本章第二节中的原则对样品进行提取，提取液移入250m1容量瓶中，慢慢加入5m1乙酸锌溶液和5m1亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静置30分钟。用于燥滤纸过滤，弃初滤液，收集滤液备用。 2)碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml,置于250ml锥形瓶中，加水10ml,加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9m葡萄糖标准溶液，加热使其在2分钟内沸腾，趁热以每2秒1 滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。 m1=p×V m一一10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg; p一一葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml: V一一标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，ml。 6

6 这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；根据样液消耗量可计算出还原糖含量。 Cu2+ + 还原糖 Cu+ 计算还原糖的量有两种方法： 1）用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方法。 2）利用通过实验编制出的还原糖检索表来计算。（附表8-12）在测定过程中要严格遵守标定或制表时所规定的操作条件，如热源强度(电炉功率)、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度等。（2）适用范围及特点本法又称快速法，它是在蓝一爱农容量法基础上发展起来的，其特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。（3）试剂 ① 碱性酒石酸铜甲液：硫酸铜+次甲基蓝。 ② 碱性酒石酸铜乙液：酒石酸钾钠 + NaOH + 亚铁氰化钾。 ③ 乙酸锌溶液 ④ 亚铁氰化钾溶液 ⑤ 葡萄糖标准溶液：准确称取经 98 ～ 100 ℃ 干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后移入1000 m1容量瓶中，加入5m1盐酸(防止微生物生长)。（4）测定方法 1）样品处理取适量样品，按本章第二节中的原则对样品进行提取，提取液移入250 m1 容量瓶中，慢慢加入 5 m1乙酸锌溶液和 5 m1亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静置 30分钟。用于燥滤纸过滤，弃初滤液，收集滤液备用。 2）碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各 5ml，置于250 ml 锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2分钟内沸腾，趁热以每2秒1 滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。 m1 = ρ × V m1——10ml 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量, mg; ρ——葡萄糖标准溶液的浓度, mg／ml； V——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，ml。澄清剂

也可不标定，直接查表求m值。 3)样品溶液预测吸取碱性洒石酸铜甲液及乙液各5.00ml,置于250m1锥形瓶中，加水10ml.加玻璃珠 3粒，加热使其在2分钟内至沸，准确沸腾30秒钟，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。待溶液蓝色变浅时.以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。 4)样品溶液测定吸取碱性洒石酸铜甲液及乙液各5.00ml,置于250ml锥形瓶中，加玻璃珠3粒，丛滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少1mL的样品溶液，加热使其在2分钟内沸腾，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3份，取平均值。 (5)说明与讨论 ①此法测得的是总还原糖量。此法所用的氧化剂碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都可被氧化，所以测得的是总还原糖量。 ②在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入C,得到错误的结果。醋酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉淀剂这两种试剂混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀，能使溶液中的蛋白质共同沉淀下来。 ③碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。甲液：次甲基蓝也是一种氧化剂，但在测定条件下氧化能力比C“弱，故还原糖先与 Cu反应，C完全反应后，稍过量的还原糖才与次甲基蓝指示剂反应，使之由蓝色变为无色，指示到达终点。乙液：为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu0生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下： Cu20 K Fe(CN)+H20=K2Cu Fe(CN)6 +2KOH ④滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是可以加快还原糖与C的反应速度：二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。 ⑤滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。 ⑥样品溶液必须进行预测。目的：一是本法对样品溶液中还原糖浓度有一定要求 (0.1%左右)，测定时样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测时消耗样液量在10m1左右：二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1m1左右的样液，只留下1ml左右样液在续滴定时加入，以保证在1分钟内完成续滴定工作，提高测定的准确度。 7

7 也可不标定，直接查表求 m1值。 3）样品溶液预测吸取碱性洒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置于250m1锥形瓶中，加水10 ml．加玻璃珠 3粒，加热使其在2分钟内至沸，准确沸腾30秒钟，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。待溶液蓝色变浅时．以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。 4）样品溶液测定吸取碱性洒石酸铜甲液及乙液各 5.00 ml，置于250 ml 锥形瓶中，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少1 ml 的样品溶液，加热使其在2分钟内沸腾，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3份，取平均值。（5）说明与讨论 ① 此法测得的是总还原糖量。此法所用的氧化剂碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都可被氧化，所以测得的是总还原糖量。 ② 在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入 Cu2+，得到错误的结果。醋酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉淀剂这两种试剂混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀，能使溶液中的蛋白质共同沉淀下来。 ③ 碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。甲液：次甲基蓝也是一种氧化剂，但在测定条件下氧化能力比 Cu2+弱，故还原糖先与 Cu2+反应，Cu2+完全反应后，稍过量的还原糖才与次甲基蓝指示剂反应，使之由蓝色变为无色，指示到达终点。乙液：为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与 Cu2 O 生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下： Cu2 O + K4 Fe(CN) +H2 O＝K2 Cu2 Fe(CN)6 +2KOH ④ 滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是可以加快还原糖与Cu2+的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。 ⑤ 滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。 ⑥ 样品溶液必须进行预测。目的；一是本法对样品溶液中还原糖浓度有一定要求 (0.1%左右)，测定时样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测时消耗样液量在 10 ml 左右；二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少 1 ml 左右的样液，只留下 1 ml 左右样液在续滴定时加入，以保证在 1 分钟内完成续滴定工作，提高测定的准确度

运城学院：《食品分析》课程教学资源（电子教案）第六章 碳水化合物的测定

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