实验三 细菌抹片的制备及染色
实验三 细菌抹片的制备及染色
一、目的要求 1、了解细菌简单染色法和革兰氏染色 法的原理。 2、掌握细菌抹片技术及几种常用染色 法的操作步骤
一、目的要求 1、 了解细菌简单染色法和革兰氏染色 法的原理。 2 、掌握细菌抹片技术及几种常用染色 法的操作步骤
二、原理 由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大 量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差 不大。当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时， 由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的 形状，更谈不上识别其细微结构。而经过染色，就可 借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态，这样 便可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形状 和结构，而且还可以通过不同的染色反应来鉴别细菌
二、原理 由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大 量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差 不大。当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时， 由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的 形状，更谈不上识别其细微结构。而经过染色，就可 借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态，这样 便可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形状 和结构，而且还可以通过不同的染色反应来鉴别细菌
三、器材 1大肠杆菌、葡萄球菌18-24h液体培养物 和斜面培养物 2美兰染色液，革兰氏染色液 3载玻片、接种杯、酒精灯、染色架、吸水 纸、蜡笔、擦镜纸、显微镜、香柏油等
三、器材 1 大肠杆菌、葡萄球菌18-24h液体培养物 和斜面培养物 2 美兰染色液，革兰氏染色液 3 载玻片、接种杯、酒精灯、染色架、吸水 纸、蜡笔、擦镜纸、显微镜、香柏油等
四、内容和方法 (一)细菌抹片的制备 1涂片方法 (1)菌落涂片方法用经酒精灯火焰灭菌过的接种环，蘸取 生理盐水1滴于载玻片中央，再勾取细菌的固体培养物少 许混于生理盐水中，涂抹成直径1一1.5cm大小均匀的抹 片，此膜应既薄又均匀为好，待干即成。 (2)菌液涂片法用灭菌接种环蘸取菌液1一2接种环，均 匀涂抹再载玻片上，呈直径1一1.5cm左右的圆形涂膜， 自然干燥后备用。 (3)组织涂片方法先用镊子夹持组织局部，以灭菌剪刀 剪取一小块，夹出后以其新鲜切面在载玻片上压印或涂成 一薄层
四、内容和方法 （一）细菌抹片的制备 1 涂片方法 （1）菌落涂片方法 用经酒精灯火焰灭菌过的接种环，蘸取 生理盐水1滴于载玻片中央，再勾取细菌的固体培养物少 许混于生理盐水中，涂抹成直径1－1.5cm大小均匀的抹 片，此膜应既薄又均匀为好，待干即成。 （2 ）菌液涂片法 用灭菌接种环蘸取菌液1－2接种环，均 匀涂抹再载玻片上，呈直径1－1.5cm左右的圆形涂膜， 自然干燥后备用。 （3 ）组织涂片方法 先用镊子夹持组织局部，以灭菌剪刀 剪取一小块，夹出后以其新鲜切面在载玻片上压印或涂成 一薄层
2、干燥 涂片最好在室温自然干燥。必要时，可 将标本面向上，在离酒精灯火焰远处烘干， 切勿紧靠火焰，以免标本糊焦而不能检查
2、干燥 涂片最好在室温自然干燥。必要时，可 将标本面向上，在离酒精灯火焰远处烘干， 切勿紧靠火焰，以免标本糊焦而不能检查
3、固定 (1)火焰固定将已干燥好的抹片，使涂面向上， 以钟摆速度通过酒精灯火焰3一4此，以标本片不 烫手为度。放置冷却后，进行染色。 (2)化学固定血液、组织脏器等抹片做姬姆萨 染色或单染色时，不能用火焰固定。可将干燥的 抹片浸入甲醇2一3min,取出晾干；或者在抹片 上滴加数滴甲醇使其作用2-3min,自然挥发干 燥。抹片做瑞特氏染色时则不必做特别固定，染 色液中含有的甲醇可以达到固定的目的
3、固定 （1） 火焰固定 将已干燥好的抹片，使涂面向上， 以钟摆速度通过酒精灯火焰3－4此，以标本片不 烫手为度。放置冷却后，进行染色。 （2） 化学固定 血液、组织脏器等抹片做姬姆萨 染色或单染色时，不能用火焰固定。可将干燥的 抹片浸入甲醇2－3min，取出晾干；或者在抹片 上滴加数滴甲醇使其作用2－3min，自然挥发干 燥。抹片做瑞特氏染色时则不必做特别固定，染 色液中含有的甲醇可以达到固定的目的
抹片固定的目的： (1)使菌体蛋白凝固附着在载玻片上，以防 染色过程中被水冲掉。 (2)杀死细菌以改变细菌对染料的通透性。 (3)能杀死抹片中的部分微生物
抹片固定的目的： （1）使菌体蛋白凝固附着在载玻片上，以防 染色过程中被水冲掉。 （2）杀死细菌以改变细菌对染料的通透性。 （3）能杀死抹片中的部分微生物
(二)、细菌常用的染色方法 ⊥.简单染色法：所谓单染色法是利用单一染料对细 菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于 菌体一般形态的观察。如。 美蓝染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加适 量的（足够覆盖抹片点即可）美蓝染色液，经1 一2min,水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干 (不能太热)，然后镜检
（二）、细菌常用的染色方法 1.简单染色法：所谓单染色法是利用单一染料对细 菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于 菌体一般形态的观察。如。 美蓝染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加适 量的（足够覆盖抹片点即可）美蓝染色液，经1 －2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干 （不能太热），然后镜检
2,复染色法：应用两种或两种以上的染料或 再加助染剂进行染色的方法。染色后不同 细菌和物体或细菌结构的不同部分科呈现 不同颜色，有鉴别细菌的作用。如革兰氏 染色法、抗酸染色法和姬姆萨染色法等
2 . 复染色法：应用两种或两种以上的染料或 再加助染剂进行染色的方法。染色后不同 细菌和物体或细菌结构的不同部分科呈现 不同颜色，有鉴别细菌的作用。如革兰氏 染色法、抗酸染色法和姬姆萨染色法等