1 实训九 甲硝唑注射液的质量检测 一、 实训目的 1、掌握甲硝唑注射液中不溶性微粒、细菌内毒素的检查方法。 2、掌握甲硝唑注射液含量测定的基本原理和操作方法。 3、掌握细菌内毒素测定仪、智能微粒分析仪的操作方法。 4、熟悉含量测定的计算方法。 5、了解紫外可见分光光计的构造。 二、 实训原理 不溶性微粒检查法是在可见异物检查符合规定后，用以检查溶液型静脉用注射剂中 不溶性微粒的大小及数量。 本法包括光阻法和显微计数法。除另有规定外，测定方法一般先采用光阻法；当光 阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测 定，应符合规定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。 试验操作环境应不得引入微粒，测定前的操作应在层流净台中进行。玻璃仪器和其 他所需的用品均应洁净、无微粒。本法所用微粒检查用水（或其他适宜溶剂），使用前 须经不大于 1.0μm 的微孔滤膜滤过。 结果判定 (1)标示装量为 lOOml 或 lOOml 以上的静脉用注射液 除另有规定外，每 lml 中含 lOμm 以上的微粒不得过 25 粒，含 25μm 以上的微粒不得过 3 粒。 (2)标示装量为 lOOml 以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末及注射用浓溶液 除另有规定外，每个供试品容器中含 10μm 以上的微粒不得过 6000 粒，含 25μm 以上 的微粒不得过 600 粒。 甲硝唑在紫外光区具有特征吸收峰，在 277nm 的波长处有最大吸收。可以利用这一 性质用于含量测定。 细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以 判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。它包括两种方法：即凝胶法 和光度测定法。常用凝胶法。 细菌内毒素检查法试验所需： （1）细菌内毒素工作标准品 （2）鲎试剂 （3）细菌内毒素检查用水 （4）试验所用器皿等：250℃干烤至少 60 分钟 （5）供试品溶液 （6）鲎试剂灵敏度复核及供试液干扰试验 三、 实训操作
1 实训九 甲硝唑注射液的质量检测 一、 实训目的 1、掌握甲硝唑注射液中不溶性微粒、细菌内毒素的检查方法。 2、掌握甲硝唑注射液含量测定的基本原理和操作方法。 3、掌握细菌内毒素测定仪、智能微粒分析仪的操作方法。 4、熟悉含量测定的计算方法。 5、了解紫外可见分光光计的构造。 二、 实训原理 不溶性微粒检查法是在可见异物检查符合规定后，用以检查溶液型静脉用注射剂中 不溶性微粒的大小及数量。 本法包括光阻法和显微计数法。除另有规定外，测定方法一般先采用光阻法；当光 阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测 定，应符合规定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。 试验操作环境应不得引入微粒，测定前的操作应在层流净台中进行。玻璃仪器和其 他所需的用品均应洁净、无微粒。本法所用微粒检查用水（或其他适宜溶剂），使用前 须经不大于 1.0μm 的微孔滤膜滤过。 结果判定 (1)标示装量为 lOOml 或 lOOml 以上的静脉用注射液 除另有规定外，每 lml 中含 lOμm 以上的微粒不得过 25 粒，含 25μm 以上的微粒不得过 3 粒。 (2)标示装量为 lOOml 以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末及注射用浓溶液 除另有规定外，每个供试品容器中含 10μm 以上的微粒不得过 6000 粒，含 25μm 以上 的微粒不得过 600 粒。 甲硝唑在紫外光区具有特征吸收峰，在 277nm 的波长处有最大吸收。可以利用这一 性质用于含量测定。 细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以 判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。它包括两种方法：即凝胶法 和光度测定法。常用凝胶法。 细菌内毒素检查法试验所需： （1）细菌内毒素工作标准品 （2）鲎试剂 （3）细菌内毒素检查用水 （4）试验所用器皿等：250℃干烤至少 60 分钟 （5）供试品溶液 （6）鲎试剂灵敏度复核及供试液干扰试验 三、 实训操作
2 （一）微粒检查 取装量为 100ml 的本品 1 瓶，依法检查(Ⅸ C)， 除另有规定外，取供试品，用水 将容器外壁洗净，小心翻转 20 次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，先倒出部分 供试品溶液冲洗开启口及取样杯，再将供试品溶液倒入取样杯中，超声处理(80～ 120W)30 秒脱气或静置适当时间脱气后，置于取样器上(或将供试品容器直接脱气后置 于取样器上，不加搅拌)。开启搅拌或手动缓缓转动，使溶液均匀(避免气泡产生)，依法 测定至少 3 次，每次取样应不少于 5ml，记录数据，另取至少 2 个供试品，同法测定。 每个供试品第一次数据不计，取后续测定结果的平均值计算。应符合规定。 （二）含量测定 精密量取本品适量，加盐酸溶液(9→1000)定量稀释制成每 1ml 中约含甲硝唑 12.5 μg 的溶液，照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA)，在 277nm 的波长处测定吸光度，按 C6H9N3O3的吸收系数( )为 377nm 计算，即得。 （三）细菌内毒素 （1）配制检验用内毒素溶液 （2）鲎试剂原安瓿 8 支，2 支供试品管，2 支阳性对照管，2 支阴性对照管，2 支 供试品阳性对照管。 （3）封闭管口，垂直放入 37℃±1℃适宜恒温器中，保温 60 分钟±2 分钟。 结果判断： 将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转 180 ℃时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱 者为阳性，记录为（+）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）。供试 品管 2 支均为（-），应认为符合规定。 四、思考题 1、不溶性微粒检查法的基本操作应注意哪些问题？ 2、影响含量测定的因素有哪些？ 3、细菌内毒素检查时需要哪些试剂和药品？ 1% E1cm
2 （一）微粒检查 取装量为 100ml 的本品 1 瓶，依法检查(Ⅸ C)， 除另有规定外，取供试品，用水 将容器外壁洗净，小心翻转 20 次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，先倒出部分 供试品溶液冲洗开启口及取样杯，再将供试品溶液倒入取样杯中，超声处理(80～ 120W)30 秒脱气或静置适当时间脱气后，置于取样器上(或将供试品容器直接脱气后置 于取样器上，不加搅拌)。开启搅拌或手动缓缓转动，使溶液均匀(避免气泡产生)，依法 测定至少 3 次，每次取样应不少于 5ml，记录数据，另取至少 2 个供试品，同法测定。 每个供试品第一次数据不计，取后续测定结果的平均值计算。应符合规定。 （二）含量测定 精密量取本品适量，加盐酸溶液(9→1000)定量稀释制成每 1ml 中约含甲硝唑 12.5 μg 的溶液，照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA)，在 277nm 的波长处测定吸光度，按 C6H9N3O3的吸收系数( )为 377nm 计算，即得。 （三）细菌内毒素 （1）配制检验用内毒素溶液 （2）鲎试剂原安瓿 8 支，2 支供试品管，2 支阳性对照管，2 支阴性对照管，2 支 供试品阳性对照管。 （3）封闭管口，垂直放入 37℃±1℃适宜恒温器中，保温 60 分钟±2 分钟。 结果判断： 将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转 180 ℃时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱 者为阳性，记录为（+）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）。供试 品管 2 支均为（-），应认为符合规定。 四、思考题 1、不溶性微粒检查法的基本操作应注意哪些问题？ 2、影响含量测定的因素有哪些？ 3、细菌内毒素检查时需要哪些试剂和药品？ 1% E1cm