目 录 前 言， 0 中药化学实验注意事项！ 44 实验一虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷的提取分离和鉴定6 实验二槐花米黄酮苷及苷元的提取和鉴定… 12 实验三粉防己生物碱的提取、分离和鉴识 19 中药化学成份的预试验操作规程 26 附录一常用试剂的配制 33 附录二常用有机溶剂的精制 37
目 录 前 言.............................................................................................. 0 中药化学实验注意事项.................................................................... 1 实验一 虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷的提取分离和鉴定...... 6 实验二 槐花米黄酮苷及苷元的提取和鉴定................................ 12 实验三 粉防己生物碱的提取、分离和鉴识.............................. 19 中药化学成份的预试验操作规程.................................................. 26 附录一 常用试剂的配制.............................................................. 33 附录二 常用有机溶剂的精制...................................................... 37
前 言 中药化学是一门实践性较强的课程，中药化学实验是本课程的重要组成部 分。要想跟好的完成科研任务，不仅需要有良好的理论基础，而且还要熟练地掌 握各项实验技能，本试验技能广泛用于中药专业的各个领域，与中药制剂、中药 鉴定、中药炮制、中成药分析等有密切的联系。 与学过的实验课相比，本试验课有其自己的特点： 1.一个完整的实验要经过提取、分离、精制、鉴识四个基本过程，历程长， 需要时间长。如实验一要用五次实验课完成。 2.中药有效成分含量一般比较低，产率也很低，因此要求大家以认真、仔 细、耐心的态度进行试验，培养良好的作风。 本实验课看重训练同学们在中药化学方面的基本操作技能，用学到的理论知 识解释实验原理及现象，培养独立解决实验问题的能力，因此要求实验前做好预 习，实验中勤于动手，善于观察，积极思考，实验后认真总结，写出实验报告， 提倡写心得体会，发表意见和建议
前 言 中药化学是一门实践性较强的课程，中药化学实验是本课程的重要组成部 分。要想跟好的完成科研任务，不仅需要有良好的理论基础，而且还要熟练地掌 握各项实验技能，本试验技能广泛用于中药专业的各个领域，与中药制剂、中药 鉴定、中药炮制、中成药分析等有密切的联系。 与学过的实验课相比，本试验课有其自己的特点： 1. 一个完整的实验要经过提取、分离、精制、鉴识四个基本过程，历程长， 需要时间长。如实验一要用五次实验课完成。 2. 中药有效成分含量一般比较低，产率也很低，因此要求大家以认真、仔 细、耐心的态度进行试验，培养良好的作风。 本实验课看重训练同学们在中药化学方面的基本操作技能，用学到的理论知 识解释实验原理及现象，培养独立解决实验问题的能力，因此要求实验前做好预 习，实验中勤于动手，善于观察，积极思考，实验后认真总结，写出实验报告， 提倡写心得体会，发表意见和建议
中药化学实验注意事项 中药化学实验室所用的溶剂、药品很多是易燃、易爆、有毒、有腐蚀性、刺 激性的物质，实验操作又常常在加温或减压情况下进行，需用各种电源、电器及 其他仪器，操作不慎会造成火灾、爆炸等事故，因此要严格遵守操作规程，谨防 事故发生。 1.实验前必须充分预习，搞清实验原理和操作程序，安排好实验计划，实 验开始前应检查仪器是否完整、装置是否正确，合格后才能开始实验。 2.实验过程中不能擅自离开，随时注意实验情况，保证实验正常进行，并 及时做好实验记录。 3.保持实验室内清洁、安静。实验台面要干净整齐。与实验无关的物品不 得放在台面上，仪器用后应及时清洗，破损仪器要填写报告单，并注明原因。 4.使用电器设备时应了解操作规程，不要用湿手触摸仪器。 5.实验结束时应搞好各自台面的卫生，关好水、电，值日生要负责搞好整 个实验室的卫生，关好水、电、门、窗。 二、防火防爆注意事项 1.倾倒和存放易燃、易挥发的有机溶剂时要远离火源，切勿倒于水池内， 必须倒入一定容器内。 2.不得在烘箱内干燥带有有机溶剂的仪器或物品。 3.存放于冰箱中的有机溶剂必须置于带塞容器内，并应注明标签，定时清 扫和检查。乙醚、石油醚等闪燃点低的溶剂不能置冰箱中保存。 4.使用明火时，实验台面周围不得放置易燃性有机溶剂。 5.回流或蒸馏易燃有机溶剂时，不能使用明火加热，应根据溶剂沸点选用 水浴、油浴、砂浴或电热套，注意仪器装置切勿漏气，加入溶剂量不应超量，加 热前要加入止爆剂。添加溶剂或补加沸石时必须停止加热，待降温后才能加入， 否则会发生爆沸。 6.乙醚闪燃点低，遇火易引起爆炸，而且在蒸馏过程中因其本身产生的过
1 中药化学实验注意事项 中药化学实验室所用的溶剂、药品很多是易燃、易爆、有毒、有腐蚀性、刺 激性的物质，实验操作又常常在加温或减压情况下进行，需用各种电源、电器及 其他仪器，操作不慎会造成火灾、爆炸等事故，因此要严格遵守操作规程，谨防 事故发生。 1. 实验前必须充分预习，搞清实验原理和操作程序，安排好实验计划，实 验开始前应检查仪器是否完整、装置是否正确，合格后才能开始实验。 2. 实验过程中不能擅自离开，随时注意实验情况，保证实验正常进行，并 及时做好实验记录。 3. 保持实验室内清洁、安静。实验台面要干净整齐。与实验无关的物品不 得放在台面上，仪器用后应及时清洗，破损仪器要填写报告单，并注明原因。 4. 使用电器设备时应了解操作规程，不要用湿手触摸仪器。 5. 实验结束时应搞好各自台面的卫生，关好水、电，值日生要负责搞好整 个实验室的卫生，关好水、电、门、窗。 二、防火防爆注意事项 1. 倾倒和存放易燃、易挥发的有机溶剂时要远离火源，切勿倒于水池内， 必须倒入一定容器内。 2. 不得在烘箱内干燥带有有机溶剂的仪器或物品。 3. 存放于冰箱中的有机溶剂必须置于带塞容器内，并应注明标签，定时清 扫和检查。乙醚、石油醚等闪燃点低的溶剂不能置冰箱中保存。 4. 使用明火时，实验台面周围不得放置易燃性有机溶剂。 5. 回流或蒸馏易燃有机溶剂时，不能使用明火加热，应根据溶剂沸点选用 水浴、油浴、砂浴或电热套，注意仪器装置切勿漏气，加入溶剂量不应超量，加 热前要加入止爆剂。添加溶剂或补加沸石时必须停止加热，待降温后才能加入， 否则会发生爆沸。 6. 乙醚闪燃点低，遇火易引起爆炸，而且在蒸馏过程中因其本身产生的过
氧化物浓度增加易引起爆炸，所以在蒸馏乙醚时不要蒸干，或先用FSO4的酸性 水溶液洗涤后，再经水洗，脱水，然后再进行蒸馏。 7.苦味酸一般也是易燃之物，一般保存于水中。 8.万一不慎引起着火，应保持镇静，立即切断室内所有火源和电源，并移 开周围的易燃物质。并视着火情况采取不同的灭火措施。 三、防止中毒注意事项 实验室中常用氯仿、甲醇、卤代甲苯、苯、苯胺、二硫化碳、汞、铅等及其 化合物，均为有毒或剧毒药品，中毒途径一般为消化道、呼吸道及皮肤吸收，所 以在应用时应注意： 1.取用毒物时要注意，勿洒在容器外面，勿接触皮肤和口腔。 2.室内应保持良好的通风状况。 3.产生毒气的操作应在通风橱中进行。 4.毒物不得随意乱倒。 5.废溶剂不得倒入水槽，要倒入制定容器统一处理。 四、急救常识 1.硬伤：如为一般轻伤，应取出伤口中的碎玻璃或固体物，用蒸馏水冲洗 后涂上红药水，用消毒纱布包好。大伤口则先按住住血管，急送医院。 2.火伤：轻伤涂以硼酸凡士林，重伤送医院。 3.试剂灼伤： 酸：立即用大量水冲洗，再用3%碳酸氢钠溶液洗涤。 碱：立即用大量水冲洗，再用1%醋酸溶液洗涤，眼睛用饱和硼酸溶液洗。 附：常用易燃溶剂的分级及性质：
2 氧化物浓度增加易引起爆炸，所以在蒸馏乙醚时不要蒸干，或先用 FeSO4 的酸性 水溶液洗涤后，再经水洗，脱水，然后再进行蒸馏。 7. 苦味酸一般也是易燃之物，一般保存于水中。 8. 万一不慎引起着火，应保持镇静，立即切断室内所有火源和电源，并移 开周围的易燃物质。并视着火情况采取不同的灭火措施。 三、防止中毒注意事项 实验室中常用氯仿、甲醇、卤代甲苯、苯、苯胺、二硫化碳、汞、铅等及其 化合物，均为有毒或剧毒药品，中毒途径一般为消化道、呼吸道及皮肤吸收，所 以在应用时应注意： 1. 取用毒物时要注意，勿洒在容器外面，勿接触皮肤和口腔。 2. 室内应保持良好的通风状况。 3. 产生毒气的操作应在通风橱中进行。 4. 毒物不得随意乱倒。 5. 废溶剂不得倒入水槽，要倒入制定容器统一处理。 四、急救常识 1. 硬伤：如为一般轻伤，应取出伤口中的碎玻璃或固体物，用蒸馏水冲洗 后涂上红药水，用消毒纱布包好。大伤口则先按住住血管，急送医院。 2. 火伤：轻伤涂以硼酸凡士林，重伤送医院。 3. 试剂灼伤： 酸：立即用大量水冲洗，再用 3%碳酸氢钠溶液洗涤。 碱：立即用大量水冲洗，再用 1%醋酸溶液洗涤，眼睛用饱和硼酸溶液洗。 附：常用易燃溶剂的分级及性质：
易燃性溶剂 比重 沸点 闪燃点 着火点 爆炸浓度 (℃) 分级 名称 (℃) (℃) (℃) I 乙醚 0.71 35 -45 180 1.9-3.7 I 二硫化碳 1.30 46 -30 100 I 苯 0.88 80 -11 538 1.4-8 I 丙酮 0.79 57 -18 538 2.6-1.3 Ⅱ 乙酸乙酯 0.90 77 -4 427 Ⅱ 甲醇 0.79 65 11 427 6-37 I 乙醇 0.79 78.3 14 400-600 煤油 <1 65 338 注：1，闪燃点：简称闪点，指某种液体表面产生足够的蒸汽与空气形成可燃性混 合物的最低温度。 2.着火点：也称着火温度，指溶剂蒸汽与空气的混合物的爆炸温度。 3.爆炸浓度：指溶剂蒸汽与空气的混合物的爆炸浓度（在空气中的百分浓 度)
3 易燃性溶剂 比重 沸点 （℃） 闪燃点 （℃） 着火点 （℃） 爆炸浓度 （℃） 分级 名称 Ⅰ 乙醚 0.71 35 -45 180 1.9-3.7 Ⅰ 二硫化碳 1.30 46 -30 100 Ⅰ 苯 0.88 80 -11 538 1.4-8 Ⅰ 丙酮 0.79 57 -18 538 2.6-1.3 Ⅱ 乙酸乙酯 0.90 77 -4 427 Ⅱ 甲醇 0.79 65 11 427 6-37 Ⅱ 乙醇 0.79 78.3 14 400-600 Ⅱ 煤油 <1 65 338 注：1. 闪燃点：简称闪点,指某种液体表面产生足够的蒸汽与空气形成可燃性混 合物的最低温度。 2. 着火点：也称着火温度，指溶剂蒸汽与空气的混合物的爆炸温度。 3. 爆炸浓度：指溶剂蒸汽与空气的混合物的爆炸浓度（在空气中的百分浓 度）
本实验常用仪器 仪器名称 规格 数量 仪器名称 规格 数量 圆底烧瓶 1000ml29# 2 抽滤瓶 500ml 1 500ml29# 2 250ml 1 250ml19# 2 100ml 冷凝管 30~40cm 1 大接小 19#/29# 2 19# 具塞三角瓶 500ml 2 分液漏斗 500ml 2 250ml 2 250ml 2 150ml 2 烧杯 2000ml 1 100ml 10 1000ml 50ml 10 500ml 2 10ml 4 100ml 2 布氏漏斗 Φ12cm 1 抽滤垫 1 Φ5cm 1 层析柱 2.5×25cm 1 蒸发皿 1000ml 1 玻璃板 5×15cm 4 100ml 1 层析槽 2 表面皿 Φ10cm 9 玻璃小平皿 玻璃漏斗 Φ15cm 1 减压蒸馏头 19# 1 Φ6cm 减压接收管 19# 1 量筒 100ml 乳头吸管 2 10ml 1 玻璃棒 2 牛角勺 1 小乳钵 1 减压用毛细管 1 试管 10 剪刀 1 抽松头 19# 1 万能夹 2 钢铲 烧瓶夹 3 双顶丝 竹夹 1 铁圈 螺旋夹 1 pH标准板 试管架 1
4 本实验常用仪器 仪器名称 规格 数量 仪器名称 规格 数量 圆底烧瓶 1000ml 29# 2 抽滤瓶 500ml 1 500ml 29# 2 250ml 1 250ml 19# 2 100ml 1 冷凝管 30～40cm 19# 1 大接小 19#/29# 2 具塞三角瓶 500ml 2 分液漏斗 500ml 2 250ml 2 250ml 2 150ml 2 烧杯 2000ml 1 100ml 10 1000ml 1 50ml 10 500ml 2 10ml 4 100ml 2 布氏漏斗 Φ12cm 1 抽滤垫 1 Φ5cm 1 层析柱 2.5×25cm 1 蒸发皿 1000ml 1 玻璃板 5×15cm 4 100ml 1 层析槽 2 表面皿 Φ10cm 9 玻璃小平皿 1 玻璃漏斗 Φ15cm 1 减压蒸馏头 19# 1 Φ6cm 1 减压接收管 19# 1 量筒 100ml 1 乳头吸管 2 10ml 1 玻璃棒 2 牛角勺 1 小乳钵 1 减压用毛细管 1 试管 10 剪刀 1 抽松头 19# 1 万能夹 2 钢铲 烧瓶夹 2 双顶丝 竹夹 1 铁圈 螺旋夹 1 pH 标准板 试管架 1
每组公用仪器 仪器名称 规格 数量 仪器名称 规格 数量 电炉 800W 1 酒精灯 1 熔点测定管 1 干燥箱 1 恒温水浴 1 扭力天平 1 托盘天平 500g 1 喷瓶 4 100g 1 皮老虎 pH试纸 铁支台 2 5
5 每组公用仪器 仪器名称 规格 数量 仪器名称 规格 数量 电炉 800W 1 酒精灯 1 熔点测定管 1 干燥箱 1 恒温水浴 1 扭力天平 1 托盘天平 500g 1 喷瓶 4 100g 1 皮老虎 1 pH 试纸 铁支台 2
实验一虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷的提取分离和鉴定 虎杖系蓼科蓼属植物(Polygonum cuspidatum sieb.et zucc..)的根茎，又名阴 阳莲。味苦，性微寒，具有泻下、健胃、清热、解毒之功。民间多用于消炎、杀 菌、利尿、通经、镇痛，近年来用于烫伤、止血、消结石、降血脂的治疗。近年 来用于治疗烫伤、止血、消结石和降低血脂均有疗效。虎杖根茎中含有大量的蒽 醌成份和二苯乙烯类成份，后者具降血脂的作用。 一、 部分已知成分的理化性质 1.大黄素(Emodin): OH OH HO CH3 橙黄色长结晶（丙酮中为橙色，甲醇中为黄色），mp.256℃一257℃，能升华。 其溶解度如下：Et200.14%,CC40.01%,CHCL30.0718%,CS20.009%,乙醚 0.14%:易溶于乙醇：可溶于氨水、Na2CO3和NaOH水溶液：几乎不溶于水。 2.大黄素-6-甲醚(Physion): OH OH MeO 金黄色针晶，mp.207℃，能升华。溶解性与大黄酚相似。 3.大黄素-3-D-葡萄糖苷(Emodin monoglucoside) mp.190℃一191℃，浅黄色针晶，（稀乙醇中结出，含一分子结晶水）。 4.大黄素-6-甲醚-8-D-葡萄糖苷 mp.230℃一232℃，黄色针晶（稀甲醇中结出）。 6
6 实验一 虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷的提取分离和鉴定 虎杖系蓼科蓼属植物（Polygonum cuspidatum sieb. et zucc.）的根茎，又名阴 阳莲。味苦，性微寒，具有泻下、健胃、清热、解毒之功。民间多用于消炎、杀 菌、利尿、通经、镇痛，近年来用于烫伤、止血、消结石、降血脂的治疗。近年 来用于治疗烫伤、止血、消结石和降低血脂均有疗效。虎杖根茎中含有大量的蒽 醌成份和二苯乙烯类成份，后者具降血脂的作用。 一、部分已知成分的理化性质 1. 大黄素（Emodin）： OH HO O O OH CH3 橙黄色长结晶（丙酮中为橙色，甲醇中为黄色），mp.256℃—257℃，能升华。 其溶解度如下：Et2O 0.14%，CCl4 0.01%，CHCl3 0.0718%，CS2 0.009%，乙醚 0.14%；易溶于乙醇；可溶于氨水、Na2CO3 和 NaOH 水溶液；几乎不溶于水。 2. 大黄素-6-甲醚（Physion）： OH O O OH M CH3 eO 金黄色针晶，mp.207℃，能升华。溶解性与大黄酚相似。 3. 大黄素-3-D-葡萄糖苷（Emodin monoglucoside） mp.190℃—191℃，浅黄色针晶，（稀乙醇中结出，含一分子结晶水）。 4. 大黄素-6-甲醚-8-D-葡萄糖苷 mp.230℃—232℃，黄色针晶（稀甲醇中结出）
5.白藜芦醇(resveratrol): OH CH-CH OH HO 无色针状结晶。mp.256℃一257℃，261℃一264℃，能升华。易溶于乙醚、 氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。 6.白藜芦醇葡萄糖苷(polydatin,peceid): OH CH-CH O-glu HO 又名3,4,5-三羟基芪-3-B-D-葡萄糖苷，mp.225℃，232℃（分解)。无 色针状蔟晶。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水；可溶于乙酸乙酯，稍溶于NCO3 和NaOH水溶液，难溶于乙醚。 UV:onm(1ogε)216(4.42)，230sh(4.29),303(4.52),318(4.52) IR:u(cm1)3400,1600,1525,1470,1270,1185,1160,1100,1040, 970,850,690 附注：此化合物具顺反二种异构体，能互相转化，所得常是二者的混合物以 反式为多，故前人工作中所报道的熔点有所不同，按本实验方法所得的白藜芦醇 苷结晶含一分子结晶水，在130~140℃先融化，继续加热固化，至225~226℃ 全熔。 二、实验目的 1.学习脂溶性成分（苷元）和水溶性成份（苷）的分离方法。 2.学习用pH梯度萃取法分离酸性不同的蒽醌类成分。 3.了解蒽醌类成分的一般性质和鉴别反应。 三、实验原理 7
7 HO CH CH OH OH HO CH CH OH O-glu 5. 白藜芦醇（resveratrol）： 无色针状结晶。mp.256℃—257℃，261℃—264℃，能升华。易溶于乙醚、 氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。 6. 白藜芦醇葡萄糖苷（polydatin , peceid）： 又名 3，4，5-三羟基芪-3-β-D-葡萄糖苷，mp.225℃，232℃（分解）。无 色针状蔟晶。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水；可溶于乙酸乙酯，稍溶于 Na2CO3 和 NaOH 水溶液，难溶于乙醚。 UV：λ MeOH max nm（logε）216（4.42），230sh（4.29），303（4.52），318（4.52） IR：υ KBr max（cm-1）3400，1600，1525，1470，1270，1185，1160，1100，1040， 970，850，690 附注：此化合物具顺反二种异构体，能互相转化，所得常是二者的混合物以 反式为多，故前人工作中所报道的熔点有所不同，按本实验方法所得的白藜芦醇 苷结晶含一分子结晶水，在 130～140℃先融化，继续加热固化，至 225～226℃ 全熔。 二、实验目的 1. 学习脂溶性成分（苷元）和水溶性成份（苷）的分离方法。 2. 学习用 pH 梯度萃取法分离酸性不同的蒽醌类成分。 3. 了解蒽醌类成分的一般性质和鉴别反应。 三、实验原理
根据游离蒽醌与苷溶解性能的差异，先用乙醚萃取出游离蒽醌等脂溶性成 份，从而使脂溶性成分（苷元）和水溶性成份（苷）得到分离。再根据虎掌中蒽 醌类成分由于结构中酚羟基数目及位置不同而成不同强度的酸性，用碱性递加的 的水溶液(5 NaHCO3,5%NaCO3,2%NaOH)自乙醚中提出不同酸性强弱的 游离蒽醌类成分，达到分离的目的。 四、提取分离流程 虎杖粗粉 乙醇提取 乙醇提取液 回收乙醇 浸膏 加水稀释，乙醚萃取 水层 乙醚层 活性炭脱色，趁热过滤 5%NaHC0,萃取 滤液 放冷 NaHCO3液 乙壁液 乙酸乙酯萃取 (弃去) 5%Na2C03萃取 乙酸乙酯液 回收溶剂 Na2C03液 乙醚液 残留物 酸化，过滤 2%NaOH萃取 Al2O3柱净化 沉淀物 80%乙醇洗脱 环己烷-丙酮溶解 洗脱液 NaOH液 乙醚液 浓缩，放置，析晶 样品 酸化，过滤 回收溶剂 硅胶柱层析 环己烷-丙酮洗脱 白藜芦醇葡萄糖苷 收集橙色色带 大黄素-6甲醚 中性脂溶性成分 洗脱液 回收溶剂至干 少量乙醇溶解 大黄素乙醇液 五、溶剂、试剂、展开剂及显色剂 1.原料：虎杖粗粉50g 8
8 根据游离蒽醌与苷溶解性能的差异，先用乙醚萃取出游离蒽醌等脂溶性成 份，从而使脂溶性成分（苷元）和水溶性成份（苷）得到分离。再根据虎掌中蒽 醌类成分由于结构中酚羟基数目及位置不同而成不同强度的酸性，用碱性递加的 的水溶液（5%NaHCO3，5%Na2CO3，2%NaOH）自乙醚中提出不同酸性强弱的 游离蒽醌类成分，达到分离的目的。 四、提取分离流程 虎杖粗粉 乙醇提取 乙醇提取液 回收乙醇 浸膏 加水稀释，乙醚萃取 水层 活性炭脱色，趁热过滤 乙醚层 5%NaHCO3萃取 滤液 放冷 乙酸乙酯萃取 乙酸乙酯液 回收溶剂 残留物 Al2O3柱净化 80%乙醇洗脱 洗脱液 浓缩，放置，析晶 白藜芦醇葡萄糖苷 NaHCO3液 （弃去） 乙醚液 5%Na2CO3萃取 Na2CO3液 乙醚液 酸化,过滤 2%NaOH萃取 沉淀物 NaOH液 酸化，过滤 大黄素-6-甲醚 乙醚液 回收溶剂 中性脂溶性成分 环己烷-丙酮溶解 样品 硅胶柱层析 环己烷-丙酮洗脱 收集橙色色带 洗脱液 回收溶剂至干 少量乙醇溶解 大黄素乙醇液 五、溶剂、试剂、展开剂及显色剂 1. 原料：虎杖粗粉 50g